雄芍汤防治肝纤维化作用与TRAIL-FADD/caspase8细胞凋亡通路的实验研究
发布时间：2022-12-25 16:05
本实验由“确立CCL4综合因素诱导大鼠肝纤维化模型”“雄芍汤防治肝纤维化作用与TRAIL-FADD/caspase8凋亡通路”及“雄芍汤对大鼠肝细胞凋亡的影响”三部分组成。目的:本实验从温补脾肾的角度分析肝纤维化的防治,通过确立CCL4综合因素诱导大鼠肝纤维化模型进展期及恢复期,观察雄芍汤防治肝纤维化的作用,揭示雄芍汤、肝纤维化、肝细胞及TRAIL-FADD/caspase8细胞凋亡通路之间的内在联系,探讨雄芍汤防治肝纤维化的细胞凋亡通路,为中医药防治肝纤维化研究提供新的思路和方法。方法:实验一30只健康雄性SD大鼠,皮下注射CCl4与花生油的混合液（二者比例为4:6）,每周两次,分别于周二、周五注射,注射剂量为3ml/kg/次（注:第1次皮下注射的CCl4与花生油混合液比例为3:1,注射剂量为5ml/kg）,并给以玉米面+0.5%胆固醇+20%猪油的高脂低蛋白食物2周,玉米面+0.5%胆固醇的高脂低蛋白食物4周,饮料仅用30%酒精。分别于实验的0、4、6、8周末,随机选取6只收集血清及病理学标本,...
【文章页数】：121 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
中英文缩略词
前言
参考文献
第一部分 确立CCL_4综合因素诱导大鼠肝纤维化模型进展期与恢复期
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 主要试剂及仪器
1.2.1 大鼠造模试剂及仪器
1.2.2 ALT、AST检测试剂及仪器
1.2.3 肝纤维化标志物检测试剂及仪器
1.2.4 HE及Masson染色试剂及仪器
1.2.5 其他
2 实验方法
2.1 实验方案
2.2 标本采集
2.2.1 大鼠周围血清标本收集
2.2.2 大鼠肝脏组织标本收集
2.3 指标检测
2.3.1 肝重指数计算
2.3.2 血清ALT、AST检测及方法
2.3.3 血清HA、LN、PCⅢ,CIV检测及方法
2.3.4 肝组织羟脯氨酸(HyP)含量检测及方法
2.3.5 肝组织病理检测及方法
2.4 统计学处理
3 实验结果
3.1 肝纤维化大鼠肝重指数的动态变化
3.2 血清ALT、AST的动态变化
3.3 血清HA、LN、PCⅢ及CIV的动态变化
3.4 肝组织Hyp的动态变化
3.5 肝组织病理学的动态变化
3.5.1 肝组织HE染色动态变化
3.5.2 肝组织Masson染色动态改变
4 实验讨论
4.1 四氯化碳综合因素造模的探讨
4.2 肝重指数动态变化的探讨
4.3 血清ALT、AST变化的探讨
4.4 血清HA、LN、PCⅢ及CIV变化的探讨
4.5 肝组织Hyp动态变化的探讨
4.6 肝组织病理学检测的动态变化的探讨
4.7 大鼠肝纤维化模型进展期和恢复期的确立
参考文献
第二部分 雄芍汤防治肝纤维化的作用与TRAIL-FADD/caspase8凋亡通路
1 实验材料
1.1 动物
1.2 雄芍汤
1.3 主要试剂及仪器
1.3.1 大鼠造模；ALT、AST检测；HA、LN、PCⅢ,CIV检测；Hyp检测；HE染色；Masson染色检测等所用主要试剂及仪器
1.3.2 免疫组织化学染色试剂及仪器
1.3.3 PCR检测试剂及仪器
1.3.4 Westernblot检测试剂及仪器
2 实验方法
2.1 大鼠分组与喂养
2.2 标本收集与处理
2.3 检测内容与方法
2.3.1 各组大鼠肝重指数
2.3.2 各组大鼠血清ALT、AST检测
2.3.3 各组大鼠血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ检测
2.3.4 各组大鼠肝组织中HyP含量测定
2.3.5 各组大鼠肝组织病理形态学检查
2.3.6 免疫组织化学染色检测各组肝组织a-SMA及5-LO的表达
2.3.7 PCR检测各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、TIMP-1、TRAIL、FADD、Caspase-8、BCL-2的mRNA表达
2.3.8 蛋白质印迹(WesternBlot)检测各组α-SMA,5-LO,TIMP1、TRAIL、FADD、Caspase-8、Cyt-c的蛋白质表达
2.4 统计学处理
3 实验结果
3.1 各组大鼠肝重指数的结果比较
3.2 各组大鼠血清ALT、AST的结果比较
3.3 各组大鼠血清HA、LN、PCⅢ及CIV结果比较
3.4 各组大鼠肝组织Hyp结果比较
3.5 各组大鼠肝组织病理学结果比较
3.5.1 各组大鼠肝组织HE染色结果比较
3.5.2 各组大鼠肝组织Masson染色结果比较
3.6 各组大鼠肝组织免疫组织化学染色结果比较
3.6.1 各组大鼠肝组织α-SMA免疫组织化学染色结果比较
3.6.2 各组大鼠肝组织5-LO免疫组织化学染色结果比较
3.6.3 各组大鼠肝组织α-SMA、5-LO免疫组织化学染色结果定量比较
3.7 各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、TIMP-1、TRAIL、、FADD、Caspase-8、BCL-2的mRNA表达PCR检测结果比较
3.7.1 各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、TIMP-1、TRAIL、FADD、Caspase-8、BCL-2mRNA表达PCR检测的熔解、扩增曲线
3.7.2 各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、TIMP-1、TRAIL、FADD、Caspase-8、BCL-2mRNA表达PCR检测结果比较
3.8 各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、TIMP-1、MMP13、TRAIL、FADD、Caspase-8、Cyt-c蛋白表达WesternBlot检测的结果比较
3.8.1 各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA蛋白表达WesternBlot检测结果比较
3.8.2 各组大鼠肝组织TIMP-1、MMP13蛋白表达WesternBlot检测结果比较
3.8.3 各组大鼠肝组织TRAIL、FADD、Caspase-8、Cyt-c蛋白表达WesternBlot检测结果比较
4 实验讨论
4.1 肝纤维化从脾肾论治的探讨
4.1.1 病机
4.1.2 治法
4.1.3 方药
4.2 雄芍汤防治肝纤维化的作用的探讨
4.2.1 雄芍汤抗肝纤维化作用的前期研究
4.2.2 本实验雄芍汤防治肝纤维化的作用的研究
4.3 雄芍汤防治肝纤维化的作用机制
4.3.1 雄芍汤防治肝纤维化与肝细胞
4.3.2 雄芍汤防治肝纤维化与肝星状细胞
4.3.3 雄芍汤防治肝纤维化与5-脂氧合酶
4.3.4 雄芍汤防治肝纤维化作用与TRAIL-FADD/caspase8凋亡通路
4.4 结论与启示
参考文献
第三部分 雄芍汤对大鼠肝细胞凋亡的影响
1 实验材料
1.1 含药血清
1.2 细胞株
1.3 主要试剂及仪器
2 实验方法
2.1 调整各组含药血清的浓度
2.2 大鼠肝细胞培养与传代
2.3 流式细胞术检测雄芍汤含药血清对大鼠肝细胞凋亡的影响
2.3.1 实验方案
2.3.2 流式细胞术检测
2.4 统计学分析
3 实验结果
3.1 各组大鼠肝细胞凋亡情况
3.2 各组大鼠肝细胞凋亡统计学比较
4 实验讨论
参考文献
创新点与局限性
结语
附录
1 文献综述
参考文献
2 在读博士期间发表论文、科研情况
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]血清ALT、AST和GGT水平检测在肝脏疾病诊断中的应用价值[J]. 仝静. 河南医学研究. 2017(22)
[2]肝脏损伤新的血清学标志物的研究进展[J]. 宋华峰,胥萍. 世界华人消化杂志. 2017(30)
[3]死亡受体家族调控程序性坏死的分子机制研究进展[J]. 李健,范铮,张立亚,王勇强,王兵. 岭南急诊医学杂志. 2017(05)
[4]肝纤维化从肾论治探讨[J]. 陈春宇,于峥,陈小野. 中国中医基础医学杂志. 2017(09)
[5]血清ALT、AST、GGT检测在肝脏疾病诊断中应用研究[J]. 崔红权. 国际检验医学杂志. 2017(16)
[6]扶正化瘀胶囊抗肝纤维化的临床疗效与作用机制研究进展[J]. 罗婷,高鑫,甘龙禹,汪涛,杨文凤,涂燕云. 湖南中医杂志. 2016(11)
[7]肝纤维化药物治疗的研究进展[J]. 李亚芳,霍丽娟. 国际消化病杂志. 2016(04)
[8]国外肝纤维化诊断的研究热点分析[J]. 张弘,陶森,郝彧,赵紫薇,刘妮波,王泓午. 首都医科大学学报. 2016(01)
[9]大黄蟅虫丸在肝病领域中的临床与实验研究现状[J]. 谢永财,胡国信. 中国中西医结合消化杂志. 2015(12)
[10]复方鳖甲软肝片治疗慢性乙型肝炎患者对血清肝纤维化指标的影响[J]. 宫嫚,辛绍杰,邹正升,李润东,徐庆会,韩宝英,于建国,于德航,司雁菱,王宪波,候爱画,李秀惠,陈菊梅. 实用肝脏病杂志. 2015(06)
本文编号：3726929
【文章页数】：121 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
中英文缩略词
前言
参考文献
第一部分 确立CCL_4综合因素诱导大鼠肝纤维化模型进展期与恢复期
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 主要试剂及仪器
1.2.1 大鼠造模试剂及仪器
1.2.2 ALT、AST检测试剂及仪器
1.2.3 肝纤维化标志物检测试剂及仪器
1.2.4 HE及Masson染色试剂及仪器
1.2.5 其他
2 实验方法
2.1 实验方案
2.2 标本采集
2.2.1 大鼠周围血清标本收集
2.2.2 大鼠肝脏组织标本收集
2.3 指标检测
2.3.1 肝重指数计算
2.3.2 血清ALT、AST检测及方法
2.3.3 血清HA、LN、PCⅢ,CIV检测及方法
2.3.4 肝组织羟脯氨酸(HyP)含量检测及方法
2.3.5 肝组织病理检测及方法
2.4 统计学处理
3 实验结果
3.1 肝纤维化大鼠肝重指数的动态变化
3.2 血清ALT、AST的动态变化
3.3 血清HA、LN、PCⅢ及CIV的动态变化
3.4 肝组织Hyp的动态变化
3.5 肝组织病理学的动态变化
3.5.1 肝组织HE染色动态变化
3.5.2 肝组织Masson染色动态改变
4 实验讨论
4.1 四氯化碳综合因素造模的探讨
4.2 肝重指数动态变化的探讨
4.3 血清ALT、AST变化的探讨
4.4 血清HA、LN、PCⅢ及CIV变化的探讨
4.5 肝组织Hyp动态变化的探讨
4.6 肝组织病理学检测的动态变化的探讨
4.7 大鼠肝纤维化模型进展期和恢复期的确立
参考文献
第二部分 雄芍汤防治肝纤维化的作用与TRAIL-FADD/caspase8凋亡通路
1 实验材料
1.1 动物
1.2 雄芍汤
1.3 主要试剂及仪器
1.3.1 大鼠造模；ALT、AST检测；HA、LN、PCⅢ,CIV检测；Hyp检测；HE染色；Masson染色检测等所用主要试剂及仪器
1.3.2 免疫组织化学染色试剂及仪器
1.3.3 PCR检测试剂及仪器
1.3.4 Westernblot检测试剂及仪器
2 实验方法
2.1 大鼠分组与喂养
2.2 标本收集与处理
2.3 检测内容与方法
2.3.1 各组大鼠肝重指数
2.3.2 各组大鼠血清ALT、AST检测
2.3.3 各组大鼠血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ检测
2.3.4 各组大鼠肝组织中HyP含量测定
2.3.5 各组大鼠肝组织病理形态学检查
2.3.6 免疫组织化学染色检测各组肝组织a-SMA及5-LO的表达
2.3.7 PCR检测各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、TIMP-1、TRAIL、FADD、Caspase-8、BCL-2的mRNA表达
2.3.8 蛋白质印迹(WesternBlot)检测各组α-SMA,5-LO,TIMP1、TRAIL、FADD、Caspase-8、Cyt-c的蛋白质表达
2.4 统计学处理
3 实验结果
3.1 各组大鼠肝重指数的结果比较
3.2 各组大鼠血清ALT、AST的结果比较
3.3 各组大鼠血清HA、LN、PCⅢ及CIV结果比较
3.4 各组大鼠肝组织Hyp结果比较
3.5 各组大鼠肝组织病理学结果比较
3.5.1 各组大鼠肝组织HE染色结果比较
3.5.2 各组大鼠肝组织Masson染色结果比较
3.6 各组大鼠肝组织免疫组织化学染色结果比较
3.6.1 各组大鼠肝组织α-SMA免疫组织化学染色结果比较
3.6.2 各组大鼠肝组织5-LO免疫组织化学染色结果比较
3.6.3 各组大鼠肝组织α-SMA、5-LO免疫组织化学染色结果定量比较
3.7 各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、TIMP-1、TRAIL、、FADD、Caspase-8、BCL-2的mRNA表达PCR检测结果比较
3.7.1 各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、TIMP-1、TRAIL、FADD、Caspase-8、BCL-2mRNA表达PCR检测的熔解、扩增曲线
3.7.2 各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、TIMP-1、TRAIL、FADD、Caspase-8、BCL-2mRNA表达PCR检测结果比较
3.8 各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、TIMP-1、MMP13、TRAIL、FADD、Caspase-8、Cyt-c蛋白表达WesternBlot检测的结果比较
3.8.1 各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA蛋白表达WesternBlot检测结果比较
3.8.2 各组大鼠肝组织TIMP-1、MMP13蛋白表达WesternBlot检测结果比较
3.8.3 各组大鼠肝组织TRAIL、FADD、Caspase-8、Cyt-c蛋白表达WesternBlot检测结果比较
4 实验讨论
4.1 肝纤维化从脾肾论治的探讨
4.1.1 病机
4.1.2 治法
4.1.3 方药
4.2 雄芍汤防治肝纤维化的作用的探讨
4.2.1 雄芍汤抗肝纤维化作用的前期研究
4.2.2 本实验雄芍汤防治肝纤维化的作用的研究
4.3 雄芍汤防治肝纤维化的作用机制
4.3.1 雄芍汤防治肝纤维化与肝细胞
4.3.2 雄芍汤防治肝纤维化与肝星状细胞
4.3.3 雄芍汤防治肝纤维化与5-脂氧合酶
4.3.4 雄芍汤防治肝纤维化作用与TRAIL-FADD/caspase8凋亡通路
4.4 结论与启示
参考文献
第三部分 雄芍汤对大鼠肝细胞凋亡的影响
1 实验材料
1.1 含药血清
1.2 细胞株
1.3 主要试剂及仪器
2 实验方法
2.1 调整各组含药血清的浓度
2.2 大鼠肝细胞培养与传代
2.3 流式细胞术检测雄芍汤含药血清对大鼠肝细胞凋亡的影响
2.3.1 实验方案
2.3.2 流式细胞术检测
2.4 统计学分析
3 实验结果
3.1 各组大鼠肝细胞凋亡情况
3.2 各组大鼠肝细胞凋亡统计学比较
4 实验讨论
参考文献
创新点与局限性
结语
附录
1 文献综述
参考文献
2 在读博士期间发表论文、科研情况
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]血清ALT、AST和GGT水平检测在肝脏疾病诊断中的应用价值[J]. 仝静. 河南医学研究. 2017(22)
[2]肝脏损伤新的血清学标志物的研究进展[J]. 宋华峰,胥萍. 世界华人消化杂志. 2017(30)
[3]死亡受体家族调控程序性坏死的分子机制研究进展[J]. 李健,范铮,张立亚,王勇强,王兵. 岭南急诊医学杂志. 2017(05)
[4]肝纤维化从肾论治探讨[J]. 陈春宇,于峥,陈小野. 中国中医基础医学杂志. 2017(09)
[5]血清ALT、AST、GGT检测在肝脏疾病诊断中应用研究[J]. 崔红权. 国际检验医学杂志. 2017(16)
[6]扶正化瘀胶囊抗肝纤维化的临床疗效与作用机制研究进展[J]. 罗婷,高鑫,甘龙禹,汪涛,杨文凤,涂燕云. 湖南中医杂志. 2016(11)
[7]肝纤维化药物治疗的研究进展[J]. 李亚芳,霍丽娟. 国际消化病杂志. 2016(04)
[8]国外肝纤维化诊断的研究热点分析[J]. 张弘,陶森,郝彧,赵紫薇,刘妮波,王泓午. 首都医科大学学报. 2016(01)
[9]大黄蟅虫丸在肝病领域中的临床与实验研究现状[J]. 谢永财,胡国信. 中国中西医结合消化杂志. 2015(12)
[10]复方鳖甲软肝片治疗慢性乙型肝炎患者对血清肝纤维化指标的影响[J]. 宫嫚,辛绍杰,邹正升,李润东,徐庆会,韩宝英,于建国,于德航,司雁菱,王宪波,候爱画,李秀惠,陈菊梅. 实用肝脏病杂志. 2015(06)
本文编号：3726929
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