积雪草酸通过Lipin1/TLR4信号通路调控肝纤维化作用机制的研究

发布时间：2022-05-10 20:29

　　目的:积雪草酸（Asiatic acid,ASA）是中药材积雪草的主要化学成份之一是五环三萜类化合物。研究显示积雪草酸具有很好的肝保护作用,本研究采用硫代乙酰胺（TAA）诱导小鼠肝纤维化模型,采用不用刺激物活化肝星状细胞,小鼠巨噬细胞以及人单核巨噬细胞,探讨积雪草酸通过Lipin1-TLR4-NLRP3信号通路对肝纤维化的改善作用和具体的调控机制。方法:腹腔注射TAA（200mg/kg或100mg/kg）,共五周,制作小鼠肝纤维化模型。并每天灌胃小鼠以不同剂量的积雪草酸（5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg）,每天灌胃,连续4周。最后一次给药18h后,获得小鼠血清和肝脏,保存于存于-80℃冰箱。用血清检测试剂盒测定血清中谷丙氨酸转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）、天门冬氨酸转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）的水平。肝脏组织做H&E染色、Masson染色、天狼猩红染色与IHC免疫组织化学4种方法染色,观察肝组织病理学改变。检测肝纤维化指标α-SMA与炎性因子TLR4和Lipin-1/2的蛋白与mRNA表达... 

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 绪论
第二章 积雪草酸改善TAA诱导体内肝纤维化的模型
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验器材
        2.1.2 实验试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 动物饲养管理
        2.2.2 生化指标的测定
        2.2.3 H&E染色
        2.2.4 Masson三色胶原染色
        2.2.5 天狼猩红染色实验
        2.2.6 免疫组化实验
        2.2.7 组织荧光染色实验
        2.2.8 Western bloting
        2.2.9 RT-PCR检测mRNA的表达
        2.2.10 统计学处理
    2.3 实验结果
        2.3.1 积雪草酸对硫代乙酰胺模型小鼠血清中ALT、AST含量的影响
        2.3.2 积雪草酸对硫代乙酰胺模型小鼠肝脏组织形态学的影响
        2.3.3 积雪草酸对肝纤维化指标的影响
        2.3.4 积雪草酸对Lipin-1和P2X7R/NLRP3信号通路的影响
        2.3.5 积雪草酸肝纤维化模型中对TLR4信号通路的影响
        2.3.6 积雪草酸对炎症因子表达的抑制作用
第三章 积雪草酸抑制TGF-β诱导的肝星状细胞活化与LPS对巨噬细胞的激活
    3.1
        3.1.1 实验器材
        3.1.2 实验试剂
    3.2 体内实验方法
        3.2.1 细胞培养与处理
        3.2.2 MTT实验
        3.2.3 细胞实验方法
    3.3 统计学处理
    3.4 实验结果
        3.4.1 积雪草酸对细胞毒性的研究
        3.4.2 积雪草酸与TGF-β活化t-HSC细胞对肝纤维化指标的影响
        3.4.3 积雪草酸对TGF-β活化t-HSC细胞中P2X7R,Lipin-1,Lipin-2,NLRP3表达的影响
        3.4.4 积雪草酸对活化的t-HSC细胞中TLR4信号通路的影响
        3.4.5 积雪草酸对EtOH活化t-HSC细胞中Lipin-1-P2X7R-NLRP-3表达的影响
        3.4.6 积雪草酸对EtOH活化的t-HSC细胞中TLR4信号通路的影响
        3.4.7 积雪草酸对LPS激活的Raw 264.7细胞中P2X7R,Lipin-1,NLRP-3表达的影响
        3.4.8 积雪草酸对LPS激活的Raw 264.7细胞中TLR4信号通路的影响
        3.4.9 积雪草酸对LPS激活的THP-1细胞中P2X7R,Lipin-1,NLRP-3的表达与TLR4信号通路的影响
第四章 讨论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3652645