酸枣仁皂苷A对脂多糖诱导小胶质细胞炎症发生的作用机制及神经保护作用

发布时间：2022-12-08 02:30

　　神经退行性疾病（Neurodegenerative disease）,例如常见的帕金森病（Parkinson’s disease,PD）、阿尔兹海默病（Alzheimer disease,AD）、肌萎缩侧索硬化症（amyotrophic lateral sclerosis,ALS）等,多是由于中枢神经特定神经元逐渐损伤正常功能或结构所致^[1],随着对该病发病机制的深入探索,打破了以往禁锢的氧化应激、兴奋性毒性等发病原因,认为神经炎症贯穿于神经退行性疾病的发病进程中^[2]。其中一个重要的参与者是小胶质细胞^[3]。当受到脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）等刺激时,小胶质细胞过度激活释放各种炎症介质,对神经元造成损伤。酸枣仁皂苷A（Jujuboside A,Ju A）是养心安神常用中药酸枣仁的有效活性成分,经研究表明,具有对神经元的保护和对老年痴呆小鼠的潜在治疗作用^[4],但Ju A能否通过抑制神经炎症用于治疗神经退行性疾病目前尚未见相关报道。目的:研究Ju A对脂多糖诱发BV-2细胞... 

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
英文缩略词(Abbreviation)
前言
第一部分 JuA对LPS诱发的BV-2细胞神经炎症的影响
    1 实验材料和仪器
        1.1 细胞株
        1.2 药物
        1.3 主要试剂
        1.4 主要试剂配制
        1.5 主要仪器
    2 实验方法
        2.1 细胞复苏
        2.2 细胞传代和培养
        2.3 细胞冻存
        2.4 细胞计数
        2.5 细胞分组
        2.6 JuA对BV-2细胞存活率的影响(MTT法)
        2.7 Griess法检测JuA对LPS诱导BV-2细胞NO释放的影响
        2.8 Westernblot法检测CD11b蛋白的表达
        2.9 激光共聚焦观察JuA对LPS刺激BV-2细胞形态变化的影响
        2.10 RT-PCR检测BV-2细胞iNOS、TNF-α、IL-1β、COX-2mRNA表达水平
        2.11 Westernblot法检测iNOS、COX-2蛋白表达
        2.12 统计学方法
    3 结果
        3.1 JuA对BV-2细胞存活率的影响(MTT法)
        3.2 JuA对LPS诱导BV-2细胞NO水平的影响
        3.3 JuA对CD11b表达的调节作用
        3.4 JuA对LPS诱导BV-2细胞形态变化的影响
        3.5 JuA对LPS诱导BV-2细胞TNF-α、IL-1β、iNOS、COX-mRNA表达水平的影响
        3.6 JuA对LPS诱导BV-2细胞iNOS、COX-2蛋白表达的影响
    4 讨论
        4.1 LPS与小胶质细胞激活
        4.2 BV-2细胞炎症发生的表现
    5 小结
第二部分 JuA抑制LPS诱发BV-2细胞神经炎症的作用机制.
    1 实验材料和仪器
        1.1 细胞株
        1.2 药物
        1.3 主要试剂
        1.4 主要试剂配制
        1.5 主要仪器
    2 实验方法
        2.1 细胞复苏、传代、培养和冻存
        2.2 实验分组及药物处理
        2.3 细胞总蛋白提取
        2.4 细胞核蛋白和细胞质蛋白分离
        2.5 蛋白含量的测定
        2.6 SDS-PAGE凝胶电泳
        2.7 免疫荧光染色
        2.8 统计学方法
    3 结果
        3.1 JuA抑制NF-κB蛋白的表达
        3.2 JuA激活Nrf2/ARE通路上调HO-1蛋白表达
        3.3 JuA对BV-2细胞PI3K/Akt调控Nrf2蛋白的影响
    4 讨论
        4.1 NF-κB与神经炎症
        4.2 Nrf2与神经炎症
        4.3 Akt与Nrf2
    5 小结
第三部分 JuA对小胶质细胞神经炎症引发的神经元损伤的影响
    1 实验材料和仪器
        1.1 细胞株
        1.2 药物
        1.3 主要试剂
        1.4 主要试剂配制
        1.5 主要仪器
    2 实验方法
        2.1 细胞复苏、传代、培养和冻存
        2.2 实验分组
        2.3 JuA对活化的BV-2细胞条件培养液损伤HT-22细胞的影响(MTT法)
        2.4 荧光显微镜观察DAPI染色
        2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡率(Annexin-V/PI双染)
        2.6 Westernblot法检测Cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表达
    3 结果
        3.1 JuA条件培养液对HT-22细胞存活率的影响
        3.2 JuA对L-CM导致的HT-22细胞凋亡的影响
    4 讨论
        4.1 胶质细胞与神经元细胞体外共培养模型的建立
        4.2 凋亡的检测
    5 小结
总结
    实验线路图
参考文献
综述
    参考文献
附录
    个人简历
    硕士期间发表的科研论文
致谢



本文编号：3713361