银杏外种皮提取物抑制B16-F10黑色素瘤转移及其对PI3K/Akt相关信号通路的影响

发布时间：2022-12-17 18:30

　　目的:研究银杏外种皮提取物（Ginkgobiloba exocarp extracts,GBEE）体内外抗B16-F10黑色素瘤转移作用及相关机制。方法:建立C57BL/6J小鼠B16-F10黑色素瘤肺转移模型,将C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组（不接种肿瘤细胞）、模型对照组、阳性对照组、GBEE各治疗组,每组10只。正常对照组和模型对照组灌胃（ig）给予0.1mL/10g生理盐水（NS）,每天1次,连续17d;阳性对照组隔日腹腔注射（ip）给予5mg/kg顺铂（DDP）,连续7d;GBEE各治疗组分别ig给予GBEE50、100、200 mg/kg,每天1次,连续17d。给药结束后第2天,剥瘤称量移植瘤重量,计算抑瘤率;摘取肺组织,于解剖显微镜下观察肺转移灶,计算肺转移率和抗转移率;制备肺组织和移植瘤组织切片,苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织病理学变化;免疫组织化学法检测移植瘤组织CD34的表达并计算微血管密度（MVD）,同时检测HIF-1α、VEGF、MMP-9的表达水平。体外培养B16-F10细胞和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,采用MTT比色法检测GBEE对B16-F1... 

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
符号说明
0 前言
1 文献综述
    0 引言
    1 PI3K/Akt信号转导通路的结构
    2 PI3K/Akt信号转导通路的激活
    3 PI3K/Akt信号转导通路促进恶性肿瘤转移的机制
    4 PI3K/Akt信号转导通路介导的肿瘤转移相关靶点抑制剂
    5 结语
2 技术路线
3 实验材料
    3.1 银杏外种皮提取物
    3.2 细胞和动物
    3.3 主要仪器
    3.4 主要药品与试剂
    3.5 主要溶液配制
4 实验方法
    4.1 C_(57)BL/6J小鼠B16-F10黑色素瘤肺转移模型的建立、分组及给药
    4.2 检测抑瘤率、肺转移率及抗转移率
    4.3 HE染色观察肺转移灶
    4.4 免疫组织化学法检测B16-F10移植瘤中CD34,MMP-9,HIF-1α,VEGF表达
    4.5 MTT 比色法检测B16-F10细胞增殖
    4.6 细胞黏附实验观察B16-F10细胞与HUVEC异质黏附
    4.7 细胞划痕实验观察B16-F10细胞迁移
    4.8 Western Blot法检测B16-F10细胞和移植瘤组织相关蛋白表达
    4.9 qRT-PCR法检测B16-F10细胞和移植瘤组织相关基因表达
    4.10 数据统计方法
5 实验结果
    5.1 GBEE对B16-F10移植瘤生长的抑制作用
    5.2 GBEE抑制B16-F10黑色素瘤肺转移
    5.3 GBEE对B16-F10移植瘤MMP-9的影响
    5.4 GBEE抑制B16-F10移植瘤血管生成
    5.5 GBEE对B16-F10移植瘤中PI3K/Akt/HIF-1α/VEGF信号通路的影响
    5.6 GBEE对B16-F10细胞增殖的抑制作用
    5.7 GBEE对B16-F10细胞与HUVEC异质黏附的抑制作用
    5.8 GBEE对B16-F10细胞迁移的抑制作用
    5.9 GBEE对B16-F10细胞中PI3 K/Akt/NF-KB/MMP-9信号通路的影响
6 讨论
    6.1 GBEE对B16-F10黑色素瘤转移各个过程的干预作用
    6.2 GBEE对PI3K/Akt相关信号通路的调控作用
创新点
结语
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表论文及科研情况



本文编号：3720430