丹皮酚纳米乳在肠上皮细胞模型中的吸收机制研究
发布时间：2023-02-18 17:06
丹皮酚(paeonol,Pae)是从中药牡丹根皮和徐长卿干燥根或全草中提取的主要活性成分之一,具有广泛的药理活性,然而其水溶性差,生物利用度比较低。前期课题组为了提高Pae的口服生物利用度,将其载进纳米乳给药体系,制备了Pae纳米乳。纳米乳可提高Pae的生物利用度,改善Pae的吸收,然而纳米乳提高Pae吸收的机制尚不明确。口服药物的吸收部位主要在小肠,人结肠腺癌Caco-2细胞在一定的培养条件下,其形态学、标志酶表达、转运及渗透特征均与小肠上皮细胞类似,被用于药物经正常肠上皮细胞吸收机制的研究。小肠上除大量的正常肠上皮细胞外,存在于小肠淋巴滤泡中的M细胞可在肠粘膜上形成通道,亦是纳米微粒经小肠吸收的主要途径。Caco-2细胞与Raji B细胞共培养可形成黏膜滤泡相关上皮(FAE)单层细胞模型,此模型常被用来研究纳米给药系统经M细胞摄取的机制。本课题在既往工作基础上,建立Caco-2细胞和FAE细胞单层模型,探究Pae纳米乳在肠上皮细胞模型上的摄取机制及转运特性,初步阐明纳米乳提高Pae口服吸收机制,以期为Pae口服纳米制剂的处方设计提供依据,为纳米乳给药系统提高难溶性中药活性成分的生物...
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
英文缩略词对照表
前言
第一章 丹皮酚纳米乳在Caco-2细胞和FAE细胞单层模型中的摄取特性研究
1 实验材料
1.1 仪器
1.2 试剂与细胞
1.3 主要溶液的配制
2 实验方法与结果
2.1 Caco-2细胞的培养及形态学观察
2.1.1 Caco-2细胞培养
2.1.2 细胞形态学观察
2.2 毒性检测
2.2.1 丹皮酚纳米乳对Caco-2细胞存活率的影响
2.2.2 丹皮酚纳米乳对Caco-2细胞膜完整性的影响
2.3 Caco-2细胞样品中丹皮酚含量测定方法的建立
2.3.1 色谱条件
2.3.2 样品处理
2.3.3 方法专属性
2.3.4 标准曲线的建立
2.3.5 日内、日间精密度
2.3.6 回收率实验
2.3.7 稳定性实验
2.4 BCA法测Caco-2细胞蛋白含量
2.4.1 Caco-2细胞总蛋白的提取
2.4.2 细胞蛋白含量测定
2.5 丹皮酚纳米乳在Caco-2细胞中的摄取机制研究
2.5.1 时间对Caco-2细胞摄取的影响
2.5.2 浓度对Caco-2细胞摄取的影响
2.5.3 温度对Caco-2细胞摄取的影响
2.5.4 香豆素-6示踪纳米乳在Caco-2细胞上的摄取
2.6 FAE细胞单层模型建立及验证
2.6.1 跨膜电阻值测定
2.6.2 Galectin-9的表达
2.7 FAE细胞样品中丹皮酚含量测定方法的建立
2.7.1 色谱条件
2.7.2 样品处理
2.7.3 方法专属性
2.7.4 标准曲线的建立
2.7.5 日内、日间精密度
2.7.6 回收率实验
2.7.7 稳定性实验
2.8 BCA法测FAE细胞单层模型的蛋白含量
2.8.1 FAE细胞单层模型总蛋白的提取
2.8.2 BCA法测FAE细胞单层模型蛋白浓度
2.9 丹皮酚纳米乳在FAE细胞单层模型中摄取机制的研究
2.9.1 时间对FAE细胞摄取的影响
2.9.2 浓度对FAE细胞摄取的影响
2.9.3 温度对FAE细胞摄取的影响
3 讨论
4 本章小结
第二章 丹皮酚纳米乳在Caco-2细胞单层模型中的转运特性研究
1 实验材料
1.1 仪器
1.2 试剂与细胞
1.3 溶液的配制
2 实验方法与结果
2.1 Caco-2细胞单层模型的建立与验证
2.1.1 跨膜电阻值测定
2.1.2 碱性磷酸酶活性的测定
2.2 丹皮酚纳米乳的双向转运研究
2.3 丹皮酚纳米乳对紧密连接蛋白ZO-1分布的影响
2.4 外排抑制剂对丹皮酚纳米乳转运的影响
2.5 Westernblot法检测紧密连接蛋白和外排蛋白的表达
3 讨论
4 本章小结
全文总结
参考文献
综述
参考文献
个人简历
致谢
本文编号：3745357
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
英文缩略词对照表
前言
第一章 丹皮酚纳米乳在Caco-2细胞和FAE细胞单层模型中的摄取特性研究
1 实验材料
1.1 仪器
1.2 试剂与细胞
1.3 主要溶液的配制
2 实验方法与结果
2.1 Caco-2细胞的培养及形态学观察
2.1.1 Caco-2细胞培养
2.1.2 细胞形态学观察
2.2 毒性检测
2.2.1 丹皮酚纳米乳对Caco-2细胞存活率的影响
2.2.2 丹皮酚纳米乳对Caco-2细胞膜完整性的影响
2.3 Caco-2细胞样品中丹皮酚含量测定方法的建立
2.3.1 色谱条件
2.3.2 样品处理
2.3.3 方法专属性
2.3.4 标准曲线的建立
2.3.5 日内、日间精密度
2.3.6 回收率实验
2.3.7 稳定性实验
2.4 BCA法测Caco-2细胞蛋白含量
2.4.1 Caco-2细胞总蛋白的提取
2.4.2 细胞蛋白含量测定
2.5 丹皮酚纳米乳在Caco-2细胞中的摄取机制研究
2.5.1 时间对Caco-2细胞摄取的影响
2.5.2 浓度对Caco-2细胞摄取的影响
2.5.3 温度对Caco-2细胞摄取的影响
2.5.4 香豆素-6示踪纳米乳在Caco-2细胞上的摄取
2.6 FAE细胞单层模型建立及验证
2.6.1 跨膜电阻值测定
2.6.2 Galectin-9的表达
2.7 FAE细胞样品中丹皮酚含量测定方法的建立
2.7.1 色谱条件
2.7.2 样品处理
2.7.3 方法专属性
2.7.4 标准曲线的建立
2.7.5 日内、日间精密度
2.7.6 回收率实验
2.7.7 稳定性实验
2.8 BCA法测FAE细胞单层模型的蛋白含量
2.8.1 FAE细胞单层模型总蛋白的提取
2.8.2 BCA法测FAE细胞单层模型蛋白浓度
2.9 丹皮酚纳米乳在FAE细胞单层模型中摄取机制的研究
2.9.1 时间对FAE细胞摄取的影响
2.9.2 浓度对FAE细胞摄取的影响
2.9.3 温度对FAE细胞摄取的影响
3 讨论
4 本章小结
第二章 丹皮酚纳米乳在Caco-2细胞单层模型中的转运特性研究
1 实验材料
1.1 仪器
1.2 试剂与细胞
1.3 溶液的配制
2 实验方法与结果
2.1 Caco-2细胞单层模型的建立与验证
2.1.1 跨膜电阻值测定
2.1.2 碱性磷酸酶活性的测定
2.2 丹皮酚纳米乳的双向转运研究
2.3 丹皮酚纳米乳对紧密连接蛋白ZO-1分布的影响
2.4 外排抑制剂对丹皮酚纳米乳转运的影响
2.5 Westernblot法检测紧密连接蛋白和外排蛋白的表达
3 讨论
4 本章小结
全文总结
参考文献
综述
参考文献
个人简历
致谢
本文编号：3745357
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/3745357.html
