基于Akt/mTOR通路的白藜芦醇抗镉诱导神经细胞凋亡机理研究

发布时间：2023-03-05 17:44

　　本研究采用细胞培养、台盼蓝染色、DAPI和TUNEL染色、RNA干扰、Western blot分析等细胞分子生物学技术和方法,以PC12细胞和小鼠原代神经元为实验对象,研究了白藜芦醇对镉诱导神经细胞凋亡的影响,深入探讨白藜芦醇靶向mTOR信号转导抗镉诱导神经细胞凋亡和S6K1在此过程的重要作用。结果如下:1白藜芦醇通过抑制Akt/mTOR通路抗镉诱导神经细胞凋亡PC12细胞和小鼠原代神经元用白藜芦醇(100 μM)预处理1 h后暴露于镉(10和20 μM ) 8 h或24 h。Western blot分析Akt/mTOR通路相关蛋白表达;台盼蓝和DAPI染色分别分析活细胞数量和凋亡细胞表现。结果显示:镉以浓度依赖的方式诱导神经细胞Akt、mTOR、S6K1、S6、4E-BP1磷酸化增加,这被白藜芦醇有力地阻滞;与之一致的,白藜芦醇显著减低镉诱导神经细胞活性下降和凋亡。这些结果表明白藜芦醇抑制Akt/mTOR通路抗镉诱导神经细胞凋亡。2白藜芦醇靶向mTOR信号转导抗镉诱导神经细胞凋亡以PC12细胞和小鼠原代神经元为实验对象,细胞用雷帕霉素(200ng/ml)预处理48h后再用白藜芦醇(1...

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【学位级别】：硕士

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缩略词
摘要
Summary
引言
第一部分 文献综述
    第一章 镉诱导神经毒性损伤及其机制研究进展
        1 镉对神经系统的毒性作用
        2 镉诱导神经损伤发生的机制
            2.1 镉引起氧化应激诱导神经细胞凋亡
            2.2 镉引起胞内DNA损伤诱导神经细胞凋亡
            2.3 镉结合金属硫蛋白诱导神经细胞凋亡
            2.4 镉影响酶的活性诱导神经细胞凋亡
            2.5 镉干扰多条细胞信号诱导神经细胞凋亡
            2.6 镉破坏细胞内钙稳态诱导神经细胞凋亡
        3 镉与神经退行性疾病的关系研究进展
            3.1 镉与阿尔茨海默症(AD)
            3.2 镉与帕金森病(PD)
            3.3 镉与肌萎缩性侧索硬化症(ALS)
        4 小结
        参考文献
    第二章 白藜芦醇活性作用及其对神经的保护效应
        1 白藜芦醇的理化特性
        2 白藜芦醇的植物来源及含量
        3 白藜芦醇的活性作用
            3.1 白藜芦醇的抗癌活性
            3.2 白藜芦醇的抗炎活性
            3.3 白藜芦醇的抗氧化活性
        4 白藜芦醇对神经的保护效应
        5 白藜芦醇的神经保护机制
            5.1 白藜芦醇通过调节炎症反应发挥神经保护效应
            5.2 白藜芦醇通过调节氧化应激发挥神经保护效应
            5.3 白藜芦醇通过抑制酶的活性发挥神经保护效应
        6 白藜芦醇与神经退行性疾病的关系
            6.1 白藜芦醇与帕金森病(PD)
            6.2 白藜芦醇与阿尔茨海默症(AD)
            6.3 白藜芦醇与肌萎缩性侧索硬化症(ALS)
        7 小结
        参考文献
    第三章 Akt/mTOR通路及其与神经细胞凋亡的关系
        1 mTOR通路
            1.1 mTOR的分子结构
            1.2 mTOR的上游和下游分子
            1.3 Akt/mTOR通路
        2 Akt/mTOR通路与神经细胞凋亡的关系
        3 Akt/mTOR通路与神经变性疾病的关系
            3.1 Akt/mTOR与PD
            3.2 Akt/mTOR与AD
            3.3 Akt/mTOR与ALS
        4 小结
        参考文献
第二部分 实验研究
    第四章 白藜芦醇抑制Akt/mTOR通路抗镉诱导神经细胞凋亡研究
        1 材料与方法
            1.1 主要药品与试剂
            1.2 实验动物
            1.3 细胞培养及原代大脑皮质神经元分离和培养
            1.4 台盼蓝染色计数活细胞数量
            1.5 DAPI染色分析细胞凋亡
            1.6 蛋白免疫印迹(Western blot)分析
            1.7 实验数据的处理与分析
        2 实验结果
            2.1 白藜芦醇抑制镉激活Akt、mTOR及其介导的S6K1和4E-BP1通路
            2.2 白藜芦醇抑制镉诱导神经细胞活性下降和凋亡
        3 讨论
        参考文献
    第五章 白藜芦醇靶向mTOR信号转导抗镉诱导神经细胞凋亡研究
        1 材料与方法
            1.1 主要药品与试剂
            1.2 实验动物
            1.3 细胞培养及原代大脑皮质神经元分离和培养
            1.4 台盼蓝染色计数活细胞数量
            1.5 TUNEL染色分析细胞凋亡
            1.6 蛋白免疫印迹(Western Blot)分析
            1.7 实验数据的处理与分析
        2 实验结果
            2.1 白藜芦醇靶向抑制镉诱导神经细胞Akt/mTOR信号通路
            2.2 雷帕霉素强化白藜芦醇抑制镉诱导神经细胞Caspase-3激活和凋亡
        3 讨论
        参考文献
    第六章 S6K1在白藜芦醇抗镉诱导神经细胞凋亡中作用研究
        1 材料与方法
            1.1 主要药品与试剂
            1.2 细胞培养
            1.3 重组腺病毒的构建和细胞感染
            1.4 台盼蓝染色计数活细胞数量
            1.5 TUNEL染色分析细胞凋亡
            1.6 蛋白免疫印迹(Western Blot)分析
            1.7 实验数据的处理与分析
        2 实验结果
            2.1 持续激活S6K1对白藜芦醇抑制镉诱导神经细胞Akt、S6K1/S6和Caspase-3表达和细胞活性降低影响
            2.2 持续激活S6K1对白藜芦醇抑制镉诱导神经细胞凋亡的影响
        3 讨论
        参考文献
第三部分 全文结论
附1
致谢



本文编号：3756647