二精丸防治阿尔茨海默病的物质基础与作用机制研究
发布时间：2023-02-15 19:12
目的:一方面,利用网络药理学的手段,对二精丸防治AD的物质基础与作用机制进行虚拟筛选,为后期实验奠定基础;另一方面,利用行为学、形态学、蛋白质组学和细胞实验验证的研究方法,研究二精丸对去卵巢联合D-半乳糖与Aβ1-40注射所致AD大鼠学习记忆的影响及其物质基础与作用机制,两者相互印证,共同指明二精丸防治AD的物质基础与作用机制。方法:1基于网络药理学二精丸防治AD物质基础与作用机制研究1.1二精丸化合物的获取和筛选通过TCMSP数据库、台湾中医药资料库、中国科学院化学数据库三个数据库、相关文献调研和实验室获取,对二精丸的化学成分进行搜集。为了便于后期分析,将枸杞子和黄精中的化合物统一命名,并利用DS软件中的ADMET Descriptors模块,对所收集到的成分进行类药性筛选。1.2二精丸活性化合物的靶点预测利用PubChem数据库,将所有的化合物都转化为标准的Canonical SMILES格式,将SMILES格式文件导入Swiss Target Prediction平台,设置属性为“homo sapiens”,预测活性化合物的潜在靶点并根据文献报道补充未预测到...
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
中文摘要
abstract
英文缩略表
引言
第一部分 基于网络药理学二精丸防治AD物质基础与作用机制研究
1 材料
2 方法
2.1 二精丸化合物的获取和筛选
2.2 二精丸活性化合物的靶点预测
2.3 二精丸防治AD靶点的搜集
2.4 通路的富集分析
2.5 构建成分-靶蛋白-信号通路网络
2.6 分子对接验证
3 结果
3.1 二精丸活性成分的筛选
3.2 靶点预测
3.3 基因功能和通路富集分析
3.4 二精丸防治AD“活性成分-靶点-通路”网络构建
3.5 分子对接
4 讨论
5 本章小结
第二部分 二精丸对去卵巢联合D-半乳糖与Aβ1-40 注射所致AD大鼠的药效学评价
1 材料
1.1 实验药物
1.2 实验动物
1.3 试剂
1.4 仪器
2 试验方法
2.1 黄精、枸杞含量测定
2.2 药物制备
2.3 动物造模、分组及给药
2.4二精丸对AD大鼠学习记忆的影响——Morris水迷宫、新物体实验
2.4.1 Morris水迷宫试验
2.4.2 新物体识别实验
2.5 二精丸对AD大鼠海马形态学影响
2.6 二精丸对AD大鼠海马区Aβ1-40及p-tau404蛋白表达水平的影响
2.6.1 免疫组化法测定AD大鼠海马Aβ表达水平
2.6.2 免疫组化法测定AD大鼠海马p-tau表达水平
2.7 二精丸对AD大鼠雌激素水平、海马区ERβ表达的影响
2.7.1 EKISA Kit测定AD大鼠海马雌激素表达水平
2.7.2 免疫组化法测定AD大鼠海马雌激素受体表达水平
2.8 二精丸对AD大鼠脑内DA水平、海马区D1 受体和TH表达的影响
2.8.1 EKISA Kit测定AD大鼠海马DA表达水平
2.8.2 免疫组化法测定AD大鼠海马D1 受体和TH表达水平
2.9 基于海马蛋白质组学二精丸防治AD的机制研究
2.9.1 海马组织全蛋白的提取
2.9.2 海马蛋白浓度的测定
2.9.3 蛋白质的提取、还原、烷基化、酶解及检测
2.9.3.1 Nanol液相色谱条件
2.9.3.2 LTQ Orbitrap Elite质谱条件
2.9.4 数据分析方法
2.10 统计学分析
3 结果
3.1 黄精、枸杞含量测定
3.1.1 黄精含量测定结果
3.1.1.1 黄精水分测定结果
3.1.1.2 黄精葡萄糖测定结果
3.1.2 枸杞含量测定结果
3.1.2.1 枸杞水分测定结果
3.1.2.2 枸杞葡萄糖测定结果
3.1.2.3 枸杞甜菜碱测定结果
3.2 阴道上皮脱落细胞涂片检测结果
3.3二精丸对AD大鼠学习记忆的影响——Morris水迷宫、新物体实验
3.3.1 Morris水迷宫试验结果
3.3.2 新物体识别实验结果
3.4 二精丸对AD大鼠海马神经元的影响
3.4.1 HE染色结果
3.4.2 尼氏染色结果
3.5 二精丸对AD大鼠海马区Aβ1-40及p-tau404蛋白表达水平的影响
3.5.1 海马Aβ表达水平
3.5.2 大鼠海马p-tau404表达水平
3.6 二精丸对AD大鼠雌激素水平、海马区ERβ表达的影响
3.6.1 大鼠血清雌激素含量
3.6.2 大鼠海马雌激素受体表达水平
3.7 二精丸对AD大鼠脑内DA水平、海马区D1 受体和TH表达的影响
3.7.1 EKISAKit测定去卵巢联合D-半乳糖及Aβ1-40 所致AD大鼠海马DA水平
3.7.2 免疫组化法测定去卵巢联合D-半乳糖及Aβ1-40 所致AD大鼠海马D1受体表达水平
3.7.3 免疫组化法测定去卵巢联合D-半乳糖及Aβ1-40 所致AD大鼠海马TH表达水平
3.8 基于海马蛋白质组学二精丸防治AD机制研究的结果
3.8.1 海马蛋白总离子流图
3.8.2 二精丸对AD大鼠海马蛋白组学影响
3.8.3 差异蛋白GO分析结果
3.8.4 String网络分析
3.8.5 KEGG数据库信号通路富集分析结果
4.讨论
5.本章小结
第三部分 二精丸防治AD的物质基础研究
1 材料
1.1 试验细胞
1.2 试验药物
1.3 试验试剂
1.4 仪器
1.5 药物的配制
2 实验方法
2.1 二精丸单体化合物对PC12 细胞存活率的影响
2.2 二精丸单体化合物对Aβ25-35 所致PC12 细胞AD模型存活率的影响
2.3 二精丸单体化合物对Aβ25-35 所致PC12 细胞内Ca2+的影响
3 实验结果
3.1 二精丸单体化合物对PC12 细胞存活率的影响
3.2 二精丸单体化合物对Aβ2535 所致PC12 细胞AD模型存活率的影响
3.3 二精丸单体化合物对Aβ25-35 所致PC12 细胞内Ca2+的影响
4 讨论
5 本章小结
结论
参考文献
个人简介
答辩委员会成员
本文编号：3743676
【文章页数】：95 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
中文摘要
abstract
英文缩略表
引言
第一部分 基于网络药理学二精丸防治AD物质基础与作用机制研究
1 材料
2 方法
2.1 二精丸化合物的获取和筛选
2.2 二精丸活性化合物的靶点预测
2.3 二精丸防治AD靶点的搜集
2.4 通路的富集分析
2.5 构建成分-靶蛋白-信号通路网络
2.6 分子对接验证
3 结果
3.1 二精丸活性成分的筛选
3.2 靶点预测
3.3 基因功能和通路富集分析
3.4 二精丸防治AD“活性成分-靶点-通路”网络构建
3.5 分子对接
4 讨论
5 本章小结
第二部分 二精丸对去卵巢联合D-半乳糖与Aβ1-40 注射所致AD大鼠的药效学评价
1 材料
1.1 实验药物
1.2 实验动物
1.3 试剂
1.4 仪器
2 试验方法
2.1 黄精、枸杞含量测定
2.2 药物制备
2.3 动物造模、分组及给药
2.4二精丸对AD大鼠学习记忆的影响——Morris水迷宫、新物体实验
2.4.1 Morris水迷宫试验
2.4.2 新物体识别实验
2.5 二精丸对AD大鼠海马形态学影响
2.6 二精丸对AD大鼠海马区Aβ1-40及p-tau404蛋白表达水平的影响
2.6.1 免疫组化法测定AD大鼠海马Aβ表达水平
2.6.2 免疫组化法测定AD大鼠海马p-tau表达水平
2.7 二精丸对AD大鼠雌激素水平、海马区ERβ表达的影响
2.7.1 EKISA Kit测定AD大鼠海马雌激素表达水平
2.7.2 免疫组化法测定AD大鼠海马雌激素受体表达水平
2.8 二精丸对AD大鼠脑内DA水平、海马区D1 受体和TH表达的影响
2.8.1 EKISA Kit测定AD大鼠海马DA表达水平
2.8.2 免疫组化法测定AD大鼠海马D1 受体和TH表达水平
2.9 基于海马蛋白质组学二精丸防治AD的机制研究
2.9.1 海马组织全蛋白的提取
2.9.2 海马蛋白浓度的测定
2.9.3 蛋白质的提取、还原、烷基化、酶解及检测
2.9.3.1 Nanol液相色谱条件
2.9.3.2 LTQ Orbitrap Elite质谱条件
2.9.4 数据分析方法
2.10 统计学分析
3 结果
3.1 黄精、枸杞含量测定
3.1.1 黄精含量测定结果
3.1.1.1 黄精水分测定结果
3.1.1.2 黄精葡萄糖测定结果
3.1.2 枸杞含量测定结果
3.1.2.1 枸杞水分测定结果
3.1.2.2 枸杞葡萄糖测定结果
3.1.2.3 枸杞甜菜碱测定结果
3.2 阴道上皮脱落细胞涂片检测结果
3.3二精丸对AD大鼠学习记忆的影响——Morris水迷宫、新物体实验
3.3.1 Morris水迷宫试验结果
3.3.2 新物体识别实验结果
3.4 二精丸对AD大鼠海马神经元的影响
3.4.1 HE染色结果
3.4.2 尼氏染色结果
3.5 二精丸对AD大鼠海马区Aβ1-40及p-tau404蛋白表达水平的影响
3.5.1 海马Aβ表达水平
3.5.2 大鼠海马p-tau404表达水平
3.6 二精丸对AD大鼠雌激素水平、海马区ERβ表达的影响
3.6.1 大鼠血清雌激素含量
3.6.2 大鼠海马雌激素受体表达水平
3.7 二精丸对AD大鼠脑内DA水平、海马区D1 受体和TH表达的影响
3.7.1 EKISAKit测定去卵巢联合D-半乳糖及Aβ1-40 所致AD大鼠海马DA水平
3.7.2 免疫组化法测定去卵巢联合D-半乳糖及Aβ1-40 所致AD大鼠海马D1受体表达水平
3.7.3 免疫组化法测定去卵巢联合D-半乳糖及Aβ1-40 所致AD大鼠海马TH表达水平
3.8 基于海马蛋白质组学二精丸防治AD机制研究的结果
3.8.1 海马蛋白总离子流图
3.8.2 二精丸对AD大鼠海马蛋白组学影响
3.8.3 差异蛋白GO分析结果
3.8.4 String网络分析
3.8.5 KEGG数据库信号通路富集分析结果
4.讨论
5.本章小结
第三部分 二精丸防治AD的物质基础研究
1 材料
1.1 试验细胞
1.2 试验药物
1.3 试验试剂
1.4 仪器
1.5 药物的配制
2 实验方法
2.1 二精丸单体化合物对PC12 细胞存活率的影响
2.2 二精丸单体化合物对Aβ25-35 所致PC12 细胞AD模型存活率的影响
2.3 二精丸单体化合物对Aβ25-35 所致PC12 细胞内Ca2+的影响
3 实验结果
3.1 二精丸单体化合物对PC12 细胞存活率的影响
3.2 二精丸单体化合物对Aβ2535 所致PC12 细胞AD模型存活率的影响
3.3 二精丸单体化合物对Aβ25-35 所致PC12 细胞内Ca2+的影响
4 讨论
5 本章小结
结论
参考文献
个人简介
答辩委员会成员
本文编号：3743676
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/3743676.html
