温阳活血利水法对嘌呤霉素损伤足细胞的细胞骨架及相关蛋白的影响
发布时间：2021-06-29 01:40
目的:观察温阳活血利水方含药血清对嘌呤霉素损伤小鼠永生系足细胞组织蛋白酶L（Cathepsin L,Cat L）的转录因子Dendrin、膜相关鸟苷酸激酶转化蛋白2（Membrane-associated guanylate kinase inverted2,MAGI-2）、下游底物synaptopodin、RhoA的表达变化以及足细胞骨架蛋白actin、中间丝分布情况的影响,探讨温阳活血利水方的作用改善肾病综合征蛋白尿及足突融合的机制。方法:体外培养小鼠永生系足细胞MPC5,采用嘌呤霉素45mg/L损伤足细胞12h后分组,并设正常对照、中药血清空白对照,具体分组如下:A.正常对照组、B.模型组、C.中药血清空白对照组、D.地塞米松（1umol/l）组、E.10%中药血清组、F.20%中药血清组,孵育12小时,荧光定量PCR检测Synaptopodin、Cat L m RNA表达变化;western blotting测定MAGI-2、Synaptopodin、Cat L、RhoA的蛋白表达;细胞免疫荧光观察Dendrin、MAGI-2、Synaptopodin、Cat L、RhoA的表...
【文章来源】：湖北中医药大学湖北省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞中微丝、中间丝、微管之间连接在本实验荧光染色结果显示嘌呤霉素损伤足细胞后足细胞数目减少，伪足缩短甚至消失，细胞骨架微丝、中间丝结构紊乱，杂乱无序排列，地
图 2 正常足细胞足突与疾病状态下足细胞足突融合3.Dendrin（树突蛋白）及其下游相关蛋白在肾小球性蛋白尿发病机制中的作用控制和稳定 actin 骨架蛋白的分子理所当然对维持肾小球滤过功能非常重要。在过去 10 年中，很多足细胞 actin 相关的蛋白被发现，证实了动态 actin 骨架蛋白重组在维持完整滤过屏障关联性。MAGI-2（膜相关鸟苷酸激酶转化蛋白 2）是足细胞 actin 相关蛋白中的一种，同时是 SD 复合蛋白的复杂组成部分之一，属于 MAGUK（膜相关鸟苷酸激酶）家族，是上皮组织中紧密连接的含有多个结构域的支架蛋白[18]。MAGI-2 在大脑中高度表达，其次表达于睾丸和肾脏，在肾脏组织中仅表达于足细胞，定位于足突[18,19]。MAGI-2 能将细胞粘附分子、受体、和信号分子与细胞骨架相连来维持细胞间的结构。MAGI-2 在维持肾小球滤
Synaptopodin 基因的沉默引起 RhoA 蛋白表达的降低[31]，抑制足细胞骨架结构的重排和应力纤维的形成。在我们实验中，嘌呤霉素损伤足细胞后，synaptopodin 水平明显下降，与此同时，RhoA 蛋白表达也降低，但是 synaptopodin mRNA 没有明显变化，提示这可能与 MAGI-2 下降后，Dendrin 核转位，引起下游蛋白CatLmRNA 增加,CatL 水平增高，加强了 synaptopodin 酶解，从而因此足细胞 actin 与中间丝改变，足细胞形态发生改变。而温阳活血利水方能升高 MAGI-2 水平，抑制 Dendrin 核转位和 CatLmRNA 转录，降低 CatL 表达减少 synaptopodin 降解，RhoA 蛋白表达升高，从而改善足细胞形态。与我们实验结果类似，Ransom 等同样在嘌呤霉素损伤小鼠足细胞中发现，RhoA 活性水平下降，而糖皮质激素能升高 RhoA 活性，改善足细胞骨架蛋白稳定性[38]。
本文编号：3255458
【文章来源】：湖北中医药大学湖北省
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞中微丝、中间丝、微管之间连接在本实验荧光染色结果显示嘌呤霉素损伤足细胞后足细胞数目减少，伪足缩短甚至消失，细胞骨架微丝、中间丝结构紊乱，杂乱无序排列，地
图 2 正常足细胞足突与疾病状态下足细胞足突融合3.Dendrin（树突蛋白）及其下游相关蛋白在肾小球性蛋白尿发病机制中的作用控制和稳定 actin 骨架蛋白的分子理所当然对维持肾小球滤过功能非常重要。在过去 10 年中，很多足细胞 actin 相关的蛋白被发现，证实了动态 actin 骨架蛋白重组在维持完整滤过屏障关联性。MAGI-2（膜相关鸟苷酸激酶转化蛋白 2）是足细胞 actin 相关蛋白中的一种，同时是 SD 复合蛋白的复杂组成部分之一，属于 MAGUK（膜相关鸟苷酸激酶）家族，是上皮组织中紧密连接的含有多个结构域的支架蛋白[18]。MAGI-2 在大脑中高度表达，其次表达于睾丸和肾脏，在肾脏组织中仅表达于足细胞，定位于足突[18,19]。MAGI-2 能将细胞粘附分子、受体、和信号分子与细胞骨架相连来维持细胞间的结构。MAGI-2 在维持肾小球滤
Synaptopodin 基因的沉默引起 RhoA 蛋白表达的降低[31]，抑制足细胞骨架结构的重排和应力纤维的形成。在我们实验中，嘌呤霉素损伤足细胞后，synaptopodin 水平明显下降，与此同时，RhoA 蛋白表达也降低，但是 synaptopodin mRNA 没有明显变化，提示这可能与 MAGI-2 下降后，Dendrin 核转位，引起下游蛋白CatLmRNA 增加,CatL 水平增高，加强了 synaptopodin 酶解，从而因此足细胞 actin 与中间丝改变，足细胞形态发生改变。而温阳活血利水方能升高 MAGI-2 水平，抑制 Dendrin 核转位和 CatLmRNA 转录，降低 CatL 表达减少 synaptopodin 降解，RhoA 蛋白表达升高，从而改善足细胞形态。与我们实验结果类似，Ransom 等同样在嘌呤霉素损伤小鼠足细胞中发现，RhoA 活性水平下降，而糖皮质激素能升高 RhoA 活性，改善足细胞骨架蛋白稳定性[38]。
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