消癥化瘀法调控Wnt通路关键蛋白β-catenin和CyclinD1影响肺癌干细胞增殖的研究
发布时间：2023-02-06 20:47
目的:研究消癥化瘀法通过调控Wnt通路关键蛋白β-catenin和Cyclin D1影响肺癌干细胞(Lung Stem Cell,LSC)的增殖,探讨消癥化瘀法治疗肺癌的机制。方法:(1)人肺腺癌细胞系A549侧群细胞(Side Population细胞,简称SP细胞)的分选及其干细胞特征鉴定的研究:通过流式细胞荧光激活分选技术(Fluorescence-activated cell sorting,FACS)对人肺腺癌细胞系A549中SP细胞和非SP细胞进行分选,并通过体外克隆形成实验、MTT法观察细胞增殖、流式细胞仪分析细胞的周期及分化和裸鼠体内成瘤实验等方法,分析SP细胞亚群、非SP细胞亚群和总细胞的体内、外增殖能力、细胞分化能力以及体内成瘤能力。(2)消癥化瘀法通过调控Wnt通路关键蛋白β-catenin和Cyclin D1影响对肺癌干细胞的增殖的研究:培养人肺腺癌细胞系A549,采用流式细胞仪分选技术,筛选并鉴定其中具有干细胞特性的SP细胞,选用消癥化瘀法的代表方回生口服液,用回生口服液的含药血清进行干预,设置回生口服液高、中、低剂量组(11.6g/kg,5.8g/kg,2....
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略词表
前言
1 人肺腺癌细胞系A549侧群细胞SP细胞的分选及其干细胞特性鉴定的研究
1.1 实验材料
1.1.1 实验细胞株和动物
1.1.2 主要的实验试剂
1.1.3 主要的仪器设备
1.1.4 主要实验试剂溶液的配置
1.2 实验方法
1.2.1 人肺腺癌细胞系A549的培养与传代
1.2.2 人肺腺癌细胞系A549的冻存与复苏
1.2.3 流式细胞荧光激活分选技术(FACS)对人肺腺癌细胞系A549中SP细胞
1.2.4 体外克隆形成实验
1.2.5 SP细胞分化实验
1.2.6 MTT法观察细胞增殖能力
1.2.7 流式细胞仪分析SP细胞和non-SP细胞的细胞周期
1.2.8 裸鼠体内成瘤实验
1.2.9 统计学处理方法
1.3 实验结果
1.3.1 人肺腺癌细胞系A549中SP细胞的分选
1.3.2 体外克隆形成实验
1.3.3 SP细胞分化实验
1.3.4 MTT法观察各组细胞增殖能力
1.3.5 流式细胞仪分析SP细胞和non-SP细胞的细胞周期
1.3.6 裸鼠体内成瘤实验
1.4 小结
2 消癥化瘀法通过调控Wnt通路关键蛋白β-catenin和CyclinD1影响对肺癌干细胞增殖的研究
2.1 实验材料
2.1.1 实验细胞株和动物
2.1.2 实验药物
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要仪器设备
2.1.5 主要试剂溶液的配置
2.2 实验方法
2.2.1 药物血清的制备
2.2.2 药物干预下的裸鼠体内成瘤实验
2.2.3 流式细胞仪分析药物干预下肺癌干细胞的细胞周期
2.2.4 用Western Blot法检测回生口服液对肺癌干细胞Wnt通路中β-catenin和CyclinD1蛋白表达的影响
2.2.5 统计学处理方法
2.3 实验结果
2.3.1 药物干预下肺癌干细胞BALB／c裸鼠体内成瘤实验
2.3.2 药物对肺癌干细胞细胞周期的影响
2.3.3 药物干预下对肺癌干细胞中β-catenin蛋白和CyclinD1蛋白表达的影响
2.4 小结
3 讨论
3.1 中医对肺癌的认识
3.1.1 中医对肺癌病名的认识
3.1.2 中医对肺癌病因病机的认识
3.1.3 中医对肺癌治法治则的认识
3.2 化瘀消癥法的代表方回生口服液治疗肺癌的研究
3.2.1 中成药回生口服液的出处和来源
3.2.2 回生口服液的组方原理
3.2.3 回生口服液中主要中药的现代药物化学及药理研究
3.2.4 回生口服液治疗肺癌的前期临床研究及实验研究
3.2.4.1 抑制肺癌细胞的增殖
3.2.4.2 增强机体免疫调节能力
3.2.4.3 抑制肺癌新血管生成
3.2.4.4 联合化疗药物发挥减毒作用
3.3 现代医学对肺癌干细胞的认识
3.3.1 干细胞的概念
3.3.2 肿瘤干细胞理论的提出及特点
3.3.3 肺癌干细胞的发现
3.3.4 分选肺癌干细胞的主要方法
3.4 Wnt信号通路与肺癌干细胞关系
3.4.1 β-catenin和CyclinD1蛋白的结构
3.4.2 β-catenin和CyclinD1蛋白的生理功能
3.4.3 β-catenin和CyclinD1蛋白是Wnt信号转导通路的关键蛋白
3.4.4 β-catenin和CyclinD1蛋白与肺癌干细胞之间的关系
4 结论
5 问题及展望
致谢
参考文献
附录1 综述
参考文献
附录2 在读期间公开发表的学术论文
本文编号：3736581
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略词表
前言
1 人肺腺癌细胞系A549侧群细胞SP细胞的分选及其干细胞特性鉴定的研究
1.1 实验材料
1.1.1 实验细胞株和动物
1.1.2 主要的实验试剂
1.1.3 主要的仪器设备
1.1.4 主要实验试剂溶液的配置
1.2 实验方法
1.2.1 人肺腺癌细胞系A549的培养与传代
1.2.2 人肺腺癌细胞系A549的冻存与复苏
1.2.3 流式细胞荧光激活分选技术(FACS)对人肺腺癌细胞系A549中SP细胞
1.2.4 体外克隆形成实验
1.2.5 SP细胞分化实验
1.2.6 MTT法观察细胞增殖能力
1.2.7 流式细胞仪分析SP细胞和non-SP细胞的细胞周期
1.2.8 裸鼠体内成瘤实验
1.2.9 统计学处理方法
1.3 实验结果
1.3.1 人肺腺癌细胞系A549中SP细胞的分选
1.3.2 体外克隆形成实验
1.3.3 SP细胞分化实验
1.3.4 MTT法观察各组细胞增殖能力
1.3.5 流式细胞仪分析SP细胞和non-SP细胞的细胞周期
1.3.6 裸鼠体内成瘤实验
1.4 小结
2 消癥化瘀法通过调控Wnt通路关键蛋白β-catenin和CyclinD1影响对肺癌干细胞增殖的研究
2.1 实验材料
2.1.1 实验细胞株和动物
2.1.2 实验药物
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要仪器设备
2.1.5 主要试剂溶液的配置
2.2 实验方法
2.2.1 药物血清的制备
2.2.2 药物干预下的裸鼠体内成瘤实验
2.2.3 流式细胞仪分析药物干预下肺癌干细胞的细胞周期
2.2.4 用Western Blot法检测回生口服液对肺癌干细胞Wnt通路中β-catenin和CyclinD1蛋白表达的影响
2.2.5 统计学处理方法
2.3 实验结果
2.3.1 药物干预下肺癌干细胞BALB／c裸鼠体内成瘤实验
2.3.2 药物对肺癌干细胞细胞周期的影响
2.3.3 药物干预下对肺癌干细胞中β-catenin蛋白和CyclinD1蛋白表达的影响
2.4 小结
3 讨论
3.1 中医对肺癌的认识
3.1.1 中医对肺癌病名的认识
3.1.2 中医对肺癌病因病机的认识
3.1.3 中医对肺癌治法治则的认识
3.2 化瘀消癥法的代表方回生口服液治疗肺癌的研究
3.2.1 中成药回生口服液的出处和来源
3.2.2 回生口服液的组方原理
3.2.3 回生口服液中主要中药的现代药物化学及药理研究
3.2.4 回生口服液治疗肺癌的前期临床研究及实验研究
3.2.4.1 抑制肺癌细胞的增殖
3.2.4.2 增强机体免疫调节能力
3.2.4.3 抑制肺癌新血管生成
3.2.4.4 联合化疗药物发挥减毒作用
3.3 现代医学对肺癌干细胞的认识
3.3.1 干细胞的概念
3.3.2 肿瘤干细胞理论的提出及特点
3.3.3 肺癌干细胞的发现
3.3.4 分选肺癌干细胞的主要方法
3.4 Wnt信号通路与肺癌干细胞关系
3.4.1 β-catenin和CyclinD1蛋白的结构
3.4.2 β-catenin和CyclinD1蛋白的生理功能
3.4.3 β-catenin和CyclinD1蛋白是Wnt信号转导通路的关键蛋白
3.4.4 β-catenin和CyclinD1蛋白与肺癌干细胞之间的关系
4 结论
5 问题及展望
致谢
参考文献
附录1 综述
参考文献
附录2 在读期间公开发表的学术论文
本文编号：3736581
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