基于EZH2/NF-κB信号通路探讨阳和汤对人三阴性乳腺癌细胞增殖的影响

发布时间：2023-03-26 16:19

　　目的:通过阳和汤大鼠含药血清干预人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,探究阳和汤对三阴性乳腺癌细胞增殖等的影响,揭示其对三阴性乳腺癌细胞增殖和细胞内EZH2/NF-κB信号通路的作用机制。为阳和汤的体内实验和临床应用提供理论基础。方法:按照阳和汤的药物组成及煎制方法,将药物煎煮制成0.7g生药量/mL的药液。雌性SD大鼠合计30只,按照随机数表法将其随机分为5组,分别是空白对照组,阳和汤低、中、高剂量组,阳性药物组,每组共计6只。空白对照组大鼠灌胃蒸馏水;阳和汤低、中、高剂量各组大鼠分别按为4.5g/kg、9g/kg、18g/kg(相当于临床用量5倍、10倍、20倍)的剂量灌胃给药,同时,空白对照组和阳和汤低、中、高剂量组各组大鼠按15mg/kg的剂量尾静脉注射5-FU配置液。阳性药物组大鼠按15mg/kg(相当于临床人体用量)的剂量尾静脉注射5-FU注射液,同时,灌胃蒸馏水。各组大鼠的灌胃体积按10mL/kg计算。连续不间断给药3d,采用腹主动脉取血的方法取血样,取得的血样进行离心,分离,除菌,灭活,即得所需含药血清。实验时,各组按10%含药血清和90%L-15培养基(体积)均匀混...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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缩略语
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英文摘要
前言
1.材料
    1.1 实验细胞
    1.2 实验动物
    1.3 主要药物
    1.4 主要试剂
    1.5 主要仪器
    1.6 主要试剂的配制
2.方法
    2.1 技术路线图
    2.2 药物制备
        2.2.1 阳和汤的制备
        2.2.2 阳和汤含药血清的制备
    2.3 细胞培养与传代
        2.3.1 细胞的培养
        2.3.2 细胞的传代
        2.3.3 细胞的计数
    2.4 细胞的冻存与复苏
        2.4.1 细胞的复苏
        2.4.2 细胞的冻存
    2.5 细胞增殖实验
        2.5.1 实验分组
        2.5.2 实验步骤与给药
    2.6 细胞周期实验
    2.7 细胞凋亡实验
    2.8 细胞外目的蛋白的检测
        2.8.1 含药血清干预细胞
        2.8.2 蛋白的提取
        2.8.3 ELISA法检测蛋白
    2.9 细胞内目的蛋白的检测
        2.9.1 含药血清干预细胞
        2.9.2 细胞总蛋白的提取
        2.9.3 细胞核蛋白的提取
        2.9.4 蛋白浓度的测定
        2.9.5 蛋白上样液的处理
        2.9.6 WesternBlot检测蛋白
    2.10 统计学分析
3.结果
    3.1 阳和汤对MDA-MB-231细胞增殖的影响
    3.2 阳和汤对MDA-MB-231细胞周期分布的影响
    3.3 阳和汤对MDA-MB-231细胞凋亡的影响
    3.4 阳和汤对MDA-MB-231细胞TNF-α、IL-6、IL-8分泌的影响
    3.5 阳和汤对MDA-MB-231细胞TNF-α、IL-6、IL-8表达的影响
    3.6 阳和汤对MDA-MB-231细胞EZH2、NF-κB(p65)表达的影响
4.讨论
    4.1 阳和汤抗肿瘤作用
    4.2 阳和汤抗肿瘤作用分析
    4.3 三阴性乳腺癌的研究进展
        4.3.1 EZH2、NF-κB的作用
        4.3.2 EZH2和NF-κB促进乳腺癌细胞自分泌炎症细胞因子的机制
        4.3.3 IL-6和IL-8信号通路与肿瘤生长的关系
    4.4 实验方法的讨论
        4.4.1 含药血清的制备
        4.4.2 阳性药物的选择
        4.4.3 细胞增殖实验方法的选择
        4.4.4 细胞核蛋白的检测
    4.5 实验结果的探讨
        4.5.1 阳和汤对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡和周期分布的影响
        4.5.2 阳和汤对MDA-MB-231细胞TNF-α、IL-6、IL-8胞外分泌及胞内表达的影响
        4.5.3 阳和汤对MDA-MB-231细胞核内EZH2、NF-κB(p65)的影响
    4.6 实验结果的思考与展望
5.结论
参考文献
综述 阳和汤抗癌作用的研究进展
    1 阳虚则痰饮不化
    2 痰凝则气血不行
    3 温阳则正气复,解凝则痰饮化
    4 阳和汤抗肿瘤作用的研究
        4.1 阳和汤抗乳腺癌的研究
        4.2 阳和汤抗肺癌的研究
        4.3 阳和汤抗肿瘤骨转移的研究
        4.4 阳和汤对肿瘤手术后的研究
        4.5 阳和汤联合放、化疗抗肿瘤的研究
        4.6 阳和汤抗其他肿瘤的研究
    5 结语
    参考文献
致谢
攻读硕士学位期间公开发表的学术论文及获得奖项



本文编号：3771287