龟羚帕安丸对PD大鼠NSCs移植后中脑黑质TH、GDNF及Ptx3表达的影响

发布时间：2022-10-05 20:10

　　目的:以神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）为供体细胞的细胞替代疗法是目前研究帕金森病（Parkinson’s disease,PD）的热点,也被认为是潜力最大、临床应用前景最好的PD治疗策略,随着研究的深入发现:移植的NSCs存活率极低,严重影响PD的长期疗效。中药在PD治疗中有其独特的优势,本实验以6-羟基多巴胺（6-hydroxy dopamine,6-OHDA）建立的PD大鼠模型为研究对象,观察龟羚帕安丸对PD大鼠NSCs移植后中脑黑质TH、GDNF及Ptx3表达的影响,探索龟羚帕安丸对移植入PD大鼠脑内的NSCs影响的可能作用机制,为临床提高PD神经干细胞移植的长期疗效寻找新的方法。方法:选择性成熟雌雄SD大鼠,按2:1合笼制备Ed16孕鼠,分离出胎鼠的海马细胞,机械吹打法制备单细胞悬液,接种于神经干细胞培养液（DMEM/F12、B27、EGF、bFGF、双抗）中进行培养、传代,并用免疫荧光法进行NSCs的Nestin鉴定。用神经干细胞分化液（DMEM/F12、胎牛血清、B27、EGF、bFGF、双抗）诱导NSCs贴壁分化。将鉴定完成的NSCs用BrdU... 

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略词
前言
实验一 SD大鼠神经干细胞的培养与鉴定
    材料与方法
        1 实验材料
            1.1 实验动物
            1.2 主要实验试剂
            1.3 主要实验仪器
            1.4 主要试剂配置
        2 实验方法
            2.1 Ed16孕鼠制备
            2.2 神经干细胞分离与培养
            2.3 神经干细胞Nestin鉴定
            2.4 神经干细胞分化的细胞形态学观察
            2.5 神经干细胞Brdu标记与检测
    结果
        1 原代细胞培养观察
        2 传代细胞培养观察
        3 神经干细胞Nestin鉴定
        4 神经干细胞分化的细胞形态学观察
        5 神经干细胞的BrdU标记与检测
    讨论
        1 神经干细胞分离与培养
        2 神经干细胞Nestin鉴定
实验二 龟羚帕安丸对PD大鼠NSCs移植后中脑黑质TH、GDNF及Ptx3表达的影响
    材料与方法
        1 实验材料
            1.1 实验动物
            1.2 主要实验药品与试剂
            1.3 主要实验仪器
            1.4 主要试剂配置
        2 实验方法
            2.1 技术路线图
            2.2 PD大鼠模型建立
            2.3 帕金森病大鼠模型判定标准
            2.4 神经干细胞移植
            2.5 实验分组与处理
            2.6 指标检测
            2.7 统计分析
    结果
        1 帕金森病大鼠模型建立
        2 对各组大鼠行为学影响
        3 对各组大鼠纹状体BrdU标记的NSCs影响
        4 对各组大鼠中脑黑质TH蛋白及mRNA表达影响
        5 对各组大鼠中脑黑质GDNF及Ptx3蛋白表达影响
        6 TH与GDNF、Ptx3相关性分析
        7 中脑黑质致密部HE染色观察
    讨论
        1 帕金森病大鼠模型建立
        2 中医对帕金森病认识
        3 龟羚帕安丸诱导移植NSCs分化为多DA能神经元机制分析
        4 龟羚帕安丸对PD模型神经干细胞诱导分化作用机制
结论
参考文献
致谢
附录1 图片
附录2 综述
    参考文献
附录3 研究生期间发表论文及参与科研情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]龟羚帕安丸对PD大鼠中脑黑质IL-1β、iNOS、IL-6、IFN-γ表达的影响[J]. 常学辉,张良芝,宁亚红.  时珍国医国药. 2017(01)
[2]龟羚帕安丸对PD大鼠中脑黑质Caspase-3、SYN表达及行为学的影响[J]. 张良芝,常学辉,宁亚红.  中华中医药学刊. 2016(11)
[3]帕金森病非运动症状及其治疗的流行病学调查[J]. 张勇,卢祖能,董红娟,张红,黄婷婷,罗璨.  卒中与神经疾病. 2016(05)
[4]帕金森病基因动物模型的研究进展[J]. 谭磊琦,徐启如,唐贤文,陈克涛,刘长青,郭俣.  齐齐哈尔医学院学报. 2016(19)
[5]3种不同脑区定点注射6-OHDA单侧损伤大鼠帕金森病模型的比较研究[J]. 李进,孙杰,赵楠,吴钧,刘俊,马钢.  河北医科大学学报. 2016(06)
[6]多巴胺神经元联合中脑神经干细胞移植治疗帕金森病[J]. 王明国,李智高,杨智勇,王波,段奎甲,张海龙,宋晓斌,邓兴力.  中国微侵袭神经外科杂志. 2016(03)
[7]帕金森病流行现状[J]. 刘疏影,陈彪.  中国现代神经疾病杂志. 2016(02)
[8]GDNF基因修饰神经干细胞移植治疗大鼠帕金森病[J]. 段奎甲,王向鹏,杨智勇,王波,王明国,张海龙,邓兴力.  南方医科大学学报. 2016(01)
[9]龟羚帕安丸在帕金森病中的应用[J]. 孟毅,李莉,李永亮.  河南中医. 2016(01)
[10]Brdu标记的rBMSCs在大鼠体内的迁移[J]. 许伟,谢兴文,赵永利,李宁,徐世红,宋敏.  中国骨质疏松杂志. 2015(04)

博士论文
[1]中药复方诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究[D]. 林砚铭.成都中医药大学 2013
[2]补肾方剂诱导骨髓间充质干细胞增殖分化的理论和实验研究[D]. 谭峰.南京中医药大学 2011
[3]神经干细胞联合多巴胺神经元移植治疗帕金森病的实验研究[D]. 邓兴力.昆明医学院 2008

硕士论文
[1]龟羚帕安丸对帕金森病大鼠神经干细胞诱导分化作用的研究[D]. 宁亚红.河南中医学院 2015
[2]帕金森病模型大鼠脑内TH表达变化的实验研究[D]. 何珊.扬州大学 2014



本文编号：3686429