基于线粒体融合与分裂研究中医扶正与祛邪疗法诱导人急性髓系白血病KG-1a细胞凋亡的作用机制

发布时间：2022-08-09 17:59

　　目的:本研究选取益气养阴方及其拆方干预人急性髓系白血病（AML）KG-1a细胞中6种线粒体融合与分裂蛋白表达,探讨中医扶正与祛邪疗法通过线粒体途径诱导白血病细胞凋亡的作用机制,为靶向治疗急性白血病提供理论依据,并为提高白血病的临床疗效提供新的思路和方法。方法:1.培养AML KG-1a细胞作为模型。2.CCK-8法检测不同浓度、不同时间益气养阴方对KG-1a细胞体外生长的抑制作用,由此确定益气养阴方的IC₅₀值和最佳干预时间。3.Annexin V/PI双染法流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率;PI单染法FCM检测细胞周期分布情况。4.透射电镜观察细胞超微结构与线粒体形态学变化。5.Western blot法检测各组Mfn-1、Mfn-2、Opa-1、Drp-1、Fis-1、Mff的蛋白表达水平。6.RT-qPCR法检测各组Mfn-1、Mfn-2、Opa-1、Drp-1、Fis-1、Mff的mRNA表达水平。结果:1.CCK-8法示益气养阴方可抑制KG-1a细胞增殖（P<0.05）,并且具有良好的时间浓度依赖效应。根据所获IC_50... 

【文章页数】：120 页

【学位级别】：博士

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提要
abstract
中英文对照词
引言
第一部分 实验研究
    实验一 细胞培养,药物制备与CCK-8法
        1.细胞培养
        2.药物制备
        3.CCK-8法检测细胞抑制率
    实验二 流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡率
        1.所需设备试剂：
        2.PI单染法FCM检测细胞周期
        3.Annexin V/PI双染法FCM检测细胞凋亡
        4.实验结果
    实验三 透射电镜观察细胞超微结构与线粒体形态学变化
        1.实验器材与设备
        2.主要实验试剂
        3.透射电镜制片步骤
        4.观察结果
    实验四 Western Blot检测细胞线粒体融合与分裂蛋白的表达
        1.实验设备
        2.实验试剂
        3.实验步骤
        4.实验结果
    实验五 RT-qPCR检测细胞线粒体融合与分裂蛋白的m RNA表达
        1.主要实验设备及耗材
        2.RT-qPCR实验步骤
        3.实验结果
第二部分 讨论
    一、中医学对急性白血病的认识
        1.历代医家对急性白血病的认识
        2.现代中医学对急性白血病的认识
        3.AL的临床辨证治疗
        4.益气养阴方简介及组方分析
    二、益气养阴方药物的功能研究
        1.太子参
        2.黄芪
        3.白术
        4.茯苓
        5.甘草
        6.黄精
        7.女贞子
        8.墨旱莲
        9.天冬
        10.麦冬
        11.生地黄
        12.半枝莲
        13.白花蛇舌草
        14.蒲公英
        15.小蓟
    三、线粒体融合与分裂
        1.概述
        2.线粒体融合与分裂蛋白的结构和功能
        3.线粒体融合与分裂的功能
    四、线粒体调控细胞凋亡
        1.线粒体形态结构改变与细胞凋亡
        2.线粒体融合/分裂与细胞凋亡
        3.线粒体融合与分裂蛋白对肿瘤发生和治疗的作用
    五、结果探讨
        1.益气养阴方对KG-1a细胞生长的影响
        2.益气养阴方对KG-1a细胞周期和凋亡率的影响
        3.益气养阴方对KG-1a细胞超微结构和线粒体形态学的影响
        4.益气养阴方对KG-1a细胞线粒体融合与分裂蛋白表达水平的影响
        5.益气养阴方对KG-1a细胞线粒体融合与分裂蛋白m RNA表达水平的影响
结语
参考文献
综述
    参考文献
附录
致谢
查新报告
发表论文



本文编号：3673023