基于Ca 2+ -CaM/NF-κB通路研究三种莲子心生物碱抑制巨噬细胞过度活化的作用及机制

发布时间：2022-07-19 12:48

　　巨噬细胞是人体先天性免疫应答中重要的成员,参与多种免疫过程。在炎症反应中起着重要的调节作用,巨噬细胞适度活化释放NO、白介素1β（IL-1β）、白介素8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、活性氧（ROS）等从而诱导细胞免疫以及杀灭病原微生物。然而,过度活化的巨噬细胞促炎反应不能及时终止,会损伤机体组织和细胞,危及身体健康。论文第一部分药效学研究考察了三种莲子心生物碱（莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7过度活化的抑制作用。首先,培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,取生长状态良好的巨噬细胞,分别采用划痕实验法和Transwell法考察三种莲子心生物碱（10μM）与LPS（1μg/mL）联合作用对巨噬细胞迁移能力的影响。实验结果显示,三种莲子心生物碱可显著抑制LPS激活的巨噬细胞迁移能力的增强。其次,应用酶联免疫吸附分析实验（ELISA）考察了三种莲子心生物碱对LPS（1μg/mL）激活的巨噬细胞释放炎症因子IL-8的影响。实验结果显示,分别加入三种莲子心生物碱（0.1、0.3、1、3和10μM）与LPS共同作用于巨噬细胞4 h后,... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
引言
    0.1 巨噬细胞(macrophage,Mac)
    0.2 巨噬细胞在相关病症中的作用
        0.2.1 巨噬细胞与肿瘤
        0.2.2 巨噬细胞与动脉粥样硬化
        0.2.3 巨噬细胞与高血压
        0.2.4 巨噬细胞与糖尿病
        0.2.5 巨噬细胞在其它相关疾病中的作用
    0.3 巨噬细胞的过度活化与细胞内游离钙离子、钙调蛋白的关系
    0.4 LPS刺激的巨噬细胞中与[Ca~(2+)]_i相关的NF-κB信号转导通路
    0.5 莲子心生物碱的化学结构及药理作用
第1章 三种莲子心生物碱抑制巨噬细胞过度活化的药效学研究
    1.1 实验材料
        1.1.1 实验用细胞系
        1.1.2 实验药品与试剂
        1.1.3 实验仪器
    1.2 实验方法
        1.2.1 细胞培养和药物配制
        1.2.2 划痕实验检测巨噬细胞的迁移能力
        1.2.3 Transwell法检测巨噬细胞的迁移能力
        1.2.4 ELISA法考察巨噬细胞内IL-8释放的变化
        1.2.5 统计学方法
    1.3 实验结果
        1.3.1 三种莲子心生物碱对LPS激活的巨噬细胞迁移能力的影响(划痕实验法)
        1.3.2 三种莲子心生物碱对LPS激活的巨噬细胞迁移能力的影响(Transwell法)
        1.3.3 三种莲子心生物碱对LPS激活的巨噬细胞IL-8释放的影响
    1.4 分析与讨论
    1.5 小结
第2章 三种莲子心生物碱抑制巨噬细胞过度活化的机制研究
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验用细胞系
        2.1.2 实验药品与试剂
        2.1.3 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 Westernblot分析法
        2.2.2 巨噬细胞内IκBα磷酸化和降解的检测
        2.2.3 流式细胞仪检测胞浆内游离钙离子变化
        2.2.4 荧光分光光度法检测胞浆内游离钙离子变化
        2.2.5 计算机分子对接模拟考察三种莲子心生物碱与钙调蛋白的结合
        2.2.6 巨噬细胞内钙调蛋白(CAM)表达的检测
        2.2.7 统计学方法
    2.3 实验结果
        2.3.1 三种莲子心生物碱对LPS活化的巨噬细胞内IκBα磷酸化的影响
        2.3.2 三种莲子心生物碱对LPS活化的巨噬细胞内IκBα降解的影响
        2.3.3 三种莲子心生物碱对LPS活化的巨噬细胞内[Ca~(2+)]_i水平的影响(流式细胞仪法)
        2.3.4 三种莲子心生物碱对LPS活化的巨噬细胞内[Ca~(2+)]_i水平的影响(荧光分光光度法)
        2.3.5 三种莲子心生物碱与钙调蛋白的作用
        2.3.6 三种莲子心生物碱对LPS活化的巨噬细胞内钙调蛋白表达的影响
    2.4 分析与讨论
    2.5 小结
结论
致谢
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]巨噬细胞移动抑制因子与自身免疫性疾病的研究进展[J]. 吴文昌,刘莎莎,张向君,周玮,王加林.  医学综述. 2013(06)
[2]莲心碱提取分离的研究进展[J]. 陈昌国,董兰.  化学工业与工程技术. 2008(02)
[3]异莲心碱对百草枯诱导的小鼠急性肺损伤及肺纤维化的保护作用(英文)[J]. 汤国想,赵立波,王晓敏,张韶辉,王嘉陵.  中国药理学与毒理学杂志. 2007(06)
[4]双苄基异喹啉类生物碱的心血管药理作用(英文)[J]. 钱家庆.  Acta Pharmacologica Sinica. 2002(12)
[5]莲心碱的研究概况和进展[J]. 罗顺德,王辉.  中国药房. 2001(10)

硕士论文
[1]莲芯粉中甲基莲心碱的酶法提取及抗氧化研究[D]. 任美.湖南农业大学 2016



本文编号：3663443