三七多糖结构及其延长秀丽线虫寿命作用机制的研究

发布时间：2022-12-18 01:50

　　衰老是生物体多种生理功能逐渐退化,机体应对外界应激的抵抗力逐渐下降,衰老相关疾病逐步增加,最终生物体走向死亡的过程。干预衰老可以改善衰老相关功能性退化,增加衰老机体环境应激抵抗能力,延长健康寿命。植物多糖,因其化学结构多样性,多靶点低细胞毒性,靶向调节多条细胞信号转导通路,使其成为潜在抗衰老的化学药物储备池。本论文拟从中国传统药食同源植物三七[Panax notoginseng（Burk）F.H.Chen]根的不同部位（主根、支根和须根）提取粗多糖,进行分离纯化,分析其理化性质及结构,以模式动物秀丽线虫为抗衰老活性多糖筛选平台,筛选具有延长健康寿命的三七多糖组分,并探讨其延长寿命的分子机制,旨在为三七的综合利用提供新的途径,同时为发掘衰老干预药物提供理论依据。主要研究结果如下:1.热水浸提乙醇沉淀获得三七主根粗多糖（MRP）、三七支根粗多糖（BRP）和三七须根粗多糖（FRP）均为黄色粉末,其得率分别为:15.60%、10.40%和6.10%。总糖含量分别为73.31%、74.24%和74.52%,蛋白质含量分别为1.03%、1.22%和1.52%,糖醛酸含量分别为7.65%、5.43%... 

【文章页数】：125 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 多糖研究进展
        1.1 多糖的提取
        1.2 多糖的纯化
        1.3 多糖纯度和分子质量的测定
        1.4 多糖含量的测定
        1.5 多糖结构解析
        1.6 多糖的抗衰老研究概况
    2 三七研究进展
        2.1 三七资源
        2.2 三七化学成分
        2.3 三七药理活性
        2.4 三七多糖
    3 衰老干预手段
    4 模式动物秀丽线虫在抗衰老药物筛选中的应用
    5 研究目的意义
    6 技术路线
第二章 三七粗多糖制备与生物活性筛选
    1 试验材料与仪器
        1.1 试验材料和动物
        1.2 试验试剂
        1.3 试验仪器
    2 试验方法
        2.1 三七粗多糖提取
        2.2 淀粉鉴定
        2.3 三七粗多糖得率测定
        2.4 三七粗多糖含量测定
        2.5 糖醛酸含量测定
        2.6 蛋白含量测定
        2.7 生物活性筛选
        2.8 数据统计分析
    3 结果与分析
        3.1 三七粗多糖的理化特性
        3.2 生物活性筛选
    4 讨论
        4.1 三七粗多糖提取和得率
        4.2 三七粗多糖的生物活性
第三章 三七主根粗多糖的纯化、结构解析和生物活性筛选
    1 试验材料与仪器
        1.1 试验材料和动物
        1.2 试验耗材与试剂
        1.3 试验仪器
    2 试验方法
        2.1 MRP的分离纯化
        2.2 MRP5和MRP5A的纯度及分子量测定
        2.3 MRP5和MRP5A的化学组成测定
        2.4 MRP5和MRP5A的单糖组成测定
        2.5 MRP5和MRP5A的 FT-IR分析
        2.6 MRP5 甲基化分析
        2.7 MRP5的NMR分析
        2.8 MRP5和MRP5A的生物活性筛选
        2.9 数据统计分析
    3 结果与分析
        3.1 MRP的纯化
        3.2 MRP5和MRP5A的理化特性
        3.3 MRP5 的结构特点
        3.4 MRP5和MRP5A的生物活性比较
    4 讨论
        4.1 体外抗氧化活性与三七多糖结构关系
        4.2 三七多糖组分处理线虫的合适浓度
        4.3 三七多糖组分对线虫氧化应激抵抗力的影响
第四章 三七纯化多糖对秀丽线虫健康寿命的影响
    1 试验材料与仪器
        1.1 试验材料与动物
        1.2 试验耗材及试剂
        1.3 试验仪器
    2 试验方法
        2.1 MRP5 体外ABTS自由基清除能力的测定
        2.2 MRP5 体内生物活性测定
        2.3 数据统计分析
    3 结果与分析
        3.1 MRP5 的体外ABTS自由基清除能力
        3.2 MRP5 对氧化应激下线虫抵抗力的影响
        3.3 MRP5 对线虫体内ROS生成的影响
        3.4 MRP5 对氧化应激下hsp-16.2 表达的影响
        3.5 MRP5 对线虫蛋白羰基化和MDA含量的影响
        3.6 MRP5 对线虫表型特征的影响
        3.7 MRP5对polyQ40 聚集的影响
        3.8 MRP5 对线虫寿命的影响
        3.9 MRP5对daf-16p::GFP进入细胞核的影响
        3.10 MRP5 对线虫抗氧化酶活性的影响
        3.11 MRP5对daf-16 突变体寿命及氧化应激抵抗力的影响
    4 讨论
        4.1 MRP5 对氧化应激存活率及ROS含量的影响
        4.2 MRP5对DAF-16 转录因子进入细胞核的影响
        4.3 MRP5 对线虫健康寿命的影响
第五章 三七纯化多糖延长线虫寿命的作用机制研究
    1 试验材料与仪器
        1.1 试验材料与动物
        1.2 试验耗材与试剂
        1.3 试验仪器
    2 试验方法
        2.1 线虫寿命试验
        2.2 MRP5对hsp-16.2 表达的影响
        2.3 MRP5对nhr-57 表达的影响
        2.4 MRP5对fat-6::GFP和 fat-7::GFP表达的影响
        2.5 RNA-seq高通量测序
        2.6 fat-6和fat-7的qRT-PCR
    3 结果与分析
        3.1 MRP5对eat-2 突变体寿命的影响
        3.2 MRP5 对线虫热应激响应因子HSF-1 的影响
        3.3 MRP5 对线虫低氧诱导转录因子HIF-1 的影响
        3.4 转录组分析
        3.5 MRP5对fat-6和fat-7 基因表达的影响
    4 讨论
        4.1 MRP5 对线虫衰老相关信号通路的影响
        4.2 MRP5对Δ9 去饱和酶基因表达的影响
结论
参考文献
致谢
附图及附表
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]三七多糖的微波辅助提取工艺[J]. 李佳笑,胡宇琳,乔春雷,李璐,杨晓华,张华峰.  食品科学技术学报. 2018(02)
[2]三七多糖对糖尿病肾病大鼠炎症反应及脂质代谢调节作用的实验研究[J]. 李易,叶曦.  中国中医药科技. 2018(01)
[3]三七多糖抗氧化活性研究[J]. 黄上峰,陆飞燕,黄元河,潘乔丹,张贤桂,黄锁义.  微量元素与健康研究. 2018(01)
[4]三七叶多糖的提取分离及结构信息[J]. 钟思恩,黄光球,陈金仙,薄胜涛,张华林.  中国实验方剂学杂志. 2016(21)
[5]假酸浆多糖的酶法提取及纯化工艺的研究[J]. 齐欣欣,王遂.  哈尔滨商业大学学报(自然科学版). 2016(02)
[6]三七多糖通过SREBF-1及ACCa改善2型糖尿病大鼠肝脏脂肪代谢的研究[J]. 胡凤霞,朱双.  辽宁中医药大学学报. 2015(10)
[7]三七多糖调控蛋白激酶C-η及蛋白激酶C-ζ表达改善2型糖尿病大鼠肾功能的研究[J]. 田鲁,王港,罗鹏程,陈伟.  新乡医学院学报. 2015(06)
[8]三七化学成分的研究历程和概况[J]. 夏鹏国,张顺仓,梁宗锁,齐志鸿.  中草药. 2014(17)
[9]Polysaccharides from Angelica sinensis alleviate neuronal cell injury caused by oxidative stress[J]. Tao Lei,Haifeng Li,Zhen Fang,Junbin Lin,Shanshan Wang,Lingyun Xiao,Fan Yang,Xin Liu,Junjian Zhang,Zebo Huang,Weijing Liao.  Neural Regeneration Research. 2014(03)
[10]三七花多糖的分离纯化及结构初步研究[J]. 宫德瀛,黄建,王红,肖朝萍.  天然产物研究与开发. 2013(12)

博士论文
[1]淫羊藿总黄酮、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅱ延长健康寿限及其作用机制的研究[D]. 蔡外娇.复旦大学 2012

硕士论文
[1]三七多糖的分离纯化及免疫活性的研究[D]. 王健.浙江大学 2001



本文编号：3721085