中药对沙门氏菌β-内酰胺类药物耐药性影响的研究

发布时间：2023-04-03 00:37

　　沙门氏菌分布广泛,大多数可在人和动物体内寄生,引发人畜患有伤寒、腹泻、胃肠炎和败血症等疾病。作为无论是养殖业还是医药临床使用最广泛的—β-内酰胺抗菌药物,其原本治疗效果非常好,但由于人类长期大量不合理应用该类抗菌药物,导致由其引发的耐药性问题日益严峻,因此如何降低或消除细菌耐药性成为人类面临的严峻考验。本研究选取从贵州省贵阳市、六盘水市、毕节市等8个地区的规模化养殖场中分离鉴定得到的110株猪源沙门氏菌,采用微量肉汤稀释法,参照参照CLSI(美国临床试验室标准化协会)标准测定其对常用的β-内酰胺类抗菌药物敏感性,并通过PCR扩增方法检测主要耐药基因携带情况。考察了部分中药对耐药沙门氏菌的抑制作用和质粒消除效果,并应用联合抑菌试验方法考察了中药与抗菌药物联合后对耐药沙门氏菌的抑制效果。结果表明,试验菌株对β-内酰胺类抗生素耐药性十分严重,其中对头孢他啶的耐药率为100%,其次是氨苄西林和阿莫西林分别是79.09%和75.54%,耐药率最低的是头孢噻呋为40.91%,头孢氨苄耐药率为44.55%。110株分离鉴定的沙门氏菌TEM基因检出率为85%,OXA为75%,CTX-M为46%,含两种...

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
前言
    1 沙门氏菌的危害及耐药性研究
        1.1 沙门氏菌概述
        1.2 沙门氏菌的危害
        1.3 沙门氏菌耐药现状
    2 β-内酰胺类抗菌药物相关研究
        2.1 β-内酰胺类抗菌药物简介
        2.2 β-内酰胺类药物抗菌机制
        2.3 沙门氏菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药机理
    3 中药对细菌耐药质粒消除研究
        3.1 耐药质粒研究概况
        3.2 中药消除耐药质粒研究现状
        3.3 中药消除耐药质粒机制
        3.4 中药消除耐药质粒特点
    4 联合抑菌作用相关研究
    5 本研究的目的与意义
第一章 沙门氏菌对β-内酰胺类药物耐药性测定
    1 试验材料
        1.1 主要试验药品与试剂
        1.2 培养基
        1.3 试验仪器
        1.4 菌株
    2 试验方法
        2.1 沙门氏菌活化与纯化
        2.2 沙门氏菌鉴定
            2.2.1 分子生物学鉴定
            2.2.2 革兰氏染色
            2.2.3 生化试验
        2.3 沙门氏菌药物敏感性试验
            2.3.1 抗菌药物储备液制备
            2.3.2 抗菌药物工作液制备
            2.3.3 药敏试验使用抗菌药物浓度范围要求
            2.3.4 菌液的制备
            2.3.5 MIC值测定
            2.3.6 结果判断标准
    3 试验结果
        3.1 沙门氏菌鉴定结果
            3.1.1 形态学鉴定结果
            3.1.2 分子生物学鉴定结果
        3.2 药物敏感性试验结果
        3.3 半数抑菌浓度(MIC50)和有效抑菌浓度(MIC90)
        3.4 多重耐药统计结果
    4 讨论
第二章 沙门氏菌β-内酰胺类耐药基因的检测
    1 试验材料
        1.1 试验菌株
        1.2 试验药品与试剂
        1.3 主要试验仪器与设备
    2 试验方法
        2.1 引物设计与合成
        2.2 菌株的活化
        2.3 沙门氏菌DNA提取
        2.4 PCR反应条件建立
        2.5 耐药基因的凝胶电泳检测
        2.6 产物的回收、克隆及测序
    3 结果
    4 讨论
第三章 中药对沙门氏菌β-内酰胺类药物耐药性影响的研究
    1 试验材料
        1.1 供试菌株
        1.2 试验药品
        1.3 试验试剂
        1.4 试验仪器
    2 试验方法
        2.1 各种培养基的制备
        2.2 菌液的制备
        2.3 中药有效成分的提取
        2.4 最小抑菌浓度的测定
            2.4.1 中药培养液的制备
            2.4.2 细菌的接种和培养
            2.4.3 结果判定
        2.5 细菌耐药性的消除
            2.5.1 中药作用耐药细菌
            2.5.2 含药物平板的制备
            2.5.3 细菌的影印培养
            2.5.4 耐药性消除菌落的筛选
        2.6 消除子耐药性检测
        2.7 耐药性消除前后菌株质粒的提取
        2.8 传代观察不同菌株耐药消除后MIC
    3 结果与分析
        3.1 中药提取物对沙门氏菌最小抑菌浓度的测定
        3.2 影印培养后耐药性消除试验结果
        3.3 耐药性消除前后菌株质粒图谱变化情况
        3.4 五种中药作用后耐药性消除子表型
        3.5 耐药性消除子传代后耐药水平的变化
    4 讨论
        4.1 中药的抑菌作用效果
        4.2 不同中药对细菌耐药质粒消除
        4.3 细菌耐药性消除前后质粒图普和耐药表型变化
        4.4 耐药性消除子MIC测定结果分析
第四章 联合抑菌作用研究
    1 试验材料
        1.1 试验药品与试剂
        1.2 试验仪器
        1.3 试验样本
    2 试验方法
        2.1 培养基的制备
        2.2 菌液的制备
        2.3 中药有效成分的提取
        2.4 最小抑菌浓度的测定
            2.4.1 中药提取物最小抑菌浓度(MIC)的测定
            2.4.2 头孢他啶最小抑菌浓度(MIC)的测定
            2.4.3 中西药物联合对耐药菌作用的测定
            2.4.4 联合药敏试验结果判定
    3 结果与分析
        3.1 中药提取物和抗菌药物单用MIC测定结果
        3.2 中药提取物与抗菌药联合作用抑菌结果
    4 讨论
结论
致谢
参考文献
缩略词表
附录



本文编号：3780287