合欢皮抗焦虑活性部位作用机理研究及主要活性成分对PC12细胞凋亡的影响
发布时间：2022-07-29 10:43
焦虑症属于一种慢性、长期、反复发作的精神性疾病,可造成身心两方面的异常,严重者甚至威胁生命,影响患者及家人生活质量。目前,临床抗焦虑药物普遍存在一些明显的副作用,因此开发安全、高效、低毒的天然抗焦虑药物具有重要的理论意义和实际应用价值。合欢皮,为豆科植物合欢Albizia julibrissin Durazz.的干燥树皮,是中医常用的传统镇静安神类中药,其药理作用广泛,具有镇静、抗焦虑、抗肿瘤、抗生育、PAF受体拮抗等活性。现代研究表明合欢皮能够改善焦虑模型小鼠的焦虑样行为,但尚未有关于其抗焦虑作用的细胞及分子机制的研究报道。本项目组前期的研究表明,木脂素类物质是合欢皮主要的抗焦虑有效物质。本文采用经典抗焦虑活性评价模型对分离得到的木脂素类物质抗焦虑主要活性部位（S-75部位）及其主要活性成分进行抗焦虑作用机制研究,研究内容分为以下三个部分:从整体动物水平,考察合欢皮S-75部位对急性应激后高架十字迷宫模型小鼠脑组织中5-HT1A受体(5-HT1AR)、GABAA受体（GABAAR）及5-HT
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
前言
第一章 合欢皮木脂素类物质抗焦虑主要活性部位作用机制的整体研究..
1 实验材料
1.1 仪器
1.2 试剂
1.3 实验动物及分组
2 实验方法
2.1 S-75部位对急性应激后高架十字迷宫模型小鼠脑组织中GABA_AR和5-HT_(1A)R蛋白表达量的影响
2.2 S-75部位对急性应激后高架十字迷宫模型小鼠脑组织中GABA_AR和5-HT_(1A)RmRNA表达量的影响
2.3 S-75部位对急性应激后高架十字迷宫模型小鼠脑组织中PKA,CREB,BDNF和TRKB蛋白表达量的影响
2.4 S-75部位对急性应激后高架十字迷宫模型小鼠脑组织中cAMP水平的影响
2.5 数据分析
3 实验结果
3.1 S-75部位对急性应激后高架十字迷宫模型小鼠脑组织中GABA_AR和5-HT_(1A)R蛋白表达量的影响
3.2 S-75部位对急性应激后高架十字迷宫模型小鼠脑组织中GABA_AR和5-HT_(1A)RmRNA表达量的影响
3.3 S-75部位对急性应激后高架十字迷宫模型小鼠脑组织中PKA,CREB,BDNF和TRKB蛋白表达量的影响
3.4 S-75部位对急性应激后高架十字迷宫模型小鼠脑组织中cAMP水平的影响
4 讨论
5 结论
第二章 合欢皮木脂素类物质抗焦虑主要活性部位对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用
1 实验材料
1.1 仪器
1.2 试剂与试药
1.3 细胞株
2 实验方法
2.1 PC12细胞培养
2.2 皮质酮(corticosterone,CORT)诱导PC12细胞损伤模型制备
2.3 受体阻断剂及阳性药的浓度筛选
2.4 S-75部位对皮质酮诱导的PC12细胞的保护作用
2.5 S-75部位及其协同受体阻断剂对皮质酮诱导的PC12细胞中5-HT_(1A)R和GABA_ARmRNA表达量的影响
2.6 S-75部位及5-HT_(1A)R受体阻断剂对皮质酮诱导的PC12细胞中PKA，CREB，BDNF和TRKB蛋白表达量的影响
2.7 S-75部位及5-HT_(1A)R受体阻断剂对皮质酮诱导的PC12细胞中cAMP水平的影响
2.8 数据分析
3 实验结果
3.1 皮质酮对PC12细胞损伤的MTT测定结果
3.2 受体阻断剂及阳性药的浓度筛选
3.3 S-75部位对皮质酮诱导的PC12细胞增殖的影响
3.4 S-75部位及其协同受体阻断剂对皮质酮诱导的PC12细胞中5-HT_(1A)R和GABA_ARmRNA表达量的影响
3.5 S-75部位及5-HT_(1A)R受体阻断剂对皮质酮诱导的PC12细胞中PKA,CREB,BDNF和TRKB蛋白表达量的影响
3.6 S-75部位及5-HT_(1A)R受体阻断剂对皮质酮诱导的PC12细胞中cAMP水平的影响
4 讨论
5 结论
第三章 木脂素类物质主要活性成分对皮质酮损伤的PC12细胞凋亡及线粒体凋亡信号通路的影响
1 实验材料
1.1 仪器
1.2 试剂及试药
2 实验方法
2.1 S-75部位及其主要活性成分对皮质酮诱导的PC12细胞增殖的影响
2.2 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞的保护作用
2.3 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞LDH渗漏的影响
2.4 AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞术检测SRG对皮质酮诱导的PC12细胞凋亡的影响
2.5 TUNEL原位凋亡检测试剂盒(荧光法检测DNA片段化)检测SRG对皮质酮诱导的PC12细胞凋亡的影响
2.6 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞内[Ca~(2+)]的影响
2.7 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞线粒体膜电位(?Ψm)的影响
2.8 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞中CREB,BDNF,Bcl-2,Bax,细胞色素C(Cyt-C)和Caspase-3蛋白表达量的影响
2.9 数据分析
3 实验结果
3.1 S-75部位及其主要活性成分对皮质酮诱导的PC12细胞增殖的影响
3.2 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞的保护作用
3.3 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞LDH渗漏的影响
3.4 AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞术检测SRG对皮质酮诱导的PC12细胞凋亡的影响
3.5 TUNEL原位凋亡检测试剂盒(荧光法检测DNA片段化)检测SRG对皮质酮诱导的PC12细胞凋亡的影响
3.6 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞内[Ca~(2+)]的影响
3.7 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞线粒体膜电位(?Ψm)的影响.
3.8 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞中CREB,BDNF,Bcl-2,Bax,细胞色素C(Cyt-C)和Caspase-3蛋白表达量的影响
4 讨论
5 结论
结语与创新
文献综述
参考文献
发表论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]慢性焦虑刺激对成年雌性大鼠性激素水平的影响[J]. 郑源,张潋,张良圣,张明祥,陈燕,罗尧岳,吴涛,梁雨. 湖南中医药大学学报. 2015(01)
[2]舒郁宁心汤对焦虑大鼠行为及血清神经肽和皮质酮水平的影响[J]. 王静,陈利平,王发渭,孙志高,许成勇. 中国中医急症. 2013(09)
[3]舒肝颗粒治疗更年期焦虑症的机制研究[J]. 宋志宇,庞剑月,隋净净,李恒芬. 中药药理与临床. 2013(03)
[4]Brain-derived neurotrophic factor prevents beta-amyloid-induced apoptosis of pheochromocytoma cells by regulating Bax/Bcl-2 expression[J]. Zhikun Sun1,Xingrong Ma2,Hongqi Yang1,Jiahua Zhao1,Jiewen Zhang1 1Department of Neurology,Henan Provincial People’s Hospital,Zhengzhou 450003,Henan Province,China 2Department of Neurology,the First Affiliated Hospital,Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,Henan Province,China. Neural Regeneration Research. 2012(05)
[5]几种抗焦虑药的临床应用及不良反应的比较研究[J]. 严贵亮,段建荣. 中国药事. 2011(11)
[6]神经肽Y系统在高剂量咖啡因、可可碱诱导的大鼠焦虑行为中的作用机制[J]. 潘集阳,廖继武,田径,刘亚平. 实用医学杂志. 2011(18)
[7]广泛性焦虑患者血一氧化氮、一氧化氮合酶的含量研究[J]. 张晨,沈鑫华. 现代实用医学. 2011(07)
[8]缬草素抗焦虑作用及其机制的初探[J]. 王延丽,刘勇,石晋丽,郭建友,郑虎占,翟玉静. 中国药理学通报. 2011(04)
[9]解虑安神汤抗焦虑作用与GABAA-R关系的初步研究[J]. 周宁娜,曹东,何晓山,宋波,唐当柱. 云南中医中药杂志. 2011(02)
[10]安神解虑方对广泛性焦虑大鼠脑磁共振波谱变化的干预作用[J]. 唐启盛,李宁,罗斌,侯秀娟,黄育玲,臧凤超,方芳. 中国中西医结合杂志. 2011(01)
博士论文
[1]安神方抗焦虑作用的疗效观察及相关机制研究[D]. 张雪.南方医科大学 2012
[2]酸枣仁汤抗焦虑作用的神经-内分泌-免疫网络调节机制[D]. 王欣.北京中医药大学 2004
硕士论文
[1]合欢皮抗焦虑部位血清药物化学初步研究及其化学成分分离[D]. 范小龙.湖北中医药大学 2016
[2]合欢皮提取物抗焦虑活性筛选及其对脑内神经递质的影响[D]. 田微.湖北中医药大学 2015
[3]合欢皮水溶性木脂素部位提取纯化工艺及其质量分析[D]. 方志兴.湖北中医药大学 2014
[4]多巴胺受体拮抗剂对新生大鼠缺氧缺血脑损伤后焦虑样行为及黑质酪氨酸羟化酶表达的影响[D]. 陶惠康.中南大学 2014
本文编号：3666316
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
前言
第一章 合欢皮木脂素类物质抗焦虑主要活性部位作用机制的整体研究..
1 实验材料
1.1 仪器
1.2 试剂
1.3 实验动物及分组
2 实验方法
2.1 S-75部位对急性应激后高架十字迷宫模型小鼠脑组织中GABA_AR和5-HT_(1A)R蛋白表达量的影响
2.2 S-75部位对急性应激后高架十字迷宫模型小鼠脑组织中GABA_AR和5-HT_(1A)RmRNA表达量的影响
2.3 S-75部位对急性应激后高架十字迷宫模型小鼠脑组织中PKA,CREB,BDNF和TRKB蛋白表达量的影响
2.4 S-75部位对急性应激后高架十字迷宫模型小鼠脑组织中cAMP水平的影响
2.5 数据分析
3 实验结果
3.1 S-75部位对急性应激后高架十字迷宫模型小鼠脑组织中GABA_AR和5-HT_(1A)R蛋白表达量的影响
3.2 S-75部位对急性应激后高架十字迷宫模型小鼠脑组织中GABA_AR和5-HT_(1A)RmRNA表达量的影响
3.3 S-75部位对急性应激后高架十字迷宫模型小鼠脑组织中PKA,CREB,BDNF和TRKB蛋白表达量的影响
3.4 S-75部位对急性应激后高架十字迷宫模型小鼠脑组织中cAMP水平的影响
4 讨论
5 结论
第二章 合欢皮木脂素类物质抗焦虑主要活性部位对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用
1 实验材料
1.1 仪器
1.2 试剂与试药
1.3 细胞株
2 实验方法
2.1 PC12细胞培养
2.2 皮质酮(corticosterone,CORT)诱导PC12细胞损伤模型制备
2.3 受体阻断剂及阳性药的浓度筛选
2.4 S-75部位对皮质酮诱导的PC12细胞的保护作用
2.5 S-75部位及其协同受体阻断剂对皮质酮诱导的PC12细胞中5-HT_(1A)R和GABA_ARmRNA表达量的影响
2.6 S-75部位及5-HT_(1A)R受体阻断剂对皮质酮诱导的PC12细胞中PKA，CREB，BDNF和TRKB蛋白表达量的影响
2.7 S-75部位及5-HT_(1A)R受体阻断剂对皮质酮诱导的PC12细胞中cAMP水平的影响
2.8 数据分析
3 实验结果
3.1 皮质酮对PC12细胞损伤的MTT测定结果
3.2 受体阻断剂及阳性药的浓度筛选
3.3 S-75部位对皮质酮诱导的PC12细胞增殖的影响
3.4 S-75部位及其协同受体阻断剂对皮质酮诱导的PC12细胞中5-HT_(1A)R和GABA_ARmRNA表达量的影响
3.5 S-75部位及5-HT_(1A)R受体阻断剂对皮质酮诱导的PC12细胞中PKA,CREB,BDNF和TRKB蛋白表达量的影响
3.6 S-75部位及5-HT_(1A)R受体阻断剂对皮质酮诱导的PC12细胞中cAMP水平的影响
4 讨论
5 结论
第三章 木脂素类物质主要活性成分对皮质酮损伤的PC12细胞凋亡及线粒体凋亡信号通路的影响
1 实验材料
1.1 仪器
1.2 试剂及试药
2 实验方法
2.1 S-75部位及其主要活性成分对皮质酮诱导的PC12细胞增殖的影响
2.2 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞的保护作用
2.3 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞LDH渗漏的影响
2.4 AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞术检测SRG对皮质酮诱导的PC12细胞凋亡的影响
2.5 TUNEL原位凋亡检测试剂盒(荧光法检测DNA片段化)检测SRG对皮质酮诱导的PC12细胞凋亡的影响
2.6 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞内[Ca~(2+)]的影响
2.7 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞线粒体膜电位(?Ψm)的影响
2.8 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞中CREB,BDNF,Bcl-2,Bax,细胞色素C(Cyt-C)和Caspase-3蛋白表达量的影响
2.9 数据分析
3 实验结果
3.1 S-75部位及其主要活性成分对皮质酮诱导的PC12细胞增殖的影响
3.2 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞的保护作用
3.3 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞LDH渗漏的影响
3.4 AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞术检测SRG对皮质酮诱导的PC12细胞凋亡的影响
3.5 TUNEL原位凋亡检测试剂盒(荧光法检测DNA片段化)检测SRG对皮质酮诱导的PC12细胞凋亡的影响
3.6 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞内[Ca~(2+)]的影响
3.7 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞线粒体膜电位(?Ψm)的影响.
3.8 SRG对皮质酮诱导的PC12细胞中CREB,BDNF,Bcl-2,Bax,细胞色素C(Cyt-C)和Caspase-3蛋白表达量的影响
4 讨论
5 结论
结语与创新
文献综述
参考文献
发表论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]慢性焦虑刺激对成年雌性大鼠性激素水平的影响[J]. 郑源,张潋,张良圣,张明祥,陈燕,罗尧岳,吴涛,梁雨. 湖南中医药大学学报. 2015(01)
[2]舒郁宁心汤对焦虑大鼠行为及血清神经肽和皮质酮水平的影响[J]. 王静,陈利平,王发渭,孙志高,许成勇. 中国中医急症. 2013(09)
[3]舒肝颗粒治疗更年期焦虑症的机制研究[J]. 宋志宇,庞剑月,隋净净,李恒芬. 中药药理与临床. 2013(03)
[4]Brain-derived neurotrophic factor prevents beta-amyloid-induced apoptosis of pheochromocytoma cells by regulating Bax/Bcl-2 expression[J]. Zhikun Sun1,Xingrong Ma2,Hongqi Yang1,Jiahua Zhao1,Jiewen Zhang1 1Department of Neurology,Henan Provincial People’s Hospital,Zhengzhou 450003,Henan Province,China 2Department of Neurology,the First Affiliated Hospital,Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,Henan Province,China. Neural Regeneration Research. 2012(05)
[5]几种抗焦虑药的临床应用及不良反应的比较研究[J]. 严贵亮,段建荣. 中国药事. 2011(11)
[6]神经肽Y系统在高剂量咖啡因、可可碱诱导的大鼠焦虑行为中的作用机制[J]. 潘集阳,廖继武,田径,刘亚平. 实用医学杂志. 2011(18)
[7]广泛性焦虑患者血一氧化氮、一氧化氮合酶的含量研究[J]. 张晨,沈鑫华. 现代实用医学. 2011(07)
[8]缬草素抗焦虑作用及其机制的初探[J]. 王延丽,刘勇,石晋丽,郭建友,郑虎占,翟玉静. 中国药理学通报. 2011(04)
[9]解虑安神汤抗焦虑作用与GABAA-R关系的初步研究[J]. 周宁娜,曹东,何晓山,宋波,唐当柱. 云南中医中药杂志. 2011(02)
[10]安神解虑方对广泛性焦虑大鼠脑磁共振波谱变化的干预作用[J]. 唐启盛,李宁,罗斌,侯秀娟,黄育玲,臧凤超,方芳. 中国中西医结合杂志. 2011(01)
博士论文
[1]安神方抗焦虑作用的疗效观察及相关机制研究[D]. 张雪.南方医科大学 2012
[2]酸枣仁汤抗焦虑作用的神经-内分泌-免疫网络调节机制[D]. 王欣.北京中医药大学 2004
硕士论文
[1]合欢皮抗焦虑部位血清药物化学初步研究及其化学成分分离[D]. 范小龙.湖北中医药大学 2016
[2]合欢皮提取物抗焦虑活性筛选及其对脑内神经递质的影响[D]. 田微.湖北中医药大学 2015
[3]合欢皮水溶性木脂素部位提取纯化工艺及其质量分析[D]. 方志兴.湖北中医药大学 2014
[4]多巴胺受体拮抗剂对新生大鼠缺氧缺血脑损伤后焦虑样行为及黑质酪氨酸羟化酶表达的影响[D]. 陶惠康.中南大学 2014
本文编号：3666316
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