黄芪甲苷通过JNK信号通路对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎性损伤的保护作用机制研究
发布时间：2021-11-15 05:16
目的:通过建立体外高糖诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤模型,研究黄芪甲苷（AS-IV）对高糖诱导HUVECs损伤的保护作用及其分子机制,为糖尿病及其并发症的防治提供实验依据与新思路。方法:1建立体外高糖损伤人脐静脉内皮细胞模型体外培养HUVECs细胞株,按培养基终末葡萄糖浓度不同,随机分为2组:正常对照组（葡萄糖浓度5.55 mM）;高糖损伤组（葡萄糖浓度分别为11.1、22.2、33.3、44.4 mM）,不同组之间用甘露醇平衡渗透压。各组分别培养时间24h、48h、72h后,光学倒置显微镜观察细胞形态学;MTT法检测细胞存活率;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态。2黄芪甲苷对高糖诱导人脐静脉内皮细胞炎性损伤保护作用机制研究实验分为5组:正常对照组（葡萄糖浓度5.55 mM 48h）;高糖模型组（葡萄糖浓度33.3 mM 48h）;JNK抑制剂组（葡萄糖浓度33.3 mM 48h后加入JNK抑制剂SP600125浓度20μM）;黄芪甲苷组（葡萄糖浓度33.3 mM 48h后加入黄芪甲苷浓度50μM）;JNK抑制剂+黄芪甲苷组（葡萄糖浓度33.3 mM 48h后,JN...
【文章来源】：安徽中医药大学安徽省
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各浓度葡萄糖组HUVECs形态学比较（10×20）
值为21.89 mM，接近22.2mM，此时间下细胞稳定较差，部分细胞漂浮。因此，接下来的实验选择终末浓度为33.3mM葡萄糖浓度培养液处理48h的HUVECs为高糖损伤模型细胞。见表1，图2。表1 不同时间、不同葡萄糖浓度对脐静脉内皮细胞活力的影响 （x S，n=6）Tab.1 Effects of glucose on the cell viability of HUVECs at 24,48,72h ( x S, n=6)Glucose（mM）cell viability (% 0f 5.55 mM)24 48 725.55100 100 10011.1100.5±8.7 82.5±10.7 73.2±5.722.279.3±5.4 61.2±4.9** 43.3±5.6 **33.372.4±8.8** 50.5±6.4** 36.3±6.9**44.468.3±9.0** 39.1±9.1** 26.4±1.9**注：与 5.55 mM 组比较，*p<0.05，**p<0.01图2 不同时间、不同葡萄糖浓度对脐静脉内皮细胞活力的影响（x S，n=6）Fig.2 Effects of glucose on the cell viability of HUVECs at 24, 48, 72h (x S, n=6)注：与 5.55 mM 组比较，*P<0.05，**P<0.01
过 JNK 信号通路对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎性损伤的保护作用机制研究33258 染色观察细胞凋亡确定高糖诱导 HUVECs 损伤并促进细胞凋亡，使用 Hoechst核凋亡细胞形态进行评估。当细胞发生凋亡 Hoechst 33258 染链 DNA 结合，产生比荧光染料自身更强的荧光。因此，凋亡于正常细胞。本组实验于倒置荧光显微镜下观察到 5.55mM 葡均匀黯淡的蓝色，核形状完整，染色质荧光表达均一，随着葡核呈浓缩碎块状变化，表现为荧光增加的蓝白色致密浓染葡萄糖浓度依赖性，表明高浓度的葡萄糖诱导 HUVECs 发生
【参考文献】：
期刊论文
[1]中医药治疗糖尿病下肢血管病变研究进展综述[J]. 张爱民,崔磊. 中国中医药现代远程教育. 2017(05)
[2]心血管状况与糖尿病视网膜血管内皮细胞的相关性（英文）[J]. Galina Dimitrova,Satoshi Kato. 国际眼科杂志. 2017(01)
[3]益气活血通络方含药血清对高糖诱导的大鼠背根神经节细胞NGF、IL-1及TNF-α表达的影响[J]. 何莹,申国明,王芹,尤良震. 齐齐哈尔医学院学报. 2016(28)
[4]益气活血通络方对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎性因子表达的影响[J]. 王芹,申国明,王浩,何莹,尤良震,叶树,王柳,姚永传. 安徽中医药大学学报. 2016(05)
[5]2型糖尿病大血管病变中医药研究进展[J]. 张淑芳,吕树泉,苏秀海. 中西医结合心脑血管病杂志. 2016(16)
[6]中医药治疗糖尿病足研究概况[J]. 张礼玉,陈晓雯,李玲,谢勤,朱云洁. 中医药临床杂志. 2016(07)
[7]胰岛素受体底物家族成员的结构和组织特异性与功能的关系[J]. 唐辰义,周后德. 临床与病理杂志. 2016(03)
[8]芪归糖痛宁颗粒调节炎性因子预防糖尿病周围神经病变的机制研究[J]. 李道卫,申国明,王浩,江爱娟,王靓,尤良震,王芹,何莹. 安徽中医药大学学报. 2015(05)
[9]黄芪甲苷对Ⅰ型糖尿病大鼠心肌细胞PGC-1α和NRF-1表达的影响[J]. 曹琼丹,杨育红,于胜男,鲁美丽,张素萍,韩镕徽,胡进. 中国药理学通报. 2015(08)
[10]杭白菊黄酮对高糖诱导的血管内皮细胞Bax、Bcl-2mRNA表达的影响[J]. 刘颖慧,周旦阳,寿成珉,牟新. 中华中医药杂志. 2015(07)
本文编号：3496110
【文章来源】：安徽中医药大学安徽省
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各浓度葡萄糖组HUVECs形态学比较（10×20）
值为21.89 mM，接近22.2mM，此时间下细胞稳定较差，部分细胞漂浮。因此，接下来的实验选择终末浓度为33.3mM葡萄糖浓度培养液处理48h的HUVECs为高糖损伤模型细胞。见表1，图2。表1 不同时间、不同葡萄糖浓度对脐静脉内皮细胞活力的影响 （x S，n=6）Tab.1 Effects of glucose on the cell viability of HUVECs at 24,48,72h ( x S, n=6)Glucose（mM）cell viability (% 0f 5.55 mM)24 48 725.55100 100 10011.1100.5±8.7 82.5±10.7 73.2±5.722.279.3±5.4 61.2±4.9** 43.3±5.6 **33.372.4±8.8** 50.5±6.4** 36.3±6.9**44.468.3±9.0** 39.1±9.1** 26.4±1.9**注：与 5.55 mM 组比较，*p<0.05，**p<0.01图2 不同时间、不同葡萄糖浓度对脐静脉内皮细胞活力的影响（x S，n=6）Fig.2 Effects of glucose on the cell viability of HUVECs at 24, 48, 72h (x S, n=6)注：与 5.55 mM 组比较，*P<0.05，**P<0.01
过 JNK 信号通路对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎性损伤的保护作用机制研究33258 染色观察细胞凋亡确定高糖诱导 HUVECs 损伤并促进细胞凋亡，使用 Hoechst核凋亡细胞形态进行评估。当细胞发生凋亡 Hoechst 33258 染链 DNA 结合，产生比荧光染料自身更强的荧光。因此，凋亡于正常细胞。本组实验于倒置荧光显微镜下观察到 5.55mM 葡均匀黯淡的蓝色，核形状完整，染色质荧光表达均一，随着葡核呈浓缩碎块状变化，表现为荧光增加的蓝白色致密浓染葡萄糖浓度依赖性，表明高浓度的葡萄糖诱导 HUVECs 发生
【参考文献】：
期刊论文
[1]中医药治疗糖尿病下肢血管病变研究进展综述[J]. 张爱民,崔磊. 中国中医药现代远程教育. 2017(05)
[2]心血管状况与糖尿病视网膜血管内皮细胞的相关性（英文）[J]. Galina Dimitrova,Satoshi Kato. 国际眼科杂志. 2017(01)
[3]益气活血通络方含药血清对高糖诱导的大鼠背根神经节细胞NGF、IL-1及TNF-α表达的影响[J]. 何莹,申国明,王芹,尤良震. 齐齐哈尔医学院学报. 2016(28)
[4]益气活血通络方对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎性因子表达的影响[J]. 王芹,申国明,王浩,何莹,尤良震,叶树,王柳,姚永传. 安徽中医药大学学报. 2016(05)
[5]2型糖尿病大血管病变中医药研究进展[J]. 张淑芳,吕树泉,苏秀海. 中西医结合心脑血管病杂志. 2016(16)
[6]中医药治疗糖尿病足研究概况[J]. 张礼玉,陈晓雯,李玲,谢勤,朱云洁. 中医药临床杂志. 2016(07)
[7]胰岛素受体底物家族成员的结构和组织特异性与功能的关系[J]. 唐辰义,周后德. 临床与病理杂志. 2016(03)
[8]芪归糖痛宁颗粒调节炎性因子预防糖尿病周围神经病变的机制研究[J]. 李道卫,申国明,王浩,江爱娟,王靓,尤良震,王芹,何莹. 安徽中医药大学学报. 2015(05)
[9]黄芪甲苷对Ⅰ型糖尿病大鼠心肌细胞PGC-1α和NRF-1表达的影响[J]. 曹琼丹,杨育红,于胜男,鲁美丽,张素萍,韩镕徽,胡进. 中国药理学通报. 2015(08)
[10]杭白菊黄酮对高糖诱导的血管内皮细胞Bax、Bcl-2mRNA表达的影响[J]. 刘颖慧,周旦阳,寿成珉,牟新. 中华中医药杂志. 2015(07)
本文编号：3496110
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