小檗碱经FXR/LXRα调控OATP1B1的表达及其机制研究

发布时间：2021-06-08 06:12

　　背景:小檗碱是一种喹啉类生物碱,研究报道其可通过核受体调控转运体的表达。他汀类药物与小檗碱联合运用可增强降脂作用,减少他汀类药物的用量,降低他汀类不良反应的风险。有研究表明,他汀类主要通过OATPs转运进入肝脏从而发挥降血脂作用,且OATPs的表达受核受体调控。那么小檗碱是否可通过介导核受体来调控OATPs的表达,从而影响他汀类药物的摄取,有待进一步研究。目的:本研究旨在探讨小檗碱与他汀类药物联合用药时发生的药物相互作用机制,为深入探究临床小檗碱合理用药与联合用药提供理论基础与科学依据。方法:1.通过RT-qPCR、Western blot等实验技术,探究小檗碱对HepG2细胞中OATP1B1和OATP1B3的mRNA和蛋白表达及对FXR和LXRα在细胞中的表达和分布的影响。2.通过HPLC-MS/MS实验技术,探究小檗碱对HepG2细胞摄取瑞舒伐他汀的影响。3.通过双荧光素酶报告基因法,探究在过表达FXR或LXRα的HepG2细胞中小檗碱对FXR/LXRα-OATP1B1调控通路的影响机制。4.通过小干扰RNA技术,探究在沉默FXR或LXRα的HepG2细胞中小檗碱对OATP1B1蛋... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 小檗碱对HepG2 细胞中OATP1B1和OATP1B3 表达的影响
    2.1 材料
        2.1.1 细胞株和质粒
        2.1.2 主要药品
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器设备
    2.2 方法
        2.2.1 主要工作液的配置
        2.2.2 HepG2 细胞的培养及其生长曲线的绘制
        2.2.3 小檗碱对HepG2细胞的毒性实验
        2.2.4 细胞样品蛋白的含量测定
        2.2.5 小檗碱对HepG2 细胞中OATP1B1和OATP1B3 表达的影响
        2.2.6 数据处理与统计分析
    2.3 结果
        2.3.1 HepG2 细胞形态学及生长曲线
        2.3.2 HepG2细胞的毒性实验
        2.3.3 细胞样品蛋白的含量测定结果
        2.3.4 RNA纯度和完整性鉴定结果
        2.3.5 扩增产物特异性
        2.3.6 小檗碱干预对HepG2 细胞中OATP1B1和OATP1B3 mRNA表达的影响
        2.3.7 小檗碱干预对HepG2 细胞中OATP1B1和OATP1B3 蛋白表达的影响
    2.4 讨论
第3章 小檗碱对HepG2 细胞摄取RSV的影响
    3.1 材料
        3.1.1 细胞株
        3.1.2 主要药品
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 主要仪器和设备
    3.2 方法
        3.2.1 主要工作液的配制
        3.2.2 HepG2 细胞的培养
        3.2.3 细胞样品中RSV的方法学评价及细胞样品中浓度测定
        3.2.4 RSV在 HepG2 细胞中摄取条件的探索
        3.2.5 小檗碱对HepG2 细胞摄取RSV的影响研究
        3.2.6 数据处理与统计分析
    3.3 结果
        3.3.1 细胞样品中RSV浓度测定的方法学评价结果
        3.3.2 RSV在 HepG2 细胞中摄取条件的探索结果
        3.3.3 小檗碱对HepG2 细胞摄取RSV的影响
    3.4 讨论
第4章 LXRα和 FXR的激活对小檗碱上调OATP1B1 的影响
    4.1 材料
        4.1.1 细胞株和质粒
        4.1.2 主要药品
        4.1.3 主要试剂
        4.1.4 主要仪器设备
    4.2 方法
        4.2.1 主要工作液的配置
        4.2.2 HepG2 细胞的培养
        4.2.3 质粒的构建及提取
        4.2.4 瞬时共转染
        4.2.5 双荧光素酶报告基因活性的检测
        4.2.6 核受体对OATP1B1 的表达影响
        4.2.7 基于核受体通路探究小檗碱对OATP1B1 表达的影响
        4.2.8 沉默hFXR或 hLXRα对小檗碱调控OATP1B1 表达的影响
        4.2.9 数据处理与统计分析
    4.3 结果
        4.3.1 核受体激动剂对HepG2 细胞中OATP1B1 表达的影响
        4.3.2 基于hFXR/LXRα-OATP1B1 双荧光素酶报告基因模型的鉴定
        4.3.3 小檗碱对瞬时共转染hFXR/hLXRα的 HepG2 细胞中OATP1B1 报告基因的影响
        4.3.4 沉默FXR或 LXRα对小檗碱调控OATP1B1 表达的影响
    4.4 讨论
第5章 小檗碱对HepG2 细胞中FXR和 LXRα表达的影响
    5.1 材料
        5.1.1 细胞株和质粒
        5.1.2 主要药品
        5.1.3 主要试剂
        5.1.4 主要仪器设备
    5.2 方法
        5.2.1 主要工作液的配置
        5.2.2 HepG2 细胞的培养
        5.2.3 核膜蛋白的提取
        5.2.4 小檗碱对FXR和 LXRα的激活效应
        5.2.5 数据处理与统计分析
    5.3 结果
        5.3.1 小檗碱对FXR和 LXRαmRNA和总蛋白表达的影响
        5.3.2 小檗碱诱导FXR和 LXRα核易位
    5.4 讨论
第6章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-1-3p/206/613对LXRα和OATP1B1蛋白表达的影响及其机制研究[J]. 叶容芳,刘名义,许玉,张艳丽,朱丹丹,丁薇,熊玉卿.  中国临床药理学与治疗学. 2018(08)
[2]黄连素对HepG2细胞CYP3A4和P-gp的影响和作用机制研究[J]. 唐霞,辛华雯,李维亮,欧阳萌.  中国临床药理学与治疗学. 2015(01)
[3]药物代谢性别差异及与核受体的关系[J]. 张松波,周宏灏.  中国药理学通报. 2007(03)
[4]孕烷受体的研究进展[J]. 余帮宁,周宏灏.  中国临床药理学杂志. 2005(01)



本文编号：3217833