雷公藤红素基于蛋白酶体抑制活性诱导多发性骨髓瘤凋亡研究
发布时间：2021-08-22 09:02
多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是浆细胞异常增生的恶性肿瘤,伴随免疫球蛋白的急剧产生,蛋白质错误折叠的机会更多,内质网处于应激状态。为缓解这种压力,MM细胞高度依赖于蛋白酶体,以便移除错误折叠蛋白,维持细胞稳态。MM细胞的这种特征也成为其治疗靶点,例如:当硼替佐米（Bortezomib）抑制蛋白酶体,上述错误折叠蛋白不能被降解、滞留于胞质,导致过度的内质网应激、诱导MM细胞凋亡,这是MM细胞对蛋白酶体抑制剂尤为敏感的重要原因。尽管蛋白酶体抑制剂是治疗MM的革命性药物,但其仍有局限,例如:部分患者伴有原发耐药或者药物治疗过程中出现继发耐药;治疗窗口窄、存在剂量限制性等不良反应。因此,针对蛋白酶体抑制剂耐药机制进行研究或继续发现新的蛋白酶体抑制剂是MM研究领域的重点和难点。雷公藤红素（Celastrol,Cel）为醌甲基三萜类化合物,其显著的抗癌活性引起了广泛关注。有研究提示Celastrol可抑制兔源蛋白酶体活性,可能与抑制人前列腺癌细胞效应有关。但上述研究缺乏直接基于人蛋白酶体活性抑制数据,且在MM细胞以及移植瘤组织中是否能发挥蛋白酶体抑制活性仍然未知。目的本研究...
【文章来源】：成都医学院四川省
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
基于分子水平Celastrol对20S蛋白酶体β1、β2和β5亚基的抑制活性Fig.1-2Celastrolinhibitstheβ1,β2andβ5activityofthe20Sproteasomeatthemolecular
图 1-2 基于分子水平 Celastrol 对 20S 蛋白酶体β1、β2 和β5 亚基的抑制活性Fig.1-2 Celastrol inhibits the β1, β2 and β5 activity of the 20S proteasome at the molecular注：Celastrol 抑制纯化人 20S 蛋白酶体β1、β2 和β5 亚基的活性，不同浓度(0.78、1.56、3.12、6.25、12.5、25、50、100 μM)的 Celastrol 分别作用于荧光底物(Z)‐LLE‐AMC，Bz‐VGR‐AMC和 Suc‐Leu‐Leu‐Val‐Tyr‐AMC，反应 1 h，检测 Celastrol 对纯化人 20S 蛋白酶体β1、β2、β5 亚基活性的影响,数据由 x ± s 表示。3.2 细胞水平检测结果本研究测定不同浓度 Celastrol 对 MM.1S 细胞蛋白酶体β1、β2、β5 亚基的抑制情况，实验结果显示：Celastrol 能有效抑制人蛋白酶体β1、β2、β5 亚基的活性，其 IC50 分别为 2.3、2.1 和 0.9 μM，结果如图 1-3。
图 2-1 Celastrol 抑制 MM 细胞增殖Figure.2-1 Celastrol inhibits MM cell proliferation：用不同浓度的 Celastrol 分别处理 MM.1S、MM.1R、RPMI8226、U266 细胞 48 小时，通 CCK-8 法测定其增殖抑制效应，GI50 值范围为 0.52 至 1.14 μM，结果由三次不同实验的 s 表示，（*p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001）具有统计学意义。3.2 Annexin V 与 PI 双染实验结果通过 Annexin V 和 PI 的染色结果显示 Celastrol 能诱导 MM.1S、MM.1R、RPMI8226、U266 细胞凋亡 ；当给予 500 nM Celastrol，药物作用 8 h，MM.1S、MM.1R、RPMI8226 和 U266 细胞的凋亡率分别是 35.5%、35.1%、26.6%和 40.9%给予 250 nM Celastrol，凋亡率分别是 6.3%、6.8%、15.3%和 26.8%；而空白对照（DMSO）中各细胞的凋亡率分别为 MM.1S（4.6%）、MM.1R（5.3%）、RPMI822（12.8%）和 U266（12.5%），结果如图 2-2。
本文编号：3357445
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
基于分子水平Celastrol对20S蛋白酶体β1、β2和β5亚基的抑制活性Fig.1-2Celastrolinhibitstheβ1,β2andβ5activityofthe20Sproteasomeatthemolecular
图 1-2 基于分子水平 Celastrol 对 20S 蛋白酶体β1、β2 和β5 亚基的抑制活性Fig.1-2 Celastrol inhibits the β1, β2 and β5 activity of the 20S proteasome at the molecular注：Celastrol 抑制纯化人 20S 蛋白酶体β1、β2 和β5 亚基的活性，不同浓度(0.78、1.56、3.12、6.25、12.5、25、50、100 μM)的 Celastrol 分别作用于荧光底物(Z)‐LLE‐AMC，Bz‐VGR‐AMC和 Suc‐Leu‐Leu‐Val‐Tyr‐AMC，反应 1 h，检测 Celastrol 对纯化人 20S 蛋白酶体β1、β2、β5 亚基活性的影响,数据由 x ± s 表示。3.2 细胞水平检测结果本研究测定不同浓度 Celastrol 对 MM.1S 细胞蛋白酶体β1、β2、β5 亚基的抑制情况，实验结果显示：Celastrol 能有效抑制人蛋白酶体β1、β2、β5 亚基的活性，其 IC50 分别为 2.3、2.1 和 0.9 μM，结果如图 1-3。
图 2-1 Celastrol 抑制 MM 细胞增殖Figure.2-1 Celastrol inhibits MM cell proliferation：用不同浓度的 Celastrol 分别处理 MM.1S、MM.1R、RPMI8226、U266 细胞 48 小时，通 CCK-8 法测定其增殖抑制效应，GI50 值范围为 0.52 至 1.14 μM，结果由三次不同实验的 s 表示，（*p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001）具有统计学意义。3.2 Annexin V 与 PI 双染实验结果通过 Annexin V 和 PI 的染色结果显示 Celastrol 能诱导 MM.1S、MM.1R、RPMI8226、U266 细胞凋亡 ；当给予 500 nM Celastrol，药物作用 8 h，MM.1S、MM.1R、RPMI8226 和 U266 细胞的凋亡率分别是 35.5%、35.1%、26.6%和 40.9%给予 250 nM Celastrol，凋亡率分别是 6.3%、6.8%、15.3%和 26.8%；而空白对照（DMSO）中各细胞的凋亡率分别为 MM.1S（4.6%）、MM.1R（5.3%）、RPMI822（12.8%）和 U266（12.5%），结果如图 2-2。
本文编号：3357445
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