艾叶挥发油抗肝癌作用研究及其β-环糊精聚合物微球的制备
发布时间：2023-01-26 03:21
艾叶为多年生草本植物艾（Artemisia argyi Lévl.et Vant.）的干燥叶,艾叶挥发油（Artemisia argyi essential oils,AAEO）是艾叶主要的有效成分群之一,主要含有桉油精、樟脑和龙脑等成分,本实验所用AAEO通过水蒸气蒸馏法提得。预实验研究发现AAEO具有抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖的作用,本课题将深入研究AAEO抗肝癌活性及其β-环糊精聚合物（β-cyclodextrinpoly mer,β-CDP）微球的制备与评价。实验分为以下四部分:1.AAEO体外抗肝癌活性采用MTT法检测细胞增殖抑制率。结果表明:在24、48和72 h的IC50分别为353.83、330.88和295.50μg/mL,72 h增殖抑制率最高。通过流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果显示:早期凋亡率随着药物浓度增加而增大,晚期凋亡率在AAEO浓度高于382.5μg/mL时骤增,最高可达到80.84%。荧光倒置显微镜观察AAEO作用于SMMC-7721细胞后,细胞形态变化。结果表明:AAEO促进凋亡过程发生发展,细胞经历了核呈致密斑块或碎片状...
【文章页数】：100 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 AAEO体外抗肝癌活性研究
1 实验材料
1.1 实验仪器
1.2 实验试剂
2 实验方法
2.1 MTT法检测细胞生长抑制率
2.1.1 AAEO溶液的配制
2.1.2 MTT溶液的配制
2.1.3 实验步骤
2.1.3.1 铺板给药
2.1.3.2 诱导培养
2.1.3.3 检测并计算抑制率
2.2 AnnerxinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率
2.2.1 诱导培养
2.2.2 细胞染色
2.2.3 流式细胞仪检测
2.3 荧光显微镜观察细胞凋亡形态
2.3.1 诱导培养
2.3.2 细胞染色
2.3.3 荧光显微镜观察
2.4 PI单染法检测细胞周期
2.4.1 诱导培养
2.4.2 细胞固定
2.4.3 细胞染色
2.4.4 流式细胞仪检测
3 实验结果
3.1 MTT法检测细胞生长抑制率
3.2 AnnerxinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率
3.3 荧光显微镜观察细胞凋亡形态
3.4 PI单染法检测细胞周期
4 讨论与小结
第二章 AAEO体内抗肝癌药效学研究
1 实验仪器、材料与试剂
1.1 实验仪器
1.2 实验试剂
1.3 实验动物及瘤株
2 实验方法
2.1 AAEO小鼠体内急性毒性实验
2.1.1 AAEO溶液的配制
2.1.2 实验方法
2.2 AAEO体内抗肝癌药效学研究
2.2.1 溶液的配制
2.2.2 建立SMMC-7721肝癌小鼠模型
2.2.3 分组给药
2.2.4 测量指标
2.2.5 病理切片
3 实验结果
3.1 AAEO小鼠体内急性毒性实验
3.2 AAEO体内抗肝癌药效学研究
3.2.1 荷瘤小鼠肿瘤体积和体重变化
3.2.2 肿瘤重量及抑瘤率
3.2.3 肿瘤病理学分析
4 讨论与小结
第三章 AAEO-CDP微球的制备及制剂评价
1 实验仪器、材料与试剂
1.1 实验仪器
1.2 实验试剂
2 实验方法
2.1 AAEO-CDP微球的制备及多成分含量测定方法的建立
2.1.1 β-CDP微球的制备
2.1.2 AAEO-CDP微球的制备
2.1.3 AAEO-CDP微球多成分含量测定方法的建立
2.1.3.1 气相色谱条件
2.1.3.2 溶液的配制
2.1.3.3 方法学考察
2.2 BOX-响应曲面法
2.2.1 单因素考察
2.2.2 BOX-响应曲面实验设计
2.2.3 验证实验
2.3 表征与质量评价
2.3.1 外观及形态
2.3.2 粒径及分布
2.3.3 溶胀率(SR)
2.3.4 β-CD的含量
2.3.5 红外光谱图(IR)
2.3.6 差示扫描量热图(DSC)
2.3.7 包封率及载药量
2.3.8 体外释药研究
2.3.9 药物稳定性研究
2.3.9.1 影响因素实验
2.3.9.2 初步稳定性实验
3 实验结果
3.1 AAEO-CDP微球的制备及多成分含量测定方法的建立
3.1.1 专属性
3.1.2 线性关系与范围
3.1.3 最低检测限及定量限
3.1.4 精密度
3.1.5 重复性
3.1.6 加样回收率实验
3.2 BOX-响应曲面法
3.2.1 单因素考察
3.2.2 BOX-响应曲面实验设计
3.2.3 BOX-响应曲面实验结果分析
3.2.3.1 包封率(Y1)
3.2.3.2 产率(Y2)
3.2.3.3 验证实验
3.3 质量评价
3.3.1 外观和形态
3.3.2 粒径及分布
3.3.3 溶胀率
3.3.4 β-CD的含量
3.3.5 红外光谱图(IR)
3.3.6 差示扫描量热图(DSC)
3.3.7 包封率及载药量
3.3.8 体外释药研究
3.3.9 药物稳定性研究
3.3.9.1 影响因素实验
3.3.9.2 初步稳定性实验
4 讨论与小结
第四章 AAEO及其β-CDP微球体内药代动力学研究
1 实验仪器、材料与试剂
1.1 实验仪器
1.2 实验试剂
1.3 实验动物
2 实验方法
2.1 色谱条件
2.2 溶液的配制
2.3 血浆样品预处理
2.4 方法学考察
2.4.1 专属性
2.4.2 线性关系与范围
2.4.3 方法回收率
2.4.4 精密度
2.4.5 稳定性
2.5 AAEO体内药代动力学实验
2.5.1 给药方式
2.5.2 样品采集
2.5.3 数据处理
3 实验结果
3.1 方法学考察
3.1.1 专属性
3.1.2 线性关系与范围
3.1.3 方法回收率
3.1.4 精密度
3.1.5 稳定性
3.2 体内药代动力学结果及参数
3.2.1 体内药代动力学结果
3.2.2 体内药代动力学参数
4 讨论与小结
第五章 总论与展望
1 总论
2 展望
综述
1 环糊精
1.1 环糊精概述
1.1.1 环糊精结构与性质
1.1.2 环糊精在医药应用
1.2 β-环糊精聚合物微球
1.3 β-环糊精聚合物微球制备方法
2 AAEO的研究概况
2.1 艾叶的本草考证
2.2 AAEO的成分
2.3 AAEO的药理作用及其临床应用
2.3.1 抗炎作用
2.3.2 抗菌作用
2.3.3 抗病毒作用
2.3.4 增强免疫作用
2.3.5 镇咳平喘作用
参考文献
个人简历
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]艾叶挥发油对耳肿胀急性炎症模型小鼠的抗炎作用研究[J]. 赵桂芝,王绪平,俞忠明,郑纯威,黄孝闻,寿旦. 浙江中医杂志. 2016(04)
[2]艾叶挥发油对HBV的抑制作用[J]. 赵志鸿,王丽阳,郑立运,耿楠,赵雪杰,李锦玉,王桂芳,张壮丽,张小俊. 郑州大学学报(医学版). 2015(02)
[3]艾叶挥发油提取工艺的优化[J]. 赵志鸿,耿楠,黄勇勇,吴芳,李锦玉,王桂芳,张壮丽,张小俊. 中国医药导报. 2014(35)
[4]HS-SPME-GC-MS测定艾叶挥发性成分方法优化[J]. 张小俊,赵志鸿,张壮丽,王桂芳,陈慧平,邹敏. 中国实验方剂学杂志. 2014(21)
[5]艾叶顶空萃取的挥发油指纹图谱[J]. 张小俊,赵志鸿,张壮丽,王桂芳,陈慧平,邹敏. 中成药. 2014(06)
[6]艾叶乙酸乙酯提取物对HBV的抑制作用[J]. 赵志鸿,侯迎迎,郑立运,王丽阳,王桂芳,张小俊,张壮丽. 郑州大学学报(医学版). 2013(06)
[7]河南驻马店产艾叶挥发油的GC-MS分析[J]. 赵志鸿,黄勇勇,张小俊,王丽阳,张壮丽,王桂芳. 郑州大学学报(理学版). 2013(02)
[8]响应曲面法优化茴香油β-环糊精微球包合物的制备工艺研究[J]. 杨黎燕,杨欣雨,赵灵芝,尤静. 食品工业科技. 2013(07)
[9]乳化溶剂挥发法及在微囊化制剂中的应用[J]. 舒丹丹,张淑娟,金丽娜,王铁闯,李大吉. 北方药学. 2012(04)
[10]艾叶挥发油治疗大鼠变应性鼻炎的实验研究[J]. 张枢,王宇,张宇. 中国免疫学杂志. 2011(09)
博士论文
[1]β-环糊精聚合物的合成、自组装及作为药物/基因载体的应用研究[D]. 熊青青.北京协和医学院 2014
[2]环糊精聚合物微球及球形聚电解质刷选择性吸附苯酚和重金属离子的研究[D]. 陈晴川.华东理工大学 2013
[3]新型功能聚合物微球的制备、表征及其应用研究[D]. 潘元佳.复旦大学 2013
[4]用于新型抗癌药物定向控制释放的高分子载体的合成与表征[D]. 刘郁杨.西北工业大学 2003
硕士论文
[1]鱼腥草挥发油抗淋巴瘤药效学及其固体脂质纳米粒的制备研究[D]. 荣晓哲.郑州大学 2017
[2]艾叶挥发油纳米结构脂质载体的制备及其抗乙肝病毒活性的研究[D]. 冯诗杨.郑州大学 2017
[3]艾叶EA部位抗HBV活性成分分析[D]. 吴芳.郑州大学 2016
[4]薏苡仁油交联环糊精包合物的制备及质量研究[D]. 周云龙.扬州大学 2016
[5]莪术油交联环糊精包合物制备工艺研究[D]. 谢飞.扬州大学 2015
[6]Rab27A/B在四种不同人肝癌细胞株中的表达[D]. 刘鼎.山西医科大学 2015
[7]艾叶油的抗炎活性研究[D]. 李波.山西农业大学 2013
[8]聚β-环糊精载药微球的制备及药物释放性能的研究[D]. 曹蕾.广东药学院 2009
[9]环糊精衍生物对丹皮酚包合特性研究[D]. 张荣发.重庆大学 2009
本文编号：3732114
【文章页数】：100 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 AAEO体外抗肝癌活性研究
1 实验材料
1.1 实验仪器
1.2 实验试剂
2 实验方法
2.1 MTT法检测细胞生长抑制率
2.1.1 AAEO溶液的配制
2.1.2 MTT溶液的配制
2.1.3 实验步骤
2.1.3.1 铺板给药
2.1.3.2 诱导培养
2.1.3.3 检测并计算抑制率
2.2 AnnerxinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率
2.2.1 诱导培养
2.2.2 细胞染色
2.2.3 流式细胞仪检测
2.3 荧光显微镜观察细胞凋亡形态
2.3.1 诱导培养
2.3.2 细胞染色
2.3.3 荧光显微镜观察
2.4 PI单染法检测细胞周期
2.4.1 诱导培养
2.4.2 细胞固定
2.4.3 细胞染色
2.4.4 流式细胞仪检测
3 实验结果
3.1 MTT法检测细胞生长抑制率
3.2 AnnerxinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率
3.3 荧光显微镜观察细胞凋亡形态
3.4 PI单染法检测细胞周期
4 讨论与小结
第二章 AAEO体内抗肝癌药效学研究
1 实验仪器、材料与试剂
1.1 实验仪器
1.2 实验试剂
1.3 实验动物及瘤株
2 实验方法
2.1 AAEO小鼠体内急性毒性实验
2.1.1 AAEO溶液的配制
2.1.2 实验方法
2.2 AAEO体内抗肝癌药效学研究
2.2.1 溶液的配制
2.2.2 建立SMMC-7721肝癌小鼠模型
2.2.3 分组给药
2.2.4 测量指标
2.2.5 病理切片
3 实验结果
3.1 AAEO小鼠体内急性毒性实验
3.2 AAEO体内抗肝癌药效学研究
3.2.1 荷瘤小鼠肿瘤体积和体重变化
3.2.2 肿瘤重量及抑瘤率
3.2.3 肿瘤病理学分析
4 讨论与小结
第三章 AAEO-CDP微球的制备及制剂评价
1 实验仪器、材料与试剂
1.1 实验仪器
1.2 实验试剂
2 实验方法
2.1 AAEO-CDP微球的制备及多成分含量测定方法的建立
2.1.1 β-CDP微球的制备
2.1.2 AAEO-CDP微球的制备
2.1.3 AAEO-CDP微球多成分含量测定方法的建立
2.1.3.1 气相色谱条件
2.1.3.2 溶液的配制
2.1.3.3 方法学考察
2.2 BOX-响应曲面法
2.2.1 单因素考察
2.2.2 BOX-响应曲面实验设计
2.2.3 验证实验
2.3 表征与质量评价
2.3.1 外观及形态
2.3.2 粒径及分布
2.3.3 溶胀率(SR)
2.3.4 β-CD的含量
2.3.5 红外光谱图(IR)
2.3.6 差示扫描量热图(DSC)
2.3.7 包封率及载药量
2.3.8 体外释药研究
2.3.9 药物稳定性研究
2.3.9.1 影响因素实验
2.3.9.2 初步稳定性实验
3 实验结果
3.1 AAEO-CDP微球的制备及多成分含量测定方法的建立
3.1.1 专属性
3.1.2 线性关系与范围
3.1.3 最低检测限及定量限
3.1.4 精密度
3.1.5 重复性
3.1.6 加样回收率实验
3.2 BOX-响应曲面法
3.2.1 单因素考察
3.2.2 BOX-响应曲面实验设计
3.2.3 BOX-响应曲面实验结果分析
3.2.3.1 包封率(Y1)
3.2.3.2 产率(Y2)
3.2.3.3 验证实验
3.3 质量评价
3.3.1 外观和形态
3.3.2 粒径及分布
3.3.3 溶胀率
3.3.4 β-CD的含量
3.3.5 红外光谱图(IR)
3.3.6 差示扫描量热图(DSC)
3.3.7 包封率及载药量
3.3.8 体外释药研究
3.3.9 药物稳定性研究
3.3.9.1 影响因素实验
3.3.9.2 初步稳定性实验
4 讨论与小结
第四章 AAEO及其β-CDP微球体内药代动力学研究
1 实验仪器、材料与试剂
1.1 实验仪器
1.2 实验试剂
1.3 实验动物
2 实验方法
2.1 色谱条件
2.2 溶液的配制
2.3 血浆样品预处理
2.4 方法学考察
2.4.1 专属性
2.4.2 线性关系与范围
2.4.3 方法回收率
2.4.4 精密度
2.4.5 稳定性
2.5 AAEO体内药代动力学实验
2.5.1 给药方式
2.5.2 样品采集
2.5.3 数据处理
3 实验结果
3.1 方法学考察
3.1.1 专属性
3.1.2 线性关系与范围
3.1.3 方法回收率
3.1.4 精密度
3.1.5 稳定性
3.2 体内药代动力学结果及参数
3.2.1 体内药代动力学结果
3.2.2 体内药代动力学参数
4 讨论与小结
第五章 总论与展望
1 总论
2 展望
综述
1 环糊精
1.1 环糊精概述
1.1.1 环糊精结构与性质
1.1.2 环糊精在医药应用
1.2 β-环糊精聚合物微球
1.3 β-环糊精聚合物微球制备方法
2 AAEO的研究概况
2.1 艾叶的本草考证
2.2 AAEO的成分
2.3 AAEO的药理作用及其临床应用
2.3.1 抗炎作用
2.3.2 抗菌作用
2.3.3 抗病毒作用
2.3.4 增强免疫作用
2.3.5 镇咳平喘作用
参考文献
个人简历
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]艾叶挥发油对耳肿胀急性炎症模型小鼠的抗炎作用研究[J]. 赵桂芝,王绪平,俞忠明,郑纯威,黄孝闻,寿旦. 浙江中医杂志. 2016(04)
[2]艾叶挥发油对HBV的抑制作用[J]. 赵志鸿,王丽阳,郑立运,耿楠,赵雪杰,李锦玉,王桂芳,张壮丽,张小俊. 郑州大学学报(医学版). 2015(02)
[3]艾叶挥发油提取工艺的优化[J]. 赵志鸿,耿楠,黄勇勇,吴芳,李锦玉,王桂芳,张壮丽,张小俊. 中国医药导报. 2014(35)
[4]HS-SPME-GC-MS测定艾叶挥发性成分方法优化[J]. 张小俊,赵志鸿,张壮丽,王桂芳,陈慧平,邹敏. 中国实验方剂学杂志. 2014(21)
[5]艾叶顶空萃取的挥发油指纹图谱[J]. 张小俊,赵志鸿,张壮丽,王桂芳,陈慧平,邹敏. 中成药. 2014(06)
[6]艾叶乙酸乙酯提取物对HBV的抑制作用[J]. 赵志鸿,侯迎迎,郑立运,王丽阳,王桂芳,张小俊,张壮丽. 郑州大学学报(医学版). 2013(06)
[7]河南驻马店产艾叶挥发油的GC-MS分析[J]. 赵志鸿,黄勇勇,张小俊,王丽阳,张壮丽,王桂芳. 郑州大学学报(理学版). 2013(02)
[8]响应曲面法优化茴香油β-环糊精微球包合物的制备工艺研究[J]. 杨黎燕,杨欣雨,赵灵芝,尤静. 食品工业科技. 2013(07)
[9]乳化溶剂挥发法及在微囊化制剂中的应用[J]. 舒丹丹,张淑娟,金丽娜,王铁闯,李大吉. 北方药学. 2012(04)
[10]艾叶挥发油治疗大鼠变应性鼻炎的实验研究[J]. 张枢,王宇,张宇. 中国免疫学杂志. 2011(09)
博士论文
[1]β-环糊精聚合物的合成、自组装及作为药物/基因载体的应用研究[D]. 熊青青.北京协和医学院 2014
[2]环糊精聚合物微球及球形聚电解质刷选择性吸附苯酚和重金属离子的研究[D]. 陈晴川.华东理工大学 2013
[3]新型功能聚合物微球的制备、表征及其应用研究[D]. 潘元佳.复旦大学 2013
[4]用于新型抗癌药物定向控制释放的高分子载体的合成与表征[D]. 刘郁杨.西北工业大学 2003
硕士论文
[1]鱼腥草挥发油抗淋巴瘤药效学及其固体脂质纳米粒的制备研究[D]. 荣晓哲.郑州大学 2017
[2]艾叶挥发油纳米结构脂质载体的制备及其抗乙肝病毒活性的研究[D]. 冯诗杨.郑州大学 2017
[3]艾叶EA部位抗HBV活性成分分析[D]. 吴芳.郑州大学 2016
[4]薏苡仁油交联环糊精包合物的制备及质量研究[D]. 周云龙.扬州大学 2016
[5]莪术油交联环糊精包合物制备工艺研究[D]. 谢飞.扬州大学 2015
[6]Rab27A/B在四种不同人肝癌细胞株中的表达[D]. 刘鼎.山西医科大学 2015
[7]艾叶油的抗炎活性研究[D]. 李波.山西农业大学 2013
[8]聚β-环糊精载药微球的制备及药物释放性能的研究[D]. 曹蕾.广东药学院 2009
[9]环糊精衍生物对丹皮酚包合特性研究[D]. 张荣发.重庆大学 2009
本文编号：3732114
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