丹皮酚通过升高高血脂大鼠血浆外泌体miR-223抑制NLRP3炎性小体介导的大鼠内皮细胞炎症反应
发布时间：2021-07-01 12:28
目的首先明确Pae给药是否可以影响高血脂大鼠血脂水平,抑制炎性反应;进一步检测Pae-exo对RAECs的炎性反应的影响;最后探讨Pae-exo对RAECs是否通过调控mi R-223介导的NLRP3信号通路产生影响。方法采用高脂饲料喂养联合腹腔注射维生素D2复制高脂血症SD大鼠模型,采用酶法检测大鼠血清TC、TG含量,HE染色观察大鼠肝细胞脂质积累情况,超速离心法提取exo,透射电镜观察exo,Zeta view检测exo粒径,Western blot检测CD63、CD9、TSG101、Calnexin蛋白表达,HPLC检测exo中Pae含量。接着将大鼠血浆exo作用于原代RAECs细胞,免疫组化法检测第Ⅷ因子表达,免疫荧光显微镜观察RAECs对exo的摄取,CCK-8法检测RAECs活性,Elisa法检测IL-1β、IL-6水平,q PCR检测mi R-223表达,Western blot检测NLRP3、ASC、Caspase-1、ICAM-1蛋白表达。结果1丹皮酚抑制高血脂大鼠血脂含量及炎性介质水平实验采用高脂饲料喂养联合维生素D2腹腔...
【文章来源】：安徽中医药大学安徽省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
高脂大鼠模型鉴定（x±s，n=8）
图 2 Pae 抑制高血脂大鼠血脂含量及炎症介质的表达（ x ±s，n=A.Pae 抑制高血脂大鼠血脂含量；B.Pae 抑制高血脂大鼠血清炎症介质的表达Fig 2 Pae inhibits blood lipid levels and expression of inflammatory mediators （A.Pae inhibits blood lipid levels in hyperlipidemic rats;B.Pae inhibits the expinflammatory mediators in hyperlipidemic rats.（**P﹤0.01,*P﹤0.05 vs. C grou0.05 vs. M group）3.3 外泌体提取鉴定为了探究高血脂大鼠血浆 exo 对 RAECs 的作用，笔者采用超速离心方法提取各干预条件下的大鼠血浆外泌体，大鼠取血后经过离浆，采用超速离心法离心后过滤得到的外泌体进行检测。TEM 观察小，如图 3A 所示，对照组、模型组、Pae（150mg/Kg）组的外泌体，直径
表达 CD63、CD9、TSG101 蛋白，而阴性对照 Calnexin 则完全不在达，提示超速离心法分离到为大鼠血浆来源的外泌体。纳米粒子跟踪分析仪（Zeta view）分别检测 C-exo，M-exo、50mg/Kg），如表 1 显示，整体颗粒峰值在 115 nm 左右，粒子平均值在，中位值在 120nm 左右，且跨度都 40~50nm 之间。以 130 nm 区分 e胞外囊泡，计算 exo 浓度，各组 exo 百分比均在 68%左右。模型组和，外泌体颗粒数增多（P<0.01）， Pae 组和模型组相比，外泌体颗粒（P<0.01），说明高血脂能够促进大鼠血浆外泌体分泌，而 Pae 灌胃高血脂引起的外泌体分泌，降低血浆外泌体含量。图 3C 为各组外泌图，报告显示 MODE 曲线流畅，样本中杂质较少，C-exo，M-exo、50mg/Kg）粒径峰值分别为 115 nm、125 nm、105nm，与外泌体粒径理图 3D 为单帧的粒子运动图，各组粒子在检测液体中做无规则运动。
【参考文献】：
期刊论文
[1]旋转超滤:一种提取细胞外泌体的新方法[J]. 胡国文,李青,牛鑫,胡斌,刘鹃,沈晓黎,汪泱,邓志锋. 第二军医大学学报. 2014(06)
[2]联合运用维生素D3和动物油建立小鼠钙化性血管损伤模型[J]. 谢爱媚,司徒永立,吴铁. 中国组织工程研究. 2012(28)
[3]丹皮酚对高脂血清诱导的大鼠主动脉内皮细胞损伤的保护作用及其黏附功能的影响[J]. 李笑春,戴敏,陈鹏. 安徽中医学院学报. 2010(01)
[4]超生理剂量维生素D3致小鼠动脉硬化及机制[J]. 康海仙,吴铁,崔燎. 中国动脉硬化杂志. 2009(04)
[5]丹皮酚对ox-LDL诱导的大鼠血管内皮细胞黏附功能的抑制作用[J]. 钟继昌,戴敏,潘礼龙. 安徽中医学院学报. 2007(06)
[6]高脂血症的致动脉粥样硬化（AS）机制及运动对其影响的研究[J]. 齐金萍. 沈阳医学院学报. 2001(03)
[7]丹皮酚对高脂血症大鼠动脉内皮细胞的保护作用[J]. 戴敏,刘青云,訾晓梅. 中国中医基础医学杂志. 2001(02)
本文编号：3259135
【文章来源】：安徽中医药大学安徽省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
高脂大鼠模型鉴定（x±s，n=8）
图 2 Pae 抑制高血脂大鼠血脂含量及炎症介质的表达（ x ±s，n=A.Pae 抑制高血脂大鼠血脂含量；B.Pae 抑制高血脂大鼠血清炎症介质的表达Fig 2 Pae inhibits blood lipid levels and expression of inflammatory mediators （A.Pae inhibits blood lipid levels in hyperlipidemic rats;B.Pae inhibits the expinflammatory mediators in hyperlipidemic rats.（**P﹤0.01,*P﹤0.05 vs. C grou0.05 vs. M group）3.3 外泌体提取鉴定为了探究高血脂大鼠血浆 exo 对 RAECs 的作用，笔者采用超速离心方法提取各干预条件下的大鼠血浆外泌体，大鼠取血后经过离浆，采用超速离心法离心后过滤得到的外泌体进行检测。TEM 观察小，如图 3A 所示，对照组、模型组、Pae（150mg/Kg）组的外泌体，直径
表达 CD63、CD9、TSG101 蛋白，而阴性对照 Calnexin 则完全不在达，提示超速离心法分离到为大鼠血浆来源的外泌体。纳米粒子跟踪分析仪（Zeta view）分别检测 C-exo，M-exo、50mg/Kg），如表 1 显示，整体颗粒峰值在 115 nm 左右，粒子平均值在，中位值在 120nm 左右，且跨度都 40~50nm 之间。以 130 nm 区分 e胞外囊泡，计算 exo 浓度，各组 exo 百分比均在 68%左右。模型组和，外泌体颗粒数增多（P<0.01）， Pae 组和模型组相比，外泌体颗粒（P<0.01），说明高血脂能够促进大鼠血浆外泌体分泌，而 Pae 灌胃高血脂引起的外泌体分泌，降低血浆外泌体含量。图 3C 为各组外泌图，报告显示 MODE 曲线流畅，样本中杂质较少，C-exo，M-exo、50mg/Kg）粒径峰值分别为 115 nm、125 nm、105nm，与外泌体粒径理图 3D 为单帧的粒子运动图，各组粒子在检测液体中做无规则运动。
【参考文献】：
期刊论文
[1]旋转超滤:一种提取细胞外泌体的新方法[J]. 胡国文,李青,牛鑫,胡斌,刘鹃,沈晓黎,汪泱,邓志锋. 第二军医大学学报. 2014(06)
[2]联合运用维生素D3和动物油建立小鼠钙化性血管损伤模型[J]. 谢爱媚,司徒永立,吴铁. 中国组织工程研究. 2012(28)
[3]丹皮酚对高脂血清诱导的大鼠主动脉内皮细胞损伤的保护作用及其黏附功能的影响[J]. 李笑春,戴敏,陈鹏. 安徽中医学院学报. 2010(01)
[4]超生理剂量维生素D3致小鼠动脉硬化及机制[J]. 康海仙,吴铁,崔燎. 中国动脉硬化杂志. 2009(04)
[5]丹皮酚对ox-LDL诱导的大鼠血管内皮细胞黏附功能的抑制作用[J]. 钟继昌,戴敏,潘礼龙. 安徽中医学院学报. 2007(06)
[6]高脂血症的致动脉粥样硬化（AS）机制及运动对其影响的研究[J]. 齐金萍. 沈阳医学院学报. 2001(03)
[7]丹皮酚对高脂血症大鼠动脉内皮细胞的保护作用[J]. 戴敏,刘青云,訾晓梅. 中国中医基础医学杂志. 2001(02)
本文编号：3259135
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