半夏泻心汤对ICC表型维持和钙离子调节蛋白的影响

发布时间：2022-01-02 01:20

　　[目的]为探究半夏泻心汤调节胃肠动力障碍的机制,本文首先通过运用CiteSpace软件对WOS数据库中ICC表型相关文献进行可视化分析,为半夏泻心汤对ICC表型维持及钙离子调节蛋白影响的实验研究提供知识基础。再以ICC表型为核心,从ICC表型维持与钙离子调节蛋白角度,揭示半夏泻心汤影响ICC表型维持调节胃肠运动的细胞分子机制,对“心下痞”的内涵进行揭示。[方法]制备半夏泻心汤含药血清,将稳定培养传代后的ICC,随机分为空白组、对照组（正常大鼠血清）、低浓度组（5%半夏泻心汤含药血清）、中浓度组（10%半夏泻心汤含药血清）和高浓度组（20%半夏泻心汤含药血清）。药物血清干预12h、24h和48h三个时间点后,分别进行检测。利用免疫荧光双染法,通过双标记三组标记蛋白c-kit/α-SMA、c-kit/desmin和c-kit/SMMHC,观察了半夏泻心汤对小鼠ICC表型维持影响的形态表达差异,并摸索出半夏泻心汤药物血清干预条件。免疫印迹法检测ICC中IP3R、RyR、PLC、c-kit、α-SMA、desmin、SMMHC和MLC-2的蛋白表达水平,实时定量荧光PCR法测定ICC中IP3R... 

【文章来源】：北京中医药大学北京市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：106 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
文献综述
    综述一 基于CiteSpace的ICC表型相关领域研究概述
        1 介绍
        2 CiteSpace数据与研究方法
        3 领域总论
        4 领域分论
        5 结语
        参考文献
    综述二 Cajal间质细胞的相关研究进展
        1 ICC作为胃肠动力的“起搏器”
        2 ICC形态与超微结构
        3 Ca~(2+)振荡和相关离子通道激活
        4 “起搏器单元”
        5 SIP功能合胞体
        6 ICC表型的可塑性
        参考文献
    综述三 半夏泻心汤现代研究进展
        1 半夏泻心汤对胃分泌的调节
        2 半夏泻心汤对胃组织的调节
        3 半夏泻心汤对胃运动的调节
        4 半夏泻心汤对胃电节律的调节
        5 半夏泻心汤对胃肠细胞和分子的调节
        参考文献
前言
技术路线图
实验一 小鼠胃Cajal间质细胞分离、培养和鉴定
    1 材料与方法
        1.1 实验动物
        1.2 主要药品与试剂
        1.3 主要仪器设备
        1.4 小鼠ICC的分离与培养
        1.5 小鼠ICC的鉴定
    2 结果
        2.1 倒置荧光显微镜下ICC的形态观察
        2.2 ICC的鉴定
    3 讨论
        3.1 ICC的培养
        3.2 ICC的鉴定
        3.3 总结与不足
实验二 免疫荧光双染观察半夏泻心汤对小鼠ICC表型维持的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验细胞
        1.2 主要药品与试剂
        1.3 主要仪器设备
        1.4 含药血清的制备
        1.5 新生小鼠原代胃cajal间质细胞的培养和传代
        1.6 细胞分组干预方法与干预时间
        1.7 免疫荧光双染法观察
        1.8 图片处理与统计分析
    2 结果
        2.1 镜下观察
        2.2 半夏泻心汤药物血清不同剂量对ICC表型的影响
        2.3 半夏泻心汤药物血清不同干预时间对ICC表型的影响
    3 讨论
        3.1 平滑肌细胞相关表型蛋白
        3.2 形态学观察半夏泻心汤对小鼠ICC表型维持的表达差异
实验三 半夏泻心汤对小鼠ICC表型维持和钙离子调节蛋白的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验细胞
        1.2 主要药品与试剂
        1.3 主要仪器设备
        1.4 含药血清的制备
        1.5 ICC的培养
        1.6 细胞分组干预
        1.7 免疫印迹杂交法检测IP3R、RyR、PLC、c-kit、α-SMA、desmin、SMMHC、MLC-2蛋白的表达
        1.8 实时荧光定量PCR法检测IP3R、RyR3、PLC、c-kit、α-SMA、desmin、SMMHC、MLC-2 mRNA的表达
        1.9 统计学处理
    2 结果
        2.1 各组对ICC c-kit、α-SMA、desmin、SMMHC、MLC-2、IP3R、RyR、PLC蛋白表达的影响
        2.2 各组对ICC c-kit、α-SMA、desmin、SMMHC、MLC-2、IP3R、RyR3、PLC mRNA表达的影响
    3 讨论
        3.1 钙离子调节蛋白
        3.2 半夏泻心汤对ICC表型维持及相关离子通道的调节
结语
参考文献
附录
    附录1 激光共聚焦结果图
    附录2 RT-PCR中各基因扩增的标准曲线图
    附录3 RT-PCR中各基因实时扩增曲线图和扩增产物溶解曲线图
致谢
在学期间主要研究成果
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]安全疏散研究的科学知识图谱[J]. 李杰,李平,谢启苗,付姗姗.  中国安全科学学报. 2018(01)
[2]Cajal细胞及其离子通道调控机制的研究进展[J]. 高迪,沙磊.  医学综述. 2017(08)
[3]半夏泻心汤及其苦降药组促进胃肠动力的PK-PD研究[J]. 罗太敏,李晋奇,杨戈,张德,童荣生.  药物评价研究. 2015(06)
[4]半夏泻心汤加减治疗慢性胃炎和消化性溃疡与预防癌变的临床效果分析[J]. 山努佳,华利霞.  中国继续医学教育. 2015(24)
[5]半夏泻心汤加减配合中药保留灌肠治疗溃疡性结肠炎的临床效果分析[J]. 王华.  中国医药指南. 2015(05)
[6]西方经济地理学的知识结构与研究热点——基于CiteSpace的图谱量化研究[J]. 李琬,孙斌栋.  经济地理. 2014(04)
[7]自由贸易区领域研究热点与前沿探讨——基于Citespace Ⅱ的计量分析[J]. 衣春波,许鑫.  上海经济研究. 2014(03)
[8]半夏泻心汤对糖尿病大鼠胃窦Cajal间质细胞及干细胞因子的影响[J]. 蒋楠,余跃,陈凤琴,袁莉莉,王巧民.  中国中西医结合杂志. 2013(12)
[9]半夏泻心汤对糖尿病大鼠小肠运动的影响及其作用机制研究[J]. 蒋楠,余跃,陈凤琴,袁莉莉,王巧民.  时珍国医国药. 2013(11)
[10]半夏泻心汤促进胃肠运动的有效部位筛选研究[J]. 李晋奇,童荣生,肖开春,彭成,刘中飞,李翅翔.  实用医院临床杂志. 2013(06)

博士论文
[1]巨噬细胞活化对先天性巨结肠Cajal间质细胞及肠道电活动的影响[D]. 陈绪勇.华中科技大学 2017
[2]胃电刺激对ICC表型及ICC-ENS突触连接可塑性的影响[D]. 李翠萍.华中科技大学 2008
[3]小鼠小肠Cajal间质细胞缺失模型的建立及SCF促其恢复研究[D]. 贾后军.第三军医大学 2005

硕士论文
[1]CKD患者肾组织α-SMA的表达与颈动脉内膜厚度的关系[D]. 周瑶.河北医科大学 2014
[2]半夏泻心汤对糖尿病大鼠Cajal间质细胞、肠神经系统及CBS的影响[D]. 蒋楠.安徽医科大学 2014
[3]半夏泻心汤调节胃肠动力的物质基础及作用机理研究[D]. 肖开春.西南交通大学 2013
[4]牵张应变对小鼠小肠Cajal间质细胞起搏电流的影响[D]. 韩燕飞.上海交通大学 2008



本文编号：3563184