活肺通片成分分析及君药五指毛桃中BG的抗炎活性研究

发布时间：2022-12-11 07:53

　　目的:研究复方制剂活肺通片的化学成分及君药五指毛桃中佛手柑内酯的抗炎活性。利用色质谱联用技术,对复方制剂活肺通片及其君药五指毛桃进行化学物质组的系统研究;建立斑马鱼炎症模型,对君药五指毛桃中的佛手柑内酯进行抗炎和消炎活性研究。方法:按活肺通片的提取工艺对五指毛桃中的化学成分进行提取,结合高效液相色谱-串联质谱（LCMS-IT-TOF）和气相色谱-质谱（GC-MS）技术对君药五指毛桃提取物中的复杂化学成分进行快速定性分析;采用固相萃取法从君药五指毛桃中分离纯化佛手柑内酯（Bergapten,BG）单体,采用LCMS-IT-TOF和核磁共振（Nuclear Magnetic Resonance,NMR）方法对佛手柑内酯单体进行鉴定;建立斑马鱼炎症模型,以斑马鱼幼鱼的形态学变化为依据,考察BG对斑马鱼幼鱼48h内的毒性;以巨噬细胞和中性粒细胞的数量和ROS、NO含量为指标,对BG进行抗炎和消炎活性研究;采用6倍量乙醇对五指毛桃中的化学成分进行回流提取,10倍量水对灵芝、平贝母、蛤蚧、甘草煎煮,合并浓缩液,运用LCMS-IT-TOF技术对活肺通片制剂中的复杂化学成分进行定性分析。结果:1.采用... 

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
本论文中涉及的主要名词及缩写
摘要
abstract
前言
第一章 绪论
    1 慢阻肺研究现状
        1.1 病理机制研究
        1.2 临床治疗研究
    2 活肺通片概况
        2.1 处方和方解
    3 佛手柑内酯概况
        3.1 佛手柑内酯的理化性质
        3.2 佛手柑内酯的药理作用
    4 炎症概况
    5 斑马鱼概况
        5.1 荧光标记转基因系
        5.2 斑马鱼炎症模型
第二章 色质谱联用分析五指毛桃的化学成分
    1 仪器与材料
        1.1 仪器
        1.2 材料
    2 方法
        2.1 溶液的配制
        2.2 LCMS-IT-TOF色谱及质谱条件
        2.3 GC-MS色谱及质谱条件
    3 结果
        3.1 五指毛桃LCMS-IT-TOF的成分分析
        3.2 五指毛桃GC-MS的成分分析
    4 讨论
        4.1 LCMS-IT-TOF色谱条件的优化
        4.2 LCMS-IT-TOF和GC-MS结果分析
    5 小结
第三章 固相萃取法分离纯化五指毛桃中的佛手柑内酯
    1 仪器与材料
        1.1 仪器
        1.2 材料
    2 方法
        2.1 LCMS-IT-TOF分析条件
        2.2 五指毛桃提取物的制备
        2.3 硅胶柱色谱初步分离
        2.4 有效成分的纯化
        2.5 溶液的配制
    3 结果
        3.1 硅胶柱色谱初步分离
        3.2 有效成分的纯化
        3.3 单体的鉴定
    4 讨论
        4.1 溶剂萃取
        4.2 化合物损失
    5 小结
第四章 基于斑马鱼炎症模型从五指毛桃中分离纯化的佛手柑内酯的抗炎和消炎活性研究
    1 仪器与材料
        1.1 仪器
        1.2 试药与试剂
        1.3 实验动物
    2 方法
        2.1 溶液的配制
        2.2 斑马鱼炎症模型的建立
        2.3 BG对斑马鱼的毒性实验
        2.4 体内嗜中性粒细胞和巨噬细胞募集测定
        2.5 体内炎症消除分析
        2.6 测量炎症诱导的细胞内ROS产生和图像分析
        2.7 测量炎症诱导的细胞内NO产生和图像分析
        2.8 统计分析
    3 结果
        3.1 BG对斑马鱼幼鱼的毒性
        3.2 BG抑制体内中性粒细胞和巨噬细胞募集
        3.3 BG通过促进伤口中性粒细胞和巨噬细胞的清除,加速了体内炎症的消退
        3.4 BG对斑马鱼幼鱼切割尾部诱导细胞内ROS产生的抑制作用
        3.5 BG对切尾诱导斑马鱼幼鱼细胞内NO产生的抑制作用
    4 讨论
        4.1 鱼卵收集及幼鱼饲养
        4.2 切尾
        4.3 细胞计数
        4.4 溶液的配制
        4.5 给药方式
    5 小结
第五章 液质联用分析活肺通片的化学成分
    1 仪器与材料
        1.1 仪器
        1.2 材料
    2 方法与结果
        2.1 溶液的制备
        2.2 LCMS-IT-TOF色谱及质谱条件
        2.3 活肺通片LCMS-IT-TOF的成分分析
    3 讨论
    4 小结
第六章 结论与展望
    1 结论
    2 展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]佛手柑内酯对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响[J]. 耿丹丹,赵博,王建华.  天然产物研究与开发. 2017(09)
[2]灵芝的化学成分及药理作用分析[J]. 赵明宇.  首都食品与医药. 2017(02)
[3]佛手柑内酯对双氧水诱导人脐静脉内皮细胞衰老的影响[J]. 丁燕,傅友,单兰兰,奈文青,吴洪渊,唐亮,陈顺枝,戴萌.  中国组织工程研究. 2016(46)
[4]抗炎动物模型的研究进展[J]. 李学哲,蔡爱华,朴惠顺.  延边大学医学学报. 2013(02)
[5]五指毛桃的化学成分和药理作用研究进展[J]. 王伟伟,陈瑶.  中国民族民间医药. 2013(03)
[6]Protective effects of 5-methoxypsoralen against acetaminophen-induced hepatotoxicity in mice[J]. Wei-Xia Liu,Feng-Lan Jia,Yue-Ying He,Bao-Xu Zhang,Department of Toxicology,School of Public Health,Peking University,Beijing 100191,China.  World Journal of Gastroenterology. 2012(18)
[7]斑马鱼模型在中药活性筛选中的适用性研究[J]. 韩利文,袁延强,何秋霞,王思锋,李遇伯,楚杰,刘可春,刘昌孝.  中草药. 2011(10)
[8]构建由绿色荧光标记巨噬细胞的转基因斑马鱼模型[J]. 秦帅,陈希,孔德明.  贵阳中医学院学报. 2011(05)
[9]五指毛桃指纹图谱的高效液相色谱-质谱联用研究[J]. 陶敬奇,闻莹莹,王辉,王三永,陈洪伟.  华南师范大学学报(自然科学版). 2011(03)
[10]新一代超长效支气管扩张剂——茚达特罗[J]. 方晓聪,白春学.  中华哮喘杂志(电子版). 2010(06)



本文编号：3718409