藏红花酸修饰物对心肌缺血再灌注损伤的保护效应及其机制研究

发布时间：2023-01-03 09:49

　　心肌缺血再灌注是终止心肌坏死的方法之一,然而再灌注本身可能会加剧缺血后的心肌损伤。因此开发治疗心肌缺血再灌注损伤的药物具有重要意义。GX是由藏红花酸经结构修饰后得到的化合物,本论文通过在细胞水平和动物水平两个研究层面,观察GX对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及可能的作用机制。细胞水平上,首先利用药物诱导建立H9c2心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,通过细胞形态学观察缺氧/复氧模型是否建立成功;利用CCK-8法检测细胞存活率,Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡以及荧光探针法检测细胞内ROS水平,观察GX对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。实验结果表明,10 μmol/L的GX可以明显提高细胞存活率、改善心肌细胞凋亡以及降低细胞内活性氧水平,说明GX在一定程度上可以改善由缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤。动物水平上,建立在体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型（缺血时间为30 min,再灌注120 min）,设假手术组、模型组、阳性药红花黄色素组（20 mg/kg,i.v.）及GX高、中、低剂量组（9、6、3 mg/kg,i.v.）;利用TTC染色法测定心肌梗死面积;小动物超声影像系统、PowerLa... 

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 课题研究背景
    1.2 心肌缺血再灌注损伤的发病机制
        1.2.1 氧自由基
        1.2.2 钙离子超载
        1.2.3 炎症反应
        1.2.4 细胞凋亡
    1.3 心肌缺血再灌注损伤的防治策略
        1.3.1 临床防治:IPC与RIPC
        1.3.2 药理学防治
            1.3.2.1 抗氧化剂
            1.3.2.2 一氧化氮
            1.3.2.3 他汀类药物
            1.3.2.4 钙通道阻滞剂
            1.3.2.5 治疗性浅低温
    1.4 藏红花的药理作用研究进展
        1.4.1 降血脂作用
        1.4.2 抗高血压作用
        1.4.3 抗心肌梗死及对心肌缺血的保护作用
        1.4.4 抗心律失常作用
        1.4.5 其他心血管疾病的作用
    1.5 本课题来源、研究目的及意义
        1.5.1 课题来源
        1.5.2 研究目的与意义
    1.6 研究内容
2 GX对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用研究
    2.1 引言
    2.2 实验部分
        2.2.1 实验材料、试剂与仪器
            2.2.1.1 细胞来源
            2.2.1.2 实验试剂
            2.2.1.3 实验仪器
        2.2.2 实验方法
            2.2.2.1 药品和培养基的配制
            2.2.2.2 H9c2心肌细胞的培养
            2.2.2.3 H9c2心肌细胞缺氧/复氧模型的建立
            2.2.2.4 药物处理与分组
            2.2.2.5 CCK-8法检测细胞存活率
            2.2.2.6 Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡
            2.2.2.7 荧光探针法检测细胞内ROS的含量
            2.2.2.8 数据处理
    2.3 实验结果
        2.3.1 H9c2心肌细胞缺氧/复氧模型的形态学分析
        2.3.2 GX对H9c2心肌细胞缺氧/复氧后细胞存活率的影响
        2.3.3 GX对H9c2心肌细胞缺氧/复氧后细胞凋亡的影响
        2.3.4 GX对H9c2心肌细胞缺氧/复氧后细胞内ROS水平的影响
    2.4 本章小结
3 GX对大鼠心肌缺血再灌注损伤的药效学评价
    3.1 引言
    3.2 实验部分
        3.2.1 实验材料
            3.2.1.1 实验药品与试剂
            3.2.1.2 实验仪器
            3.2.1.3 实验相关耗材
        3.2.2 实验方法
            3.2.2.1 大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的建立
            3.2.2.2 实验动物分组及处理
            3.2.2.3 大鼠MIRI的心电图表现
            3.2.2.4 心肌梗死面积的检测
            3.2.2.5 M型超声心动图检测心功能
            3.2.2.6 血流动力学检测心脏功能
            3.2.2.7 数据处理
    3.3 结果与分析
        3.3.1 大鼠MIRI模型建立成功的心电图分析
        3.3.2 不同剂量GX对MIRI大鼠心肌梗死面积的影响
        3.3.3 不同剂量GX对MIRI大鼠心彩超的影响
        3.3.4 不同剂量GX对MIRI大鼠血流动力学的影响
    3.4 本章小结
4 GX对大鼠心肌缺血再灌注损伤相关因子的影响
    4.1 引言
    4.2 实验部分
        4.2.1 实验材料
            4.2.1.1 实验药品与试剂
            4.2.1.2 实验仪器
            4.2.1.3 实验相关耗材
        4.2.2 实验方法
            4.2.2.1 大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的建立
            4.2.2.2 实验动物分组及处理
            4.2.2.3 实验动物取材及血浆生化指标检测
            4.2.2.4 GX对大鼠血浆中CK的影响
            4.2.2.5 GX对大鼠血浆中LDH活性的影响
            4.2.2.6 GX对大鼠血浆中SOD的影响
            4.2.2.7 GX对大鼠血浆中MDA的影响
            4.2.2.8 GX对大鼠血浆中炎症因子的影响
            4.2.2.9 数据处理
    4.3 结果与分析
        4.3.1 GX对大鼠血浆中CK、LDH、SOD及MDA的影响
        4.3.2 GX对大鼠血浆中TNF-α、IL-6、IL-1β的影响
    4.4 本章小结
5 GX对心肌缺血再灌注损伤相关机制的研究
    5.1 引言
    5.2 实验部分
        5.2.1 实验材料
            5.2.1.1 实验药品与试剂
            5.2.1.2 实验仪器
        5.2.2 实验方法
            5.2.2.1 心肌组织总RNA的提取
            5.2.2.2 反转录
            5.2.2.3 Real-time PCR
            5.2.2.4 数据处理
    5.3 结果与分析
        5.3.1 RT-PCR检测NOX2、NOX4基因的mRNA表达
        5.3.2 RT-PCR检测TNF-α、IL-6及IL-1β基因的mRNA表达
    5.4 本章小结
讨论
结论
参考文献
附录
攻读学位期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]藏红花酸对增生性玻璃体视网膜病变的抑制作用及分子机制研究[D]. 王会芳.河北医科大学 2018
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硕士论文
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本文编号：3727234