开心散加味新方有效成分对N2a/APP695细胞Aβ产生的影响及相关机制研究

发布时间：2022-07-14 17:42

　　目的:在小鼠神经母细胞瘤细胞N2a（N2a/WT）及稳定表达人源APP695的N2a（N2a/APP695）细胞的AD细胞模型中,研究开心散和开心散加味新及开心散加味新方中几种不同单体对N2a/APP695细胞中淀粉样前体蛋白（APP）的影响;选取目标单体,研究其对N2a/APP695细胞中APP、相关分泌酶（ADAM10、BACE1、PSEN1）、酶解产物（β-CTF、Aβ）的影响及相关分子机制;在N2a/APP695细胞及LPS诱导的N2a/WT和BV2细胞炎症模型中,观察其对炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA水平影响。方法:用含有一系列浓度开心散和开心散加味新方水提液以及丹参素、隐丹参酮、丹酚酸A、川芎嗪和盐酸川芎嗪溶液的培养基分别培养N2a/APP695细胞24h后,采用Westernblot检测细胞中APP含量变化,筛选目标单体（丹参素）。用含有不同浓度丹参素溶液的培养基培养分别N2a/APP695细胞24h后,CCK-8法检测细胞活性;Western blot检测细胞中APP、ADAM10、BACE1、PSEN1、β-CTF、p-Akt/Akt、p-PI3K/... 

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

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第一章 前言
    1.1 阿尔兹海默病
        1.1.1 阿尔兹海默病概况
        1.1.2 导致AD的因素
        1.1.3 AD的细胞与分子致病机理
        1.1.4 Aβ的神经毒性
    1.2 阿尔兹海默病与炎症
        1.2.1 Aβ的致炎作用
        1.2.2 小胶质细胞与炎症
        1.2.3 炎性因子在AD中的作用
    1.3 开心散与AD
        1.3.1 开心散抗痴呆研究
        1.3.2 人参中人参皂苷的抗痴呆作用研究
        1.3.3 远志中寡糖酯及远志皂苷的抗痴呆作用研究
        1.3.4 石菖蒲的抗痴呆作用研究
        1.3.5 茯苓的抗痴呆作用研究
        1.3.6 川芎的抗痴呆作用研究
        1.3.7 丹参的抗痴呆作用研究
        1.3.8 巴戟天的抗痴呆作用研究
    1.4 本论文研究的内容与意义
    1.5 本论文拟解决的主要问题
第二章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 试剂及抗体
        2.1.2 细胞株
        2.1.3 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 溶液配制
        2.2.2 细胞培养
        2.2.3 实验分组
        2.2.4 CCK-8法测定细胞活性
        2.2.5 SDS-PAGE和蛋白质免疫印迹
        2.2.6 细胞总RNA提取
        2.2.7 RT-PCR
        2.2.8 免疫荧光
    2.3 数据处理
第三章 实验结果
    3.1 N2a/WT与N2a/APP695细胞形态
    3.2 开心散及开心散加味新方水提液对N2a/WT和N2a/APP695细胞活性影响
    3.3 开心散及开心散加味新方水提液对N2a/APP695细胞中APP和BACE1表达响
    3.4 开心散加味新方中不同单体对N2a/APP695细胞APP含量影响
    3.5 丹参素对N2a/WT和N2a/APP695细胞活性影响
    3.6 丹参素对N2a/APP695细胞中APP、ADAM10、BACE1、PSEN1和β-CTF影响
    3.7 丹参素对N2a/APP695细胞内APP、ADAM10、BACE1和PSEN1mRNA水平影响
    3.8 免疫荧光研究丹参素对N2a/APP695细胞中APP和BACE1影响
    3.9 免疫荧光研究丹参素对N2a/APP695细胞中Aβ表达影响
    3.10 丹参素通过激活N2a/APP695细胞中PI3K/Akt通路减少BACE1产生
    3.11 丹参素对N2a/APP695细胞IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA水平影响
    3.12 丹参素对LPS诱导的N2a/WT细胞IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA水平影
    3.13 丹参素对LPS诱导的BV2细胞IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA水平影响
第四章 讨论
    4.1 开心散及开心散加味新方对AD的治疗作用
    4.2 中药单体及AD细胞模型的选取
    4.3 丹参素对APP、BACE1和Aβ的影响
    4.4 丹参素通过激活PI3K/Akt通路降低BACE1产生
    4.5 丹参素的抗炎作用
    4.6 开心散加味新方及丹参素治疗AD的前景
结论与展望
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[10]巴戟天对小鼠学习记忆障碍的影响[J]. 叶志雄,肖柳英,潘竞锵.  广州医科大学学报. 2015(02)

博士论文
[1]ApoE4通过影响NMDA受体功能加剧5XFAD小鼠认知功能障碍[D]. 刘德山.福建医科大学 2013



本文编号：3661584