花鹿茸总蛋白增强顺铂抗前列腺癌PC-3M及拮抗顺铂肾毒性的研究

发布时间：2021-05-20 07:59

　　药典记载,鹿茸具有壮肾阳、益精血等功效。顺铂是常见的抗肿瘤化疗药,但因其肾毒性而在临床应用上得到限制。药理实验证明,鹿茸提取物对顺铂诱导的小鼠肾毒性有一定的改善作用,但其有效成分并不明确。本文探究花鹿茸中与顺铂联用对其起减毒增效作用的有效成分及其机制。采用超声辅助法和水提醇沉法提取梅花鹿二杠茸中水溶性总蛋白和总多糖成分,通过Bradford法和苯酚硫酸法分别对其进行纯度测定。实验结果得花鹿茸水溶性总蛋白的纯度为86.35%,花鹿茸总多糖纯度为82.45%。研究花鹿茸中水溶性成分的抗肿瘤活性及其机制。采用MTT法进行花鹿茸总蛋白和花鹿茸总多糖对人肝癌细胞（HepG2）、人肺癌细胞（NCI-H460）和人前列腺癌（PC-3M）抗肿瘤活性的筛选,同时测定花鹿茸总蛋白和花鹿茸总多糖对人胚肾细胞（HEK 293）的细胞毒性。通过平板克隆实验、流式细胞术和Western蛋白印迹法进行花鹿茸蛋白对PC-3M细胞抗肿瘤活性的机制研究。MTT法结果表明,花鹿茸总蛋白(200-800μg·mL^-1)对PC-3M有明显抑制作用（P<0.01）,对HepG2和NCI-H460无明显... 

【文章来源】：吉林农业大学吉林省

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
前言
第一章 中药抗肿瘤机制和减轻顺铂肾毒性机制研究概况
    1.1 中药抗肿瘤机制研究
        1.1.1 诱导肿瘤细胞凋亡
        1.1.2 抑制肿瘤细胞的侵袭和转移
        1.1.3 改善机体免疫功能
        1.1.4 抑制肿瘤端粒酶活性
    1.2 中药减轻CDDP肾毒性的机制研究
        1.2.1 CDDP肾毒性的病理机制
        1.2.2 CDDP诱导的肾毒性的分子机制
    1.3 展望
第二章 花鹿茸水溶性有效部位的提取
    2.1 实验用品
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 实验试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 花鹿茸水溶性总蛋白和总多糖的提取
        2.2.2 Bradford法测定鹿茸水溶性蛋白含量
        2.2.3 苯酚-硫酸法测定鹿茸水溶性多糖含量
    2.3 实验结果
        2.3.1 BSA标准曲线
        2.3.2 葡萄糖标准曲线
        2.3.3 鹿茸水溶性蛋白和多糖的纯度
    2.4 讨论
第三章 花鹿茸总蛋白和总多糖与顺铂联用的体外抗肿瘤活性的研究
    3.1 实验用品
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验仪器
        3.1.3 实验试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 样品溶液的配制
        3.2.2 抗肿瘤活性的筛选
        3.2.3 平板克隆实验
        3.2.4 流式细胞实验
        3.2.5 Western蛋白印迹法测定凋亡相关蛋白的表达
        3.2.6 统计学分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 花鹿茸总蛋白和总多糖的体外抗肿瘤活性的影响
        3.3.2 花鹿茸总蛋白对PC-3M细胞增殖的影响
        3.3.3 花鹿茸总蛋白对PC-3M细胞凋亡的影响
    3.4 讨论
第四章 花鹿茸总蛋白减轻顺铂诱导HEK293细胞毒性的研究
    4.1 实验用品
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验仪器
        4.1.3 实验试剂
    4.2 实验内容
        4.2.1 样品溶液的配制
        4.2.2 细胞活力的测定
        4.2.3 氧化应激指标的测定
        4.2.4 炎症因子的测定
        4.2.5 Western蛋白印迹法测定凋亡相关蛋白的表达
        4.2.6 TUNEL法检测细胞凋亡
        4.2.7 统计学分析
    4.3 实验结果
        4.3.1 花鹿茸总蛋白联合顺铂对HEK293细胞活力的影响
        4.3.2 花鹿茸总蛋白对顺铂诱导的细胞氧化应激反应的影响
        4.3.3 花鹿茸总蛋白对顺铂诱导的细胞炎症反应的影响
        4.3.4 花鹿茸总蛋白对顺铂诱导的细胞凋亡反应的影响
    4.4 讨论
第五章 花鹿茸总蛋白减轻顺铂诱导的小鼠肾毒性的研究
    5.1 实验用品
        5.1.1 实验材料
        5.1.2 实验仪器
        5.1.3 实验试剂
    5.2 实验内容
        5.2.1 样品溶液的配制
        5.2.2 实验动物分组和给药
        5.2.3 小鼠体质量变化、肾重指数和肾功能测定
        5.2.4 氧化应激指标的测定
        5.2.5 ELISA测定血清和肾脏中TNF-α和IL-6的水平
        5.2.6 Western蛋白印迹法检测细胞凋亡相关蛋白的表达
        5.2.7 HE染色观察组织病理学变化
        5.2.8 统计学处理
    5.3 实验结果
        5.3.1 花鹿茸总蛋白对顺铂诱导小鼠体质量变化、肾重指数及肾功能的影响
        5.3.2 花鹿茸总蛋白对顺铂诱导氧化应激反应的影响
        5.3.3 花鹿茸总蛋白对TNF-α和IL-6水平的影响
        5.3.4 花鹿茸总蛋白对顺铂诱导细胞凋亡的影响
        5.3.5 花鹿茸总蛋白对顺铂诱导肾组织病理学变化的影响
    5.4 讨论
第六章 花鹿茸蛋白的体内安全性实验评价
    6.1 实验用品
        6.1.1 实验材料
        6.1.2 实验仪器
        6.1.3 实验试剂
    6.2 实验内容
        6.2.1 急性口服毒性实验
        6.2.2 骨髓微核实验
        6.2.3 精子畸变实验
        6.2.4 统计学分析
    6.3 实验结果
        6.3.1 花鹿茸总蛋白的急性口服毒性实验结果
        6.3.2 花鹿茸总蛋白的骨髓微核实验结果
        6.3.3 花鹿茸总蛋白的精子畸变实验结果
    6.4 讨论
结论
参考文献
作者简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3197409