基于天然免疫Toll样受体信号通路探讨洁泽1号抗HSV-2作用机制
发布时间：2022-02-14 22:59
第一部分HSV-2感染VK2细胞不同时间点Toll样受体信号通路的变化【目的】为建立良好的体外HSV-2感染VK2/E6E7细胞的模型以利后续实验,需探索出一种简便稳定快速,可扩增出大量满足毒力需求的HSV-2的方法。并在此基础上研究HSV-2感染VK2/E6E7模型不同时间点TRLs信号通路各关键蛋白分子及终末免疫因子的变化,为进一步探讨中药复方洁泽1号基于天然免疫TRLs信号通路抗HSV-2的作用机制奠定基础。【方法】首先采用以Vero细胞为宿主常规培养法、以VK2/E6E7细胞为宿主连续复壮法和以Vero细胞为宿主浓缩扩增体系法三种方法来扩增病毒,以Reed-Muench法测定每种方法所扩增HSV-2的TCID50和以MTT法测定每种方法所扩增HSV-2感染VK2/E6E7细胞的存活率,来评价其是否达到建模成功的标准、毒力高低、稳定程度和扩增效率。分别在病毒感染细胞的0、2、4、6、12、18和24小时,采用MTT法测定细胞存活率,流式凋亡法检测细胞凋亡率,Western Blot法检测TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR9、g D、HVEM、My D88、TRIF、I...
【文章来源】：华中科技大学湖北省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：141 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
HSV-2在Vero细胞中扩增时的细胞形态和收获时机（倒置显微镜100×）
图 2 HSV-2 在 VK2/E6E7 细胞中扩增时的细胞形态和收获时机（倒置显微镜 100×）（图左为铺满孔底时的正常 VK2 细胞，图右为达到收获标准时的 VK2 细胞）从图 2 可观察到，正常的 VK2/E6E7 细胞像铺路石样排列，形态呈梭形，核仁明显，核膜及胞膜完整，有少量呈球形的凋亡细胞，当 VK2/E6E7 细胞感染 HSV-2 且达到收获标准时，整个视野内的细胞全变球形或皱缩，核仁消失，核膜破碎，大部分细胞呈肿胀的空泡状，折光性增强。3.以 Vero 为宿主常规培养的 HSV-2 病毒滴度及感染 VK2/E6E72 细胞存活率3.1 以 Vero 为宿主常规法培养的 HSV-2 病毒滴度测定当各不同稀释倍数的病毒组中细胞的 CPE 现象稳定后结果汇总如下：表 1 以 Vero 常规培养的 HSV-2 病毒 TCID50 测定结果病毒稀释倍数 CPE 孔 无 CPE 孔 累积 CPE 孔 累积无 CPE 孔 CPE 孔比例10-16 0 40 0 40/4010-26 0 34 0 34/34-3
华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文距离比=（5/9-1/2）/(5/9-2/10)=0.16lgTCID50=0.16×（-1）＋（-7）=-7.16因此，其 TCID50=10-7.16，即 100ul 病毒野种含有 107.16个 TCID50。3.2 以 Vero 为宿主常规法培养的 HSV-2 病毒感染 VK2/E6E7 细胞形态学显微镜下观察以 Vero 常规培养的 HSV-2 稀释 5 倍、10 倍、20 倍、100 倍感染 VK2/E6E7 细胞的细胞形态及数量，如下图：
【参考文献】：
期刊论文
[1]Toll样受体/配体在生殖器疱疹病毒感染识别中的作用[J]. 黄华,乔婷婷,孙博洋,陈琢. 中国妇幼保健. 2014(27)
[2]抗疱疹病毒药物的研究[J]. 刘媛媛,杨占秋. 医学新知杂志. 2014 (03)
[3]生殖器疱疹研究和治疗进展[J]. 于艳秋,于洪钧. 中国中西医结合皮肤性病学杂志. 2014(02)
[4]洁泽2号预防白色念珠菌阴道炎的实验研究[J]. 陈琢,孔小锋,王容,马永贵,徐丽君,陆付耳,黄光英. 中国妇幼保健. 2009(06)
[5]洁泽2号对小鼠滴虫性阴道炎预防作用的实验研究[J]. 陈琢,王容,马永贵,孔小锋,陆付耳,黄光英. 中国妇幼保健. 2009(05)
[6]生殖器疱疹的中医治疗研究进展[J]. 李燕芳,邹国明,李晓华. 北京中医药大学学报(中医临床版). 2006(04)
[7]喷昔洛韦体外抗病毒的药效学研究[J]. 侯炜,肖红,毛琳,肖春惠,程丽,熊增慧,杨继江,杨占秋. 华西药学杂志. 2004(02)
硕士论文
[1]Brincidofovir（CMX001）凝胶剂的研究[D]. 付晓.中国人民解放军军事医学科学院 2016
[2]清解方联合大剂量鱼腥草治疗单纯疱疹病毒性角膜炎的临床观察[D]. 郑露.湖北中医药大学 2015
本文编号：3625424
【文章来源】：华中科技大学湖北省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：141 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
HSV-2在Vero细胞中扩增时的细胞形态和收获时机（倒置显微镜100×）
图 2 HSV-2 在 VK2/E6E7 细胞中扩增时的细胞形态和收获时机（倒置显微镜 100×）（图左为铺满孔底时的正常 VK2 细胞，图右为达到收获标准时的 VK2 细胞）从图 2 可观察到，正常的 VK2/E6E7 细胞像铺路石样排列，形态呈梭形，核仁明显，核膜及胞膜完整，有少量呈球形的凋亡细胞，当 VK2/E6E7 细胞感染 HSV-2 且达到收获标准时，整个视野内的细胞全变球形或皱缩，核仁消失，核膜破碎，大部分细胞呈肿胀的空泡状，折光性增强。3.以 Vero 为宿主常规培养的 HSV-2 病毒滴度及感染 VK2/E6E72 细胞存活率3.1 以 Vero 为宿主常规法培养的 HSV-2 病毒滴度测定当各不同稀释倍数的病毒组中细胞的 CPE 现象稳定后结果汇总如下：表 1 以 Vero 常规培养的 HSV-2 病毒 TCID50 测定结果病毒稀释倍数 CPE 孔 无 CPE 孔 累积 CPE 孔 累积无 CPE 孔 CPE 孔比例10-16 0 40 0 40/4010-26 0 34 0 34/34-3
华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文距离比=（5/9-1/2）/(5/9-2/10)=0.16lgTCID50=0.16×（-1）＋（-7）=-7.16因此，其 TCID50=10-7.16，即 100ul 病毒野种含有 107.16个 TCID50。3.2 以 Vero 为宿主常规法培养的 HSV-2 病毒感染 VK2/E6E7 细胞形态学显微镜下观察以 Vero 常规培养的 HSV-2 稀释 5 倍、10 倍、20 倍、100 倍感染 VK2/E6E7 细胞的细胞形态及数量，如下图：
【参考文献】：
期刊论文
[1]Toll样受体/配体在生殖器疱疹病毒感染识别中的作用[J]. 黄华,乔婷婷,孙博洋,陈琢. 中国妇幼保健. 2014(27)
[2]抗疱疹病毒药物的研究[J]. 刘媛媛,杨占秋. 医学新知杂志. 2014 (03)
[3]生殖器疱疹研究和治疗进展[J]. 于艳秋,于洪钧. 中国中西医结合皮肤性病学杂志. 2014(02)
[4]洁泽2号预防白色念珠菌阴道炎的实验研究[J]. 陈琢,孔小锋,王容,马永贵,徐丽君,陆付耳,黄光英. 中国妇幼保健. 2009(06)
[5]洁泽2号对小鼠滴虫性阴道炎预防作用的实验研究[J]. 陈琢,王容,马永贵,孔小锋,陆付耳,黄光英. 中国妇幼保健. 2009(05)
[6]生殖器疱疹的中医治疗研究进展[J]. 李燕芳,邹国明,李晓华. 北京中医药大学学报(中医临床版). 2006(04)
[7]喷昔洛韦体外抗病毒的药效学研究[J]. 侯炜,肖红,毛琳,肖春惠,程丽,熊增慧,杨继江,杨占秋. 华西药学杂志. 2004(02)
硕士论文
[1]Brincidofovir（CMX001）凝胶剂的研究[D]. 付晓.中国人民解放军军事医学科学院 2016
[2]清解方联合大剂量鱼腥草治疗单纯疱疹病毒性角膜炎的临床观察[D]. 郑露.湖北中医药大学 2015
本文编号：3625424
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