人参炔三醇对HepG2细胞中PXR-CYP3A4调控通路的影响及其机制研究
发布时间：2021-10-11 11:55
背景:人参炔三醇（Panaxytriol,PXT）是高丽参、红参提取物及参麦注射液中的重要活性成分之一,它能够抑制许多肿瘤细胞的活性,有助于缓解某些癌症疗法的不良反应,因而PXT在抗肿瘤方面有着较好的应用前景。课题组前期研究表明,PXT能下调大鼠原代肝细胞中CYP3A1/2 mRNA的表达。那么在人源性的HepG2细胞中,PXT如何来调控CYP3A4的表达,值得深入探讨。目的:研究PXT长短时干预对正常HepG2细胞和高表达hPXR的HepG2细胞中PXR、CYP3A4 mRNA和蛋白表达的影响及对PXR-CYP3A4调控通路的影响机制,为进一步深入探索PXT与临床药物可能的相互作用提供实验与理论基础。方法:1.构建正常HepG2和高表达hPXR的HepG2细胞模型,描绘HepG2细胞的生长曲线;使用MTS法考察系列浓度的PXT对HepG2细胞的毒性作用。2.使用Q-PCR、Western blot等技术手段,考察PXT长短时干预对正常HepG2细胞和高表达hPXR的HepG2细胞中PXR、CYP3A4 mRNA和蛋白表达的影响。3.通过构建质粒、瞬时共转染及双荧光素酶报告基因法,考察...
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 PXT对HEPG2细胞中PXR和CYP3A4 MRNA和蛋白表达的影响
2.1 材料
2.1.1 细胞株
2.1.2 主要药品
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 主要溶液的配制
2.2.2 HepG2细胞的培养
2.2.3 HepG2细胞生长曲线的测定
2.2.4 PXT对HepG2细胞的体外细胞毒性实验
2.2.5 PXT对正常HepG2细胞中PXR和CYP3A4 mRNA表达的影响
2.2.6 PXT对正常HepG2细胞中PXR和CYP3A4蛋白表达的影响
2.2.7 数据处理与统计分析
2.3 结果
2.3.1 HepG2细胞形态学及生长曲线
2.3.2 PXT对HepG2细胞的体外细胞毒性
2.3.3 PXT对正常HepG2细胞中PXR和CYP3A4 mRNA表达的影响
2.3.4 PXT对正常HepG2细胞中PXR和CYP3A4蛋白表达的影响
2.4 讨论
第3章 PXT对高表达HPXR的HEPG2细胞中PXR和CYP3A4 MRNA和蛋白表达的影响
3.1 材料
3.1.1 细胞株及质粒
3.1.2 主要药品
3.1.3 主要试剂
3.1.4 主要仪器设备
3.2 方法
3.2.1 主要溶液的配置
3.2.2 HepG2细胞的培养
3.2.3 构建高表hPXR的HepG2细胞模型
3.2.4 PXT对高表达hPXR的HepG2细胞中PXR和CYP3A4 mRNA表达的影响
3.2.5 PXT对hPXR的HepG2细胞中PXR和CYP3A4蛋白表达的影响
3.2.6 数据处理与统计分析
3.3 结果
3.3.1 构建高表达hPXR的HepG2细胞模型的鉴定
3.3.2 PXT对高表达hPXR的HepG2细胞中PXR和CYP3A4 mRNA表达的影响
3.3.3 PXT高表达干预对高表达hPXR的HepG2细胞中PXR和CYP3A4蛋白表达的影响
3.4 讨论
第4章 PXT对瞬时共转染HPXR的HEPG2细胞中CYP3A4报告基因的影响
4.1 材料
4.1.1 细胞株及质粒
4.1.2 主要药品
4.1.3 主要试剂
4.1.4 主要仪器设备
4.2 方法
4.2.1 主要溶液的配制
4.2.2 HepG2细胞培养
4.2.3 质粒构建、扩增、提取及鉴定
4.2.4 细胞瞬时转染
4.2.5 双荧光素酶活性测定
4.2.6 基于hPXR双荧光素酶报告基因模型的瞬时转染条件探索
4.2.7 基于hPXR双荧光素酶报告基因模型的鉴定
4.2.8 PXT对瞬时共转染hPXR的hepG2细胞中CYP3A4报告基因的影响
4.2.9 PXT和RIF共同干预对瞬时共转染hPXR的hepG2细胞中CYP3A4报告基因的影响
4.2.10 数据处理与统计分析
4.3 结果
4.3.1 质粒鉴定
4.3.2 瞬时共转染质粒条件摸索
4.3.3 基于hPXR双荧光素酶报告基因模型的验证
4.3.4 PXT对瞬时共转染hPXR的hepG2细胞中CYP3A4报告基因的影响
4.3.5 PXT与RIF共同干预对瞬时共转染hPXR的hepG2细胞中CYP3A4报告基因的影响
4.4 讨论
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]银杏内酯B通过激活孕烷X受体诱导CYP3A4的表达[J]. 周涛,王宇光,马增春,肖勇,汤响林,梁乾德,胡东华,肖成荣,谭洪玲,高月. 中国药理学通报. 2014(07)
[2]孕烷X受体（PXR）对药物代谢途径的调控[J]. 葛乐乐,范辉,马珂. 中国现代应用药学. 2013(12)
[3]吴茱萸碱与吴茱萸次碱经PXR、CAR核受体通路影响CYP3A4表达的研究[J]. 黄凌,邝少轶,张丽. 中国药房. 2013(35)
[4]核受体对药物代谢酶和转运体的调控[J]. 刘志浩,李燕. 药学学报. 2012(12)
[5]核受体对细胞色素P450的调控作用研究进展[J]. 何芳,曾彩雯,夏春华,熊玉卿. 中国临床药理学与治疗学. 2012(10)
[6]人源性抗体在HEK293T细胞中瞬时表达条件的优化[J]. 陶俊,向军俭,王宏,龚义平,邓宁. 生物技术通报. 2010(11)
[7]孕烷X受体对细胞色素P450 3A调控机制的研究进展[J]. 李越,李燕. 国际药学研究杂志. 2009(03)
[8]孕烷X受体的研究进展及其在药物代谢中的作用[J]. 刘彦锋,李红星,颉欣妮,王芳,翟永功. 中国新药杂志. 2008(14)
[9]孕烷X受体及组成型雄烷受体在药物代谢和研发中的应用[J]. 张江虹,金一尊. 国外医学.药学分册. 2006(01)
[10]Purification of full-length human Pregnane and Xenobiotic Receptor:polyclonal antibody preparation for immunological characterization[J]. Mallampati SARADHI,Biji KRISHNA,Gauranga MUKHOPADHYAY,Rakesh K TYAGI. Cell Research. 2005(10)
本文编号：3430461
【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 PXT对HEPG2细胞中PXR和CYP3A4 MRNA和蛋白表达的影响
2.1 材料
2.1.1 细胞株
2.1.2 主要药品
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要仪器设备
2.2 方法
2.2.1 主要溶液的配制
2.2.2 HepG2细胞的培养
2.2.3 HepG2细胞生长曲线的测定
2.2.4 PXT对HepG2细胞的体外细胞毒性实验
2.2.5 PXT对正常HepG2细胞中PXR和CYP3A4 mRNA表达的影响
2.2.6 PXT对正常HepG2细胞中PXR和CYP3A4蛋白表达的影响
2.2.7 数据处理与统计分析
2.3 结果
2.3.1 HepG2细胞形态学及生长曲线
2.3.2 PXT对HepG2细胞的体外细胞毒性
2.3.3 PXT对正常HepG2细胞中PXR和CYP3A4 mRNA表达的影响
2.3.4 PXT对正常HepG2细胞中PXR和CYP3A4蛋白表达的影响
2.4 讨论
第3章 PXT对高表达HPXR的HEPG2细胞中PXR和CYP3A4 MRNA和蛋白表达的影响
3.1 材料
3.1.1 细胞株及质粒
3.1.2 主要药品
3.1.3 主要试剂
3.1.4 主要仪器设备
3.2 方法
3.2.1 主要溶液的配置
3.2.2 HepG2细胞的培养
3.2.3 构建高表hPXR的HepG2细胞模型
3.2.4 PXT对高表达hPXR的HepG2细胞中PXR和CYP3A4 mRNA表达的影响
3.2.5 PXT对hPXR的HepG2细胞中PXR和CYP3A4蛋白表达的影响
3.2.6 数据处理与统计分析
3.3 结果
3.3.1 构建高表达hPXR的HepG2细胞模型的鉴定
3.3.2 PXT对高表达hPXR的HepG2细胞中PXR和CYP3A4 mRNA表达的影响
3.3.3 PXT高表达干预对高表达hPXR的HepG2细胞中PXR和CYP3A4蛋白表达的影响
3.4 讨论
第4章 PXT对瞬时共转染HPXR的HEPG2细胞中CYP3A4报告基因的影响
4.1 材料
4.1.1 细胞株及质粒
4.1.2 主要药品
4.1.3 主要试剂
4.1.4 主要仪器设备
4.2 方法
4.2.1 主要溶液的配制
4.2.2 HepG2细胞培养
4.2.3 质粒构建、扩增、提取及鉴定
4.2.4 细胞瞬时转染
4.2.5 双荧光素酶活性测定
4.2.6 基于hPXR双荧光素酶报告基因模型的瞬时转染条件探索
4.2.7 基于hPXR双荧光素酶报告基因模型的鉴定
4.2.8 PXT对瞬时共转染hPXR的hepG2细胞中CYP3A4报告基因的影响
4.2.9 PXT和RIF共同干预对瞬时共转染hPXR的hepG2细胞中CYP3A4报告基因的影响
4.2.10 数据处理与统计分析
4.3 结果
4.3.1 质粒鉴定
4.3.2 瞬时共转染质粒条件摸索
4.3.3 基于hPXR双荧光素酶报告基因模型的验证
4.3.4 PXT对瞬时共转染hPXR的hepG2细胞中CYP3A4报告基因的影响
4.3.5 PXT与RIF共同干预对瞬时共转染hPXR的hepG2细胞中CYP3A4报告基因的影响
4.4 讨论
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
参考文献
【参考文献】：
期刊论文
[1]银杏内酯B通过激活孕烷X受体诱导CYP3A4的表达[J]. 周涛,王宇光,马增春,肖勇,汤响林,梁乾德,胡东华,肖成荣,谭洪玲,高月. 中国药理学通报. 2014(07)
[2]孕烷X受体（PXR）对药物代谢途径的调控[J]. 葛乐乐,范辉,马珂. 中国现代应用药学. 2013(12)
[3]吴茱萸碱与吴茱萸次碱经PXR、CAR核受体通路影响CYP3A4表达的研究[J]. 黄凌,邝少轶,张丽. 中国药房. 2013(35)
[4]核受体对药物代谢酶和转运体的调控[J]. 刘志浩,李燕. 药学学报. 2012(12)
[5]核受体对细胞色素P450的调控作用研究进展[J]. 何芳,曾彩雯,夏春华,熊玉卿. 中国临床药理学与治疗学. 2012(10)
[6]人源性抗体在HEK293T细胞中瞬时表达条件的优化[J]. 陶俊,向军俭,王宏,龚义平,邓宁. 生物技术通报. 2010(11)
[7]孕烷X受体对细胞色素P450 3A调控机制的研究进展[J]. 李越,李燕. 国际药学研究杂志. 2009(03)
[8]孕烷X受体的研究进展及其在药物代谢中的作用[J]. 刘彦锋,李红星,颉欣妮,王芳,翟永功. 中国新药杂志. 2008(14)
[9]孕烷X受体及组成型雄烷受体在药物代谢和研发中的应用[J]. 张江虹,金一尊. 国外医学.药学分册. 2006(01)
[10]Purification of full-length human Pregnane and Xenobiotic Receptor:polyclonal antibody preparation for immunological characterization[J]. Mallampati SARADHI,Biji KRISHNA,Gauranga MUKHOPADHYAY,Rakesh K TYAGI. Cell Research. 2005(10)
本文编号：3430461
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