芍药苷调控LXRs-STAT3信号通路改善肝纤维化进程的研究

发布时间：2021-11-01 05:33

　　目的:研究显示芍药苷（Paeoniflorin,PAE）具有较好的肝保护作用;本研究体外拟用TGF-β刺激的HSCs细胞、体内以腹腔注射硫代乙酰胺（TAA）的Balb/c小鼠为研究对象,建立肝纤维化模型,探究芍药苷通过LXRs-STAT3信号通路,对肝纤维化的调控改善作用及其潜在的分子机制。方法:体外实验选用HSCs细胞,TGF-β刺激后,给予0-200μM的芍药苷处理24h,通过MTT法检测芍药苷对HSCs细胞存活率的影响。利用浓度（0、6.25、12.5、25、50、100μM）的芍药苷孵育HSCs,24h后,提取细胞总蛋白进行蛋白印迹分析实验,检测HSCs细胞中LXRα、LXRβ、STAT3等蛋白的表达水平;并提取RNA,通过PCR定量分析,检测mRNA的表达水平,以及免疫荧光染色做进一步验证。体内将小鼠随机分四组,即正常组、TAA模型组、芍药苷低剂量（10mg/kg）、高剂量（20mg/kg）给药组,每组5只。正常组采用标准饮食;TAA模型组及芍药苷给药组腹腔注射TAA（100或200mg/kg）,以建立小鼠肝纤维化模型;给药组每天灌胃芍药苷1Omg/kg或20mg/kg,实验... 

【文章来源】：延边大学吉林省 211工程院校

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２?ＰＡＥ对活化的ＨＳＣｓ细胞中肝Ｘ受体的调控

介导炎症反应。在活化状态的ＨＳＣｓ细胞中，当ＬＸＲｓ被激活后，会释放腺嘌呤??核苷三磷酸（ＡＴＰ），ＡＴＰ作用于嘌呤能受体Ｐ２Ｘ７ｒ，从而影响ＮＬＲＰ３炎性小??体的表达；如图３Ａ和Ｂ所示，在活化的ＨＳＣｓ细胞中，ＡＴＰ与Ｐ２Ｘ７ｒ结合后，??模型组Ｐ２Ｘ７ｒ的蛋白及ｍＲＮＡ大量表达，并诱导了?ＮＬＲＰ３活化的增强，使ＮＬＲＰ３??炎性小体蛋白及ｍＲＮＡ含量过表达，ＰＡＥ孵育后，有效的抑制了?Ｐ２Ｘ７ｒ及ＮＬＲＰ３??的蛋白过表达现象，ｍＲＮＡ表达水平在浓度５０ｐＭ时亦产生了显著性差异，阻止??ＮＬＲＰ３炎性小体的进一步活化，说明ＰＡＥ可能通过调控代谢产物ＡＴＰ与Ｐ２Ｘ７ｒ??１４??

３．５?ＰＡＥ对活化的ＨＳＣｓ细胞中ＳＴＡＴ３信号相关转导通路的影响??ＨＳＣｓ被激活后，会诱发促炎细胞因子的释放，而多功能细胞因子ＩＬ－６，与??肝纤维化密切相关，如图５Ａ和Ｂ所示，在仅ＴＧＦ－Ｐ刺激活化的ＨＳＣｓ中，ＩＬ－６??与其相应受体结合后，其表达微弱，给予ＰＡＥ后，明显上调了其蛋白及ｍＲＮＡ??的表达；ＳＴＡＴ３作为ＩＬ－６下游的重要效应物，被激活并产生磷酸化修饰，仅ＴＧＦ－Ｐ??刺激后，Ｐ－ＳＴＡＴ３的活化度降低，随着ＰＡＥ给药浓度的提高，Ｐ－ＳＴＡＴ３的蛋白??表达逐渐升高，活化增强，产生保护性细胞因子，阻止肝纤维化的发生；而ＳＯＣＳ３??作为ＳＴＡＴ３的负反馈调节因子，当ＳＴＡＴ３信号因子激活后，ＳＯＣＳ３与ＳＴＡＴ３??彼此产生竞争作用，仅ＴＧＦ－ｐ刺激的ＨＳＣｓ中ＳＯＣＳ３蛋白过表达，ＰＡＥ作用后，??活化的ＳＴＡＴ３可竞争性地抑制ＳＯＣＳ３的蛋白表达水平，与ＳＴＡＴ３形成了负反??馈作用效果

【参考文献】：
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本文编号：3469595