半枝莲通过Hedgehog非经典信号通路抑制结肠肿瘤干细胞自我更新和分化
发布时间：2021-08-14 19:09
目的:探究半枝莲醇提物对结直肠干细胞自我更新和分化的影响并阐明其分子作用机制。方法:慢病毒转染结肠肿瘤HT-29细胞,磁珠抗体标记法分选结肠干细胞;用CCK-8法检测半枝莲对肿瘤干细胞的活性;3D培养法、干细胞成球实验、琼脂糖集落实验探究半枝莲对HT-29Smo-CSC的生长更新及其转化的影响。实时荧光定量PCR和Western blot技术检测半枝莲对非经典Hedgehog信号通路基因和蛋白Shh、Ptch1、Gli1、Sufu及其标记基因CD133、靶基因c-Myc、分化基因CK20、增殖基因Ki67、更新基因Nanog的影响。结果:半枝莲能抑制HT-29Smo-CSC活性、生长转化及成球能力,显著下调Gli1、c-Myc、Shh mRNA及蛋白的表达,上调Sufu,下调Ptch1、CD133、CK20、Ki67、Nanog mRNA表达。结论:半枝莲醇提物能抑制HT-29Smo-CSC的增殖和分化,对非经典Hedgehog信号通路关键靶基因和蛋白有显著抑制作用,提示半枝莲能通过非经典Hedgehog信号通路抑制结直...
【文章来源】：中药材. 2020,43(03)北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
HT-29Smo-CSC细胞的建立
结果如图5所示,与溶剂对照组比较,半枝莲1 000、500 μg/mL组HT-29Smo-CSC细胞分化状态差,高浓度几乎不分化,而半枝莲250 μg/mL组及GANT-61组细胞分化状态较好,细胞活力较好,分化明显。表2 半枝莲对HT-29Smo-CSC细胞成球能力的影响 ( x ˉ ±s,n=3) 组别 浓度 球形成率/% 溶剂对照组 0.1% DMSO 19.43±1.55 半枝莲组 250 μg/mL 13.37±2.02* 500 μg/mL 8.77±0.96** 1 000 μg/mL 3.77±0.64** GANT-61组 20 μmol/L 7.20±0.76** 注:与溶剂对照组比较,*P<0.05,**P<0.01
肿瘤干细胞是一群具有自我更新和分化能力的肿瘤细胞,自从1994年从人急性髓性白血病研究中被证实以来[9],越来越多的肿瘤干细胞在实体瘤中如脑癌、乳腺癌、结直肠癌、肺癌等被发现[10]。研究认为结直肠肿瘤干细胞是导致结直肠癌复发、转移的重要因素,因此研究结直肠肿瘤干细胞特异性标记物,探索其作用机制,是靶向治疗结直肠癌的关键。可作为结肠肿瘤干细胞特异性标记物的有CD133、CD44、CD66、ALDH1、Lgr5等[11]。本次实验采用免疫磁珠分选法,所获得的目的细胞纯度较高以及对细胞损伤较小,从流式检测结果看来,经磁珠分选的HT-29Smo-细胞阳性表达率高达93.56%,表明所获得的干细胞纯度较高。图4 半枝莲对HT-29Smo-CSC细胞生长转化的影响(×200)
【参考文献】：
期刊论文
[1]结直肠癌中Hedgehog信号通路的研究进展[J]. 王华,李奇奇,朱子清,杨进,陈尔飞. 生命的化学. 2018(05)
[2]中药半枝莲有效成分抗肿瘤作用机制研究进展[J]. 吴晓龙,崔思远,王琰,徐瑞荣. 中华中医药杂志. 2018(04)
[3]基于Hedgehog信号通路的野黄芩苷抑制HT-29细胞源性结肠肿瘤干细胞体外自我更新的研究[J]. 熊思会,万莎,谭溧,雷楠,卢小路,沈小钢,周丽娟,徐海波. 中药药理与临床. 2017(05)
[4]结肠癌肿瘤干细胞相关因子研究进展[J]. 曲泽,侯明星,王峰. 中国肿瘤临床与康复. 2017(03)
[5]半枝莲抗肿瘤作用及机制研究进展[J]. 满其倩,左琳,吕青涛. 辽宁中医杂志. 2015(11)
[6]半枝莲通过Hedgehog信号通路抑制结肠肿瘤干细胞自我更新[J]. 卢小路,徐海波,石梦莹,史玉荣,周丽娟,王德健,陈继兰,方皓,谭溧,周雪. 中药药理与临床. 2015(01)
本文编号：3343020
【文章来源】：中药材. 2020,43(03)北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
HT-29Smo-CSC细胞的建立
结果如图5所示,与溶剂对照组比较,半枝莲1 000、500 μg/mL组HT-29Smo-CSC细胞分化状态差,高浓度几乎不分化,而半枝莲250 μg/mL组及GANT-61组细胞分化状态较好,细胞活力较好,分化明显。表2 半枝莲对HT-29Smo-CSC细胞成球能力的影响 ( x ˉ ±s,n=3) 组别 浓度 球形成率/% 溶剂对照组 0.1% DMSO 19.43±1.55 半枝莲组 250 μg/mL 13.37±2.02* 500 μg/mL 8.77±0.96** 1 000 μg/mL 3.77±0.64** GANT-61组 20 μmol/L 7.20±0.76** 注:与溶剂对照组比较,*P<0.05,**P<0.01
肿瘤干细胞是一群具有自我更新和分化能力的肿瘤细胞,自从1994年从人急性髓性白血病研究中被证实以来[9],越来越多的肿瘤干细胞在实体瘤中如脑癌、乳腺癌、结直肠癌、肺癌等被发现[10]。研究认为结直肠肿瘤干细胞是导致结直肠癌复发、转移的重要因素,因此研究结直肠肿瘤干细胞特异性标记物,探索其作用机制,是靶向治疗结直肠癌的关键。可作为结肠肿瘤干细胞特异性标记物的有CD133、CD44、CD66、ALDH1、Lgr5等[11]。本次实验采用免疫磁珠分选法,所获得的目的细胞纯度较高以及对细胞损伤较小,从流式检测结果看来,经磁珠分选的HT-29Smo-细胞阳性表达率高达93.56%,表明所获得的干细胞纯度较高。图4 半枝莲对HT-29Smo-CSC细胞生长转化的影响(×200)
【参考文献】：
期刊论文
[1]结直肠癌中Hedgehog信号通路的研究进展[J]. 王华,李奇奇,朱子清,杨进,陈尔飞. 生命的化学. 2018(05)
[2]中药半枝莲有效成分抗肿瘤作用机制研究进展[J]. 吴晓龙,崔思远,王琰,徐瑞荣. 中华中医药杂志. 2018(04)
[3]基于Hedgehog信号通路的野黄芩苷抑制HT-29细胞源性结肠肿瘤干细胞体外自我更新的研究[J]. 熊思会,万莎,谭溧,雷楠,卢小路,沈小钢,周丽娟,徐海波. 中药药理与临床. 2017(05)
[4]结肠癌肿瘤干细胞相关因子研究进展[J]. 曲泽,侯明星,王峰. 中国肿瘤临床与康复. 2017(03)
[5]半枝莲抗肿瘤作用及机制研究进展[J]. 满其倩,左琳,吕青涛. 辽宁中医杂志. 2015(11)
[6]半枝莲通过Hedgehog信号通路抑制结肠肿瘤干细胞自我更新[J]. 卢小路,徐海波,石梦莹,史玉荣,周丽娟,王德健,陈继兰,方皓,谭溧,周雪. 中药药理与临床. 2015(01)
本文编号：3343020
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