松花粉多糖酯化前后对H22荷瘤小鼠抗肿瘤及免疫调节的研究

发布时间：2021-05-13 21:13

　　云南松（Pinus yunnanensis）花粉多糖及硫酸酯化多糖在体外细胞水平上的研究较多,实验室前期的实验表明松花粉多糖及硫酸酯化多糖能够在体外促进巨噬细胞的增殖并活化其免疫作用,且表明能够通过细胞周期阻滞的方式抑制人肝癌细胞HepG2的增殖。本实验对松花粉多糖及硫酸酯化多糖的抗肿瘤作用及免疫影响进行研究,将体外与体内实验结合起来进行探究,建立小鼠H22肝癌移植模型,并且对小鼠血清进行核磁共振分析,结合代谢组学分析荷瘤小鼠在松花粉多糖及酯化多糖作用前后对体外H22细胞、荷瘤小鼠血清细胞因子及血清中的代谢物质的影响,共同探究酯化前后的松花粉在抗肿瘤方面的作用及差异。一、对云南松花粉多糖进行提取、检测以及纯化。对多糖的提取采用的是热水浸提法,利用三氯乙酸去除蛋白质,用不同浓度的乙醇进行分级沉淀,得到60%的乙醇所沉淀出来的多糖,并将其命名为PPM60。对其进行多糖含量的测定,测得多糖含量为44.02%。利用常压制备色谱技术对PPM60进行分离纯化,并得到五个多糖组分,同样利用常压色谱技术对得到的五个多糖组分进行纯度检测,最终选用纯度及活性较合适的第三组分,并将其命名为PC。二、对PC进... 

【文章来源】：山东师范大学山东省

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 综述
    1 松花粉
    2 多糖和硫酸酯化多糖以及其在抗肿瘤方面的研究现状
        2.1 多糖及其研究现状
        2.2 硫酸化多糖及其研究现状
    3 基于核磁共振(NMR)技术的代谢组学
    4 本课题的研究基础,研究目的及研究意义
第二章 松花粉粗多糖的分离纯化、硫酸酯化以及检测
    1 材料与试剂
    2 仪器与设备
    3 实验步骤
        3.1 制备云南松花粉多糖
        3.2 破壁松花粉粗多糖含量的测定
        3.3 常压制备色谱分析技术分离纯化松花粉粗多糖
        3.4 对分离纯化的松花粉粗多糖进行纯度检测
        3.5 制备磺化试剂
        3.6 松花粉多糖的硫酸酯化、脱氨以及纯化
        3.7 硫酸酯化多糖取代度的检测
        3.8 红外光谱检测
    4 实验结果
        4.1 松花粉多糖含量为44.02%
        4.2 松花粉多糖的分离结果
        4.3 松花粉多糖的纯度检测
    5 松花粉多糖(PC)的硫酸酯化及红外光谱检测
        5.1 硫酸酯化多糖(SPC)取代度为1.7
        5.2 PC和 SPC红外光谱检测
    6 讨论
第三章 多糖酯化前后对H22细胞活性、细胞迁移以及细胞周期的影响
    1 材料和试剂
    2 仪器与设备
    3 方法步骤
        3.1 试剂配制
        3.2 细胞培养
        3.3 MTT实验
        3.4 细胞划痕愈合实验
        3.5 流式细胞仪(FCM)检测H22 细胞周期
        3.6 荧光定量PCR检测细胞周期相关基因mRNA表达量
    4 实验结果
        4.1 MTT结果表明PC和 SPC均能抑制H22 细胞的增殖
        4.2 PC和 SPC对 H22 细胞划痕愈合能力具有抑制作用
        4.3 PC和 SPC引起H22 细胞周期阻滞
        4.4 多糖酯化前后对H22 细胞周期有关基因表达量的影响
    5 讨论
第四章 多糖酯化前后对H22荷瘤小鼠的影响
    1 材料与试剂
        1.1 实验动物及细胞系
        1.2 主要试剂及仪器
    2 实验过程
        2.1 细胞培养与小鼠腹水传代
        2.2 BALB/C小鼠H22 肝癌移植模型建立
        2.3 预实验
        2.4 正式实验
        2.5 小鼠血清细胞因子的测定
        2.6 小鼠血清核磁共振(~1H-NMR)预处理
        2.7 ~1H-NMR实验条件及谱图分析
    3 实验结果
        3.1 多糖及硫酸酯化多糖对荷瘤小鼠瘤重的影响
        3.2 血清中细胞因子的测定
        3.3 血清核磁共振(1H-NMR)检测
        3.4 核磁差异性代谢物分析
        3.5 代谢通路分析
    4 讨论
结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]二甲双胍对Eca-109食管癌细胞迁移能力的影响及机制研究[J]. 于敬坤,韩学超,李明志,随振阳,张琪,王长友.  陕西医学杂志. 2019(02)
[2]核磁共振波谱在肿瘤诊断与治疗中的应用[J]. 李明新.  中外女性健康研究. 2018(22)
[3]甘草水提物干预D-半乳糖致衰老大鼠的肝脏代谢组学研究[J]. 赵凡凡,李肖,高丽,秦雪梅,杜冠华,周玉枝.  中草药. 2017(17)
[4]应用核磁共振技术结合多维变量分析腮腺癌患者血浆的代谢组变化[J]. 于丽,宋具昆,王亚东,黄伟琨,王悦,扬文龙.  贵州医药. 2017(08)
[5]代谢组学技术在肝毒性生物标志物筛选中的应用[J]. 李胜男,原永芳.  医学综述. 2017(11)
[6]细胞周期调节因子基因在H9c2心肌细胞肥大过程中的时相性表达变化[J]. 李敬美,丁圆媛,潘夕春,刘雅,陈晓红,张海港.  中国药理学通报. 2017(01)
[7]动态代谢组学数据分析方法介绍[J]. 王文佶,张秋菊,曲思杨,谢彪,高兵,孙琳,刘美娜.  中国卫生统计. 2016(06)
[8]槲皮素抗乳腺癌作用机制的研究进展[J]. 柯昌虎,朱雪松,朱军,郑芳,李志浩,姜雪强.  中国医院药学杂志. 2016(16)
[9]基于细胞凋亡研究桔梗元参汤含药血清对炎性气道黏液高分泌的抑制作用[J]. 高健美,夏昌英,雷鸣,杨俊,李艳茹.  中药药理与临床. 2015(03)
[10]体外胚胎培养液代谢组学分析在评价胚胎发育潜能的研究进展[J]. 谭小方,金华,丁家怡.  山东医药. 2015(01)

硕士论文
[1]松花粉硫酸酯化多糖作用于RAW264.7细胞表面受体的研究[D]. 李慧.山东师范大学 2018



本文编号：3184714