薄荷醇在Caco-2细胞模型中的促吸收机制研究

发布时间：2022-04-27 20:29

　　目的:以Caco-2细胞为模型,从细胞和分子水平考察薄荷醇促吸收作用与P-糖蛋白（P-gp）的关系,以及是否是通过NF-кB信号传导通路来调控P-gp的表达,为薄荷醇应用于临床,作为药物肠道吸收促进剂奠定基础。方法:1.药物对Caco-2细胞毒性范围配制不同浓度梯度的薄荷醇、P-gp抑制剂维拉帕米、NF-кB信号通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸钠简称PDTC（Ammonium pyrrolidinedithiocarbamate）,利用Caco-2细胞进行毒性实验,酶标仪测定OD值,确定Caco-2细胞存活率不小于90%的各给药浓度,同时设定薄荷醇的高、中、低三个浓度组。2.药物对Caco-2细胞的时效毒性用确定的薄荷醇、维拉帕米、PDTC对于Caco-2细胞的敏感药物剂量进行时效毒性研究。使各组药物作用Caco-2细胞,并在5个时间点（1h、2h、12h、24h、48h）分别加入CCK-8,测定各组OD值,观察给药后不同时间点Caco-2细胞的存活率。3.薄荷醇对Caco-2细胞中MDR1基因及P-gp蛋白表达影响将低浓度薄荷醇组、中浓度薄荷醇组、高浓度薄荷醇组、维拉帕米组、PDTC组... 

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
序言
    1 研究背景
        1.1 薄荷醇的促透作用研究
        1.2 Caco-2 细胞中P-gp的研究
        1.3 P-gp相关信号通路的研究
    2 研究的创新点
    3 设计思想和研究方案
        3.1 设计思想
        3.2 研究方案
    4 研究意义
第一章 药物对Caco-2 细胞毒性范围研究
    1 实验材料
        1.1 主要仪器设备
        1.2 试剂
        1.3 实验细胞
    2 实验方法
        2.1 药物与试剂配制
        2.2 Caco-2 细胞的培养
        2.3 Caco-2 细胞模型的建立
        2.4 采用CCK-8 法测定药物对Caco-2 细胞毒性范围
    3 结果
    4 讨论
第二章 药物对Caco-2 细胞的时效毒性研究
    1 实验材料
    2 实验方法
        2.1 细胞培养
        2.2 Caco-2 细胞分组给药
    3 结果
    4 讨论
第三章 薄荷醇对Caco-2 细胞中MDR1基因及P-gp蛋白表达的影响
    第一节 薄荷醇对MDR1表达的影响
        1 实验材料
            1.1 主要仪器设备
            1.2 主要试剂
        2 实验方法
            2.1 药物与试剂配制
            2.2 细胞培养
            2.3 Caco-2 细胞总RNA的提取
            2.4 逆转录实验
            2.5 荧光定量PCR反应
        3 统计学处理
        4 实验结果
            4.1 P-gp及内参引物检测
            4.2 不同时间点薄荷醇对P-gp MDR1表达的影响
        5 讨论
    第二节 薄荷醇对P-糖蛋白表达的影响
        1 实验材料
            1.1 主要仪器设备
            1.2 主要试剂
        2 实验方法
            2.1 药物试剂配制
            2.2 细胞的培养给药
            2.3 细胞总蛋白提取
            2.4 BCA蛋白定量
            2.5 目的蛋白western blot正式实验
        3 统计学处理
        4 实验结果
            4.1 不同时间点薄荷醇对P-gp蛋白表达影响的结果
        5 讨论
第四章 薄荷醇对Caco-2 细胞NF-kB信号通路的影响
    1 实验材料
        1.1 主要仪器设备
        1.2 主要试剂
    2 实验方法
        2.1 药物试剂配制
        2.2 细胞培养
        2.3 Caco-2 细胞总RNA的提取
        2.4 荧光定量PCR实验
        2.5 细胞总蛋白提取
        2.6 细胞质细胞核蛋白的分离提取
        2.7 BCA蛋白定量与Western blot
    3 统计学处理
    4 实验结果
        4.1 IkBa及GAPDH引物检测
        4.2 不同时间点薄荷醇对Ik Ba mRNA表达影响结果
        4.3 不同时间点薄荷醇对IкBa蛋白表达影响结果
        4.4 不同浓度薄荷醇在不同时间点对NF-kB p65核/浆蛋白表达水平的影响
    5 讨论
第五章 总结
参考文献
综述
    参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文
中英文缩略词表


【参考文献】：
期刊论文
[1]Mechanistic studies of the transport of peimine in the Caco-2 cell model[J]. Lihua Chen,Xueping Lu,Xinli Liang,Dandan Hong,Zhiyu Guan,Yongmei Guan,Weifeng Zhu.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2016(02)
[2]CCK-8法检测药物影响肿瘤细胞增殖的优化研究[J]. 张会鲜,何琪杨.  药学研究. 2016(02)
[3]远志水解产物的大鼠肠吸收特性和机制研究[J]. 黄立华,王建,张璐,罗世兰,陈畅,杜娟.  中药材. 2015(03)
[4]白头翁皂苷在大鼠体内的肠吸收研究[J]. 刘亚丽,宋永贵,关志宇,张凌,杨世林,王萌,陈振华,苏丹.  中国中药杂志. 2015(03)
[5]单向灌流法研究巴戟天低聚糖的大鼠肠吸收特性[J]. 邓少东,张鹏,林励,肖凤霞,林靖然.  中国中药杂志. 2015(01)
[6]Absorption characteristics of the total alkaloids from Mahonia bealei in an in situ single-pass intestinal perfusion assay[J]. SUN Yu-He,HE Xin,YANG Xiao-Lin,DONG Cui-Lan,ZHANG Chun-Feng,SONG Zi-Jing,LU Ming-Xing,YANG Zhong-Lin,LI Ping.  Chinese Journal of Natural Medicines. 2014(07)
[7]薄荷醇对芍药苷透皮吸收作用的影响[J]. 温亚,韩彬,戴王强,刘德明,韩宗余,王晖,胡旭光.  湖南中医杂志. 2014(05)
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[9]外用丹参酮乳膏抗痤疮药效及机制[J]. 刘文彬,梁庆,王晖,黄钊.  中国实验方剂学杂志. 2012(14)
[10]丁香苦苷大鼠在体肠吸收动力学研究[J]. 曹颖,李永吉,吕邵娃,王艳宏.  中国中药杂志. 2012(10)

博士论文
[1]原花青素通过抑制P-糖蛋白功能与表达从而逆转肿瘤多药耐药作用的机制研究[D]. 赵博欣.南方医科大学 2014

硕士论文
[1]薄荷醇通过P糖蛋白对丹参素肠吸收影响的研究[D]. 恽昊.广东药科大学 2016



本文编号：3649121