京尼平苷对大鼠胰岛素分泌的影响及机制研究

发布时间：2022-07-02 14:36

　　目的:京尼平苷是栀子的主要药效成分,属于环烯醚萜葡萄糖苷类化合物,具有抗糖尿病、抗炎、抗氧化、利胆保肝等作用,本课题旨在研究在离体大鼠胰岛组织及胰岛β细胞中京尼平苷对胰岛素分泌的调控作用及其潜在机制,为京尼平苷作为糖尿病治疗药物提供一定的理论依据。方法:（1）选用雄性SD大鼠,处死后将其腹部在无菌状态下剖开,充分暴露胰腺及周围区域,将1mg/ml胶原酶P经胆总管注入胰腺并剥离,37℃水浴消化11分钟,中止消化,震荡混匀,行梯度离心获得胰岛。取适量胰岛,用dispaseⅡ消化5分钟,得到单个胰岛细胞。（2）在显微镜下挑取生长良好的胰岛,用放射免疫法检测京尼平苷及其它干预药物对大鼠胰岛素分泌及cAMP含量的影响。（3）采用膜片钳技术进行各实验组的钾通道、钙通道电流及动作电位的记录。（4）应用钙荧光成像系统和荧光显微镜观察京尼平苷对细胞内钙离子浓度的影响情况。结果:（1）在8.3mmol/L的葡萄糖条件下,不同浓度的京尼平苷（1、10、100μmol/L）剂量依赖性的促进胰岛素分泌,在10μmol/L时达到最大促泌效应,低糖（2.8mmol/L）下则无作用。（2）随葡萄糖浓度升高（2.8、8... 

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【学位级别】：硕士

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前言
第一部分 电压依赖性钾通道和钙通道参与京尼平苷对大鼠胰岛素分泌的调控
    1 材料与方法
        1.1 实验动物
        1.2 主要药品与试剂
        1.3 主要溶液的配制方法
        1.4 主要实验仪器
        1.5 大鼠胰岛组织的分离及培养
        1.6 大鼠胰岛β细胞的分离和培养
        1.7 在组织水平观察不同浓度的京尼平苷对大鼠胰岛素分泌的影响
        1.8 在细胞水平探究京尼平苷调控胰岛素分泌与电压依赖性钾（Kv）通道以及动作电位的关系
        1.9 通过胰岛素分泌实验在组织水平进一步探讨京尼平苷调控胰岛素分泌与Kv通道的关系
        1.10 通过膜片钳实验观察京尼平苷对胰岛β细胞钙离子通道的影响
        1.11 数据处理及统计
    2 结果
        2.1 不同浓度京尼平苷对胰岛素分泌的影响
        2.2 京尼平苷在不同葡萄糖浓度下对胰岛素分泌的影响
        2.3 京尼平苷抑制了胰岛β细胞的Kv通道
        2.4 京尼平苷可延长胰岛β细胞的动作电位时程
        2.5 Kv通道在京尼平苷调控大鼠胰岛素分泌中发挥重要作用
        2.6 京尼平苷促胰岛素分泌作用与电压门控性钙通道相关
    3 讨论
    4 结论
第二部分 京尼平苷通过GLP-1R/cAMP/PKA信号通路调控大鼠胰岛素分泌
    1 方法与材料
        1.1 实验动物
        1.2 实验所需溶液的配制
        1.3 主要使用仪器
        1.4 大鼠胰岛及胰岛细胞的分离和培养
        1.5 通过胰岛素胞外分泌实验探讨GLP-1R/cAMP及下游信号通路在京尼平苷调控胰岛素分泌中发挥的作用
        1.6 通过进一步检测胰岛内cAMP含量探究GLP-1R/AC信号途径与京尼平苷促胰岛素分泌作用的关系
        1.7 通过膜片钳实验探究GLP-1R在京尼平苷调控Kv通道中的作用
        1.8 通过膜片钳实验观察PKA信号途径在京尼平苷调控Kv通道中的作用
        1.9 通过钙离子成像技术观察京尼平苷及GLP-1R对胰岛β细胞内钙离子浓度的影响
        1.10 统计学分析
    2 结果
        2.1 京尼平苷通过GLP-1R、cAMP及PKA信号通路发挥促胰岛素分泌作用
        2.2 京尼平苷通过GLP-1R/AC信号通路使胰岛内cAMP含量增多
        2.3 GLP-1R在京尼平苷调控Kv通道中发挥重要作用
        2.4 京尼平苷抑制Kv通道的作用与PKA信号通路有关
        2.5 京尼平苷使胰岛β细胞内的钙离子浓度升高
    3 讨论
    4 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]糖尿病——中国人的健康灾难[J]. 米生权,赵文华.  城市与减灾. 2015(01)
[2]KV通道对大鼠胰岛素分泌作用的研究[J]. 郭庆,李小东,高璟英,张琬,王慧,刘云峰,章毅.  中西医结合心脑血管病杂志. 2014(05)
[3]京尼平及其衍生物的研究进展[J]. 陈河如,罗军,黄照,杨健.  暨南大学学报(自然科学与医学版). 2013(05)
[4]京尼平的肝病药理机制研究进展[J]. 彭晓旭,李华,闫晓风,李伯勤,胡旭东,刘平.  中西医结合肝病杂志. 2013(03)
[5]京尼平苷透皮制剂抗炎镇痛作用的研究[J]. 施华平,张杰,游伟良,曹维,孙敏捷.  药学与临床研究. 2012(04)
[6]栀子苷及其衍生物药理活性的研究进展[J]. 赵亚南,张卫明,钱骅,赵伯涛.  中国野生植物资源. 2011(01)
[7]京尼平的研究进展及其药理价值[J]. 杨轶舜,张彤,于筛成.  中成药. 2011(01)
[8]京尼平苷对慢性前列腺炎大鼠前列腺组织中细胞因子的影响[J]. 晋玉章,马勇,何瑞波.  武警医学院学报. 2009(11)
[9]栀子苷对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用[J]. 丁嵩涛,刘洪涛,李文明,李秀英,于超.  中国药理学通报. 2009(06)
[10]清开灵有效组分对大鼠脑微血管内皮细胞体外缺血再灌注损伤模型核转录因子-κB的影响[J]. 高永红,邢雁伟,袁拯忠,朱陵群,李澎涛,王硕仁.  中西医结合学报. 2009(02)

博士论文
[1]京尼平苷调节INS-1细胞胰岛素分泌的分子机制研究[D]. 郭莉霞.重庆大学 2011

硕士论文
[1]腺苷酸环化酶Ⅲ（AC3）在非神经细胞中定位的研究[D]. 郝江叶.河北大学 2014



本文编号：3654541