扶芳藤黄酮提取纯化及其对衰老模型的影响

发布时间：2021-05-17 13:03

　　目的:运用现代中药学研究方法、采用小鼠模型试验、体外细胞培养技术等分子生物学实验技术,探索壮瑶民族常用药扶芳藤黄酮的提取工艺并研究其对衰老模型的影响来探究其可能的抗衰老作用机制,为进一步开发作用机制明确的新型抗衰老及衰老相关疾病药物提高理论依据。方法:（1）以超声辅助提取-乙酸乙酯萃取-D101大孔树脂吸附为提取方法,通过单因素试验,分别得到扶芳藤总黄酮提取的最佳反应温度、最佳料液比、最佳反应时间,在此基础上,以扶芳藤总黄酮含量为评价指标,以反应温度、料液比、提取时间为影响因素,正交试验L9（3³）法优化提取工艺,确定扶芳藤总黄酮提取的最佳条件。并在此条件下,对扶芳藤总黄酮进行提取分离纯化。（2）构建D-半乳糖诱导衰老小鼠模型,取60只健康雄性昆明小鼠,随机分为6组,即正常组、模型组、黄芪多糖阳性对照组（40mg/kg）、扶芳藤总黄酮提取物浓度高（0.8g/ml）、中（0.4g/ml）、低（0.2g/ml）剂量组。在6周喂养后,检测各组小鼠血清、心肌组织及肝组织中的过氧化氢酶（CAT）、总抗氧化能力（T-AOC）以及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的活性。（3）... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
前言
实验一 扶芳藤总黄酮提取工艺优化及提纯纯化
    1 材料与仪器
        1.1 实验药材来源
        1.2 实验试剂
        1.3 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 测定波长的确定
        2.2 标准曲线绘制
        2.3 扶芳藤总黄酮的提取
            2.3.1 样品材料预处理
            2.3.2 超声波提取
            2.3.3 萃取
        2.4 单因素试验提取条件的确定
            2.4.1 提取温度对扶芳藤总黄酮含量的影响
            2.4.2 料液比对扶芳藤总黄酮含量的影响
            2.4.3 提取时间对扶芳藤总黄酮含量的影响
        2.5扶芳藤总黄酮提取的正交实验
        2.6 扶芳藤总黄酮的纯化
            2.6.1 D101大孔树脂吸附
            2.6.2 总黄酮含量测定
        2.7 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 波长的确定结果
        3.2 标准曲线绘制
        3.3 单因素实验结果
            3.3.1 提取温度对扶芳藤总黄酮含量的影响
            3.3.2 料液比对扶芳藤总黄酮含量的影响
            3.3.3 提取时间对扶芳藤总黄酮含量的影响
        3.4 正交实验结果
        3.5 扶芳藤总黄酮提取结果
    4 分析与讨论
实验二 扶芳藤总黄酮提取物对D-半乳糖诱导衰老小鼠的影响
    1 材料与仪器
        1.1 实验动物和药物来源
        1.2 实验试剂
    2 实验方法
        2.1 动物分组与给药
        2.2 样本的采集
        2.3 生化指标的测定
            2.3.1 总蛋白浓度测定
            2.3.2 过氧化氢酶(CAT)活性
            2.3.3 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性
            2.3.4 总抗氧化能力(T-AOC)活性
        2.4 统计学分析
    3 结果
        3.1 D-半乳糖诱导衰老小鼠模型的建立
        3.2 BCA标准蛋白曲线
        3.3 扶芳藤总黄酮提取物对D-半乳糖诱导衰老小鼠血清中T-AOC、CAT、GSH-PX的影响
        3.4 扶芳藤总黄酮提取物对D-半乳糖诱导衰老小鼠心肌组织中T-AOC、CAT、GSH-PX的影响
        3.5 扶芳藤总黄酮提取物对D-半乳糖诱导衰老小鼠肝组织中T-AOC、CAT、GSH-PX的影响
    4 讨论与分析
实验三 扶芳藤黄酮单体提取分离纯化
    1 材料与仪器
        1.1 实验试剂
        1.2 仪器与设备
    2 实验方法
        2.1 药材预处理
        2.2 大孔树脂分离
        2.3 HPLC色谱条件
        2.4 HPLC过程
        2.5 液相-质谱联用条件
        2.6 液相-质谱联用鉴定
    3 结果
        3.1 HPLC提纯纯化结果
        3.2 各个样品的HPLC图谱
    4 分析与讨论
实验四 扶芳藤黄酮对血管紧张素Ⅱ诱导衰老HUVEC细胞的影响
    1 试剂与仪器
        1.1 细胞来源
        1.2 试剂与试剂盒
        1.3 仪器与设备
        1.4 溶液配制
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 细胞传代
        2.3 细胞计数
        2.4 细胞冻存
        2.5 细胞复苏
        2.6 血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老模型
        2.7 MTT法检测扶芳藤黄酮单体对血管紧张素Ⅱ诱导衰老HUVEC细胞增殖的影响
        2.8 β-半乳糖苷酶染色法检测扶芳藤黄酮单体对血管紧张素Ⅱ诱导衰老HUVEC细胞增殖的影响
        2.9 统计学分析
    3 结果
        3.1 血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞诱导衰老模型的建立
        3.2 AngⅡ诱导HUVEC细胞诱导衰老模型建立的条件摸索
        3.3 MTT法检测结果
        3.4 β-半乳糖苷酶染色法检测结果
    4 分析与讨论
全文小结
参考文献
综述
    综述参考文献
英文缩略对照表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]藏紫菀总黄酮对缺氧诱导的心肌损伤的保护作用[J]. 何蕾,马慧萍,景临林,贾正平.  中华中医药杂志. 2019(04)
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[3]用不同方法提取七叶一枝花总黄酮及抗氧化研究[J]. 张玉霖,余海峰,肖若蕾,陈莉,陈锦红,张又枝.  中国临床药理学杂志. 2019(06)
[4]UPLC-PDA法同时测定半枝莲-白花蛇舌草药对中3种成分[J]. 赖昌威,张蜀,邓红,吴国卫,闵杰,阮沛桦.  中成药. 2019(03)
[5]维药高孜班提取物对D-半乳糖致衰老小鼠模型的作用[J]. 阿娜古丽·马合木提,热比姑丽·伊斯拉木,曼尔丹·尼牙孜.  中国药业. 2019(05)
[6]动物源性食品中兽药残留检测研究[J]. 陈伟妍.  轻工科技. 2018(12)
[7]PI3K/Akt-eNOS信号通路在甘木通总黄酮后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤作用[J]. 聂阳,丁立,黄海潮,许良葵,赵晋,杨燕军.  中国中药杂志. 2018(23)
[8]新型共刺激分子B7-H4表达抑制对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响[J]. 何涛,胡洪,谢楠,钱程,李春满,唐波,付必莽,李文.  山东医药. 2018(29)
[9]芳香新塔花总黄酮抗氧化活性研究[J]. 申静,刘冲,杨伟俊,陈文.  北方园艺. 2018(09)
[10]血管紧张素Ⅱ诱导心肌损伤机制的研究进展[J]. 周娟,富路.  中国循证心血管医学杂志. 2018(03)

博士论文
[1]基于奖赏操作的慢性束缚应激所致大鼠认知功能损伤及Rg1，Rb1防护作用研究[D]. 王克柱.北京协和医学院 2016
[2]miRNA-720对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的作用及机制[D]. 李辉.中南大学 2013
[3]薏苡仁提取物抗肿瘤新靶点及降血脂抗氧化活性研究[D]. 于飞.天津大学 2010

硕士论文
[1]板蓝根多糖对醋酸铅致小鼠损伤的保护作用研究[D]. 樊永恒.河南农业大学 2018
[2]人参叶多糖的提取工艺及其对断奶仔猪生产性能的影响研究[D]. 黄彦.华南农业大学 2018
[3]小鼠博来霉素多次染毒肺纤维化模型建立及ABT263治疗作用观察[D]. 陈孟毅.北京协和医学院 2017
[4]扶芳藤化学成分研究[D]. 杨颖达.中南民族大学 2010
[5]生长抑素类似物奥曲肽对人脐静脉内皮细胞增殖影响的实验研究[D]. 余继海.安徽医科大学 2003



本文编号：3191812