人参皂苷Rg3干预实验性脉络膜新生血管形成的作用研究
发布时间：2021-05-24 04:39
第一部分人参皂苷Rg3对VEGF诱导RF/6A细胞增殖、迁移及管腔形成的影响目的观察人参皂苷Rg3对VEGF诱导的猴脉络膜视网膜内皮细胞（RF/6A）增殖、移行及管腔形成生物学特征的影响,以初步探讨人参皂苷Rg3对脉络膜新生血管（CNV）形成的干预作用,为临床应用人参皂苷Rg3治疗CNV提供体外实验基础。方法1.CCK-8法检测不同浓度人参皂苷Rg3对正常RF/6A细胞增殖活性的影响,确定人参皂苷Rg3安全作用浓度。2.CCK-8法检测不同浓度VEGF对RF/6A细胞的增殖作用,筛选VEGF最佳作用浓度及时间点。3.CCK-8法检测人参皂苷Rg3、康柏西普对VEGF诱导RF/6A细胞增殖的抑制作用,选择人参皂苷Rg3和康柏西普最佳作用浓度。4.将RF/6A细胞分为正常细胞组、VEGF诱导组、VEGF+康柏西普组、VEGF+人参皂苷Rg3组及VEGF+康柏西普+人参皂苷Rg3（联合组）5组,通过CCK-8法检测各组不同干预对细胞增殖活性的影响。5.应用细胞划痕实验检测各组干预对细胞移行能力的影响。6.应用Matrigel管腔形成实验检测各组干预对细胞管腔形成能力的影响。结果1.CCK-8...
【文章来源】：中国中医科学院北京市
【文章页数】：110 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文缩略词对照
文献综述
综述一：人参皂苷抗眼新生血管的研宂进展
参考文献
综述二：脉络膜新生血管动物模型建立的研宄现状
参考文献
前言
参考文献
第一部分 人参皂苷Rg3对VEGF诱导的RF/6A细胞增殖、迁移及管腔形成的影响
1 实验材料
1.1 实验细胞
1.2 实验药物
1.3 实验试剂
1.4 实验仪器
2 实验方法
2.1 实验药物及主要试剂的配制
2.2 细胞培养
2.3 CCK-8法检测人参皂苷Rg3对RF/6A细胞活性的影响
2.4 CCK-8法检测VEGF对RF/6A细胞增殖的作用
2.5 CCK-8法检测康柏西普对VEGF诱导的RF/6A细胞增殖的影响
2.6 CCK-8法检测人参皂苷Rg3对VEGF诱导的RF/6A细胞增殖的影响
2.7 细胞划痕损伤修复实验
2.8 Mαtrigel管腔形成实验
2.9 统计学分析
3 实验结果
3.1 RF/6A血管内皮细胞形态学特征
3.2 CCK-8法检测人参皂苷Rg3对RF/6A细胞活性的影响
3.3 不同浓度VEGF对RF/6A细胞增殖的作用
3.4 不同浓度康柏西普对VEGF诱导RF/6A细胞增殖作用的影响
3.5 人参皂苷Rg3对VEGF诱导的RF/6A细胞增殖作用的影响
3.6 细胞划痕损伤修复实验结果
3.7 Matrigel管腔形成实验结果
4 讨论
4.1 人参皂苷Rg3对RF/6A细胞增殖的影响
4.2 VEGF诱导对RF/6A细胞增殖的影响
4.3 人参皂苷Rg3对VEGF诱导后RF/6A细胞增殖的影响
4.4 人参皂苷Rg3对VEGF诱导后RF/6A细胞移行能力的影响
5 小结
参考文献
第二部分 人参皂苷Rg3干预BN大鼠CNV形成的作用及机制研究
第一节 应用532nm激光建立BN大鼠脉络膜新生血管模型
1 实验材料
1.1 动物
1.2 试剂
1.3 仪器和设备
2 实验方法
2.1 动物分组
2.2 激光光凝
2.3 眼底FFA与ICGA检查
2.4 HE染色观察视网膜脉络膜组织病理学变化
2.5 统计分析
3 结果
3.1 眼底FFA与ICGA观察结果
3.2 HE染色结果
4 讨论
4.1 激光光凝诱导大鼠CNV的主要机制
4.2 眼底FFA和ICGA观察
4.3 组织病理学观察
5 结论
参考文献
第二节 NF-κB和HIF-1α信号通路在BN大鼠CNV模型中的表达
1 实验材料
1.1 动物
1.2 试剂
1.3 仪器和设备
2 实验方法
2.1 实验分组
2.2 激光光凝
2.3 ELISA法检测大鼠血清中NF-κB、TNF-α、HIF-1α和VEGF蛋白表达
2.4 RT-qRCR法检测视网膜脉络膜中NF-κB、TNF-α HIF-1α和VEGFmRNA相对表达水平
2.5 Westen Blot法检测视网膜脉络膜中NF-κB、TNF-α、HIF-1α和VEGF蛋白相对表达水平
2.6 统计分析
3 结果
3.1 ELISA法检测结果
3.2 实时荧光定量PCR检测结果
3.3 Western Blot法检测结果
4 讨论
4.1 实验观察时间点的选择
4.2 实验观察细胞因子的选择
4.3 大鼠血清中相关因子的表达
4.4 大鼠视网膜脉络膜组织中相关因子的表达
5 结论
参考文献
第三节 人参皂苷Rg3对532nm激光诱导BN大鼠CNV的影响
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 实验药物
1.3 实验试剂
2 实验方法
2.1 实验药物配制
2.2 实验模型建立
2.3 实验分组
2.4 实验药物干预
2.5 实验观察时间
2.6 眼底FFA与ICGA检查
2.7 HE染色观察视网膜脉络膜组织病理学变化
2.8 RT-qPCR法检测视网膜脉络膜复合体组织中NF-κB、TNF-α、HIF-1α和VEGF在mRNA水平的表达
2.9 Western blot法检测视网膜脉络膜复合体组织中NF-κB、TNF-α、HIF-1α和VEGF蛋白的表达
2.10 统计分析
3 结果
3.1 FFA和ICGA结果
3.2 HE染色观察视网膜脉络膜组织病理学变化结果
3.3 实时荧光定量PCR法检测各组待测因子在mRNA水平表达结果
3.4 Western blot检测各组待测因子蛋白表达结果
4 讨论
4.1 AMD并发CNV的发生发展
4.2 AMD并发CNV的中医认识
4.3 AMD并发CNV的治疗现状
4.4 CNV与人参皂苷Rg3
5 结论
参考文献
第三部分 全文结论
创新性
不足与展望
致谢
攻读学位期间学术表现
附件
本文编号：3203570
【文章来源】：中国中医科学院北京市
【文章页数】：110 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文缩略词对照
文献综述
综述一：人参皂苷抗眼新生血管的研宂进展
参考文献
综述二：脉络膜新生血管动物模型建立的研宄现状
参考文献
前言
参考文献
第一部分 人参皂苷Rg3对VEGF诱导的RF/6A细胞增殖、迁移及管腔形成的影响
1 实验材料
1.1 实验细胞
1.2 实验药物
1.3 实验试剂
1.4 实验仪器
2 实验方法
2.1 实验药物及主要试剂的配制
2.2 细胞培养
2.3 CCK-8法检测人参皂苷Rg3对RF/6A细胞活性的影响
2.4 CCK-8法检测VEGF对RF/6A细胞增殖的作用
2.5 CCK-8法检测康柏西普对VEGF诱导的RF/6A细胞增殖的影响
2.6 CCK-8法检测人参皂苷Rg3对VEGF诱导的RF/6A细胞增殖的影响
2.7 细胞划痕损伤修复实验
2.8 Mαtrigel管腔形成实验
2.9 统计学分析
3 实验结果
3.1 RF/6A血管内皮细胞形态学特征
3.2 CCK-8法检测人参皂苷Rg3对RF/6A细胞活性的影响
3.3 不同浓度VEGF对RF/6A细胞增殖的作用
3.4 不同浓度康柏西普对VEGF诱导RF/6A细胞增殖作用的影响
3.5 人参皂苷Rg3对VEGF诱导的RF/6A细胞增殖作用的影响
3.6 细胞划痕损伤修复实验结果
3.7 Matrigel管腔形成实验结果
4 讨论
4.1 人参皂苷Rg3对RF/6A细胞增殖的影响
4.2 VEGF诱导对RF/6A细胞增殖的影响
4.3 人参皂苷Rg3对VEGF诱导后RF/6A细胞增殖的影响
4.4 人参皂苷Rg3对VEGF诱导后RF/6A细胞移行能力的影响
5 小结
参考文献
第二部分 人参皂苷Rg3干预BN大鼠CNV形成的作用及机制研究
第一节 应用532nm激光建立BN大鼠脉络膜新生血管模型
1 实验材料
1.1 动物
1.2 试剂
1.3 仪器和设备
2 实验方法
2.1 动物分组
2.2 激光光凝
2.3 眼底FFA与ICGA检查
2.4 HE染色观察视网膜脉络膜组织病理学变化
2.5 统计分析
3 结果
3.1 眼底FFA与ICGA观察结果
3.2 HE染色结果
4 讨论
4.1 激光光凝诱导大鼠CNV的主要机制
4.2 眼底FFA和ICGA观察
4.3 组织病理学观察
5 结论
参考文献
第二节 NF-κB和HIF-1α信号通路在BN大鼠CNV模型中的表达
1 实验材料
1.1 动物
1.2 试剂
1.3 仪器和设备
2 实验方法
2.1 实验分组
2.2 激光光凝
2.3 ELISA法检测大鼠血清中NF-κB、TNF-α、HIF-1α和VEGF蛋白表达
2.4 RT-qRCR法检测视网膜脉络膜中NF-κB、TNF-α HIF-1α和VEGFmRNA相对表达水平
2.5 Westen Blot法检测视网膜脉络膜中NF-κB、TNF-α、HIF-1α和VEGF蛋白相对表达水平
2.6 统计分析
3 结果
3.1 ELISA法检测结果
3.2 实时荧光定量PCR检测结果
3.3 Western Blot法检测结果
4 讨论
4.1 实验观察时间点的选择
4.2 实验观察细胞因子的选择
4.3 大鼠血清中相关因子的表达
4.4 大鼠视网膜脉络膜组织中相关因子的表达
5 结论
参考文献
第三节 人参皂苷Rg3对532nm激光诱导BN大鼠CNV的影响
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 实验药物
1.3 实验试剂
2 实验方法
2.1 实验药物配制
2.2 实验模型建立
2.3 实验分组
2.4 实验药物干预
2.5 实验观察时间
2.6 眼底FFA与ICGA检查
2.7 HE染色观察视网膜脉络膜组织病理学变化
2.8 RT-qPCR法检测视网膜脉络膜复合体组织中NF-κB、TNF-α、HIF-1α和VEGF在mRNA水平的表达
2.9 Western blot法检测视网膜脉络膜复合体组织中NF-κB、TNF-α、HIF-1α和VEGF蛋白的表达
2.10 统计分析
3 结果
3.1 FFA和ICGA结果
3.2 HE染色观察视网膜脉络膜组织病理学变化结果
3.3 实时荧光定量PCR法检测各组待测因子在mRNA水平表达结果
3.4 Western blot检测各组待测因子蛋白表达结果
4 讨论
4.1 AMD并发CNV的发生发展
4.2 AMD并发CNV的中医认识
4.3 AMD并发CNV的治疗现状
4.4 CNV与人参皂苷Rg3
5 结论
参考文献
第三部分 全文结论
创新性
不足与展望
致谢
攻读学位期间学术表现
附件
本文编号：3203570
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