自噬在异丙肾上腺素诱导的H9c2心肌细胞肥大中的作用及青藤碱的干预作用

发布时间：2023-04-11 06:03

　　目的:观察异丙肾上腺素诱导的H9c2心肌细胞肥大中自噬的发生情况,并研究探讨青藤碱对Iso致心肌肥大的干预作用。方法:(1)MTT法检测Sin对H9c2心肌细胞存活率的影响,确定其安全浓度范围。(2)采用结晶紫染色,在倒置显微镜下观察细胞形态,用image-pro plus 6.0软件检测各组心肌细胞表面积的大小。(3)BCA法测定各组心肌细胞总蛋白的含量。(4)酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组心肌细胞外液中IL-6的浓度。(5)用mCherry-GFP-LC3B双荧光体系融合蛋白检测自噬。(6)Western blot检测ANP、LC3B(LC3Ⅰ、LC3Ⅱ)、Phospho-Akt(Thr308)蛋白的表达。结果:(1)Sin对H9c2心肌细胞的安全范围浓度在300μmol/L之内。(2)模型组中H9c2心肌细胞的表面积明显高于正常组(***P<0.001),且细胞形态变得宽大,Sin给药组的心肌细胞表面积与模型组比较有所减小(均###P<0.001)。(3)模型组的总蛋白含量相较于正常组显著增加(*P<0.05),给药组的总蛋白含量与模型组比较有所减少。...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

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致谢
摘要
ABSTRACT
缩略词简表
第一章 绪论
    1.1 心肌肥厚类型
    1.2 自噬与心肌肥厚的关系
    1.3 自噬的类型及基本过程
    1.4 心肌肥厚中自噬相关机制
        1.4.1 mTOR抑制途径
        1.4.2 直接调控自噬途径
        1.4.3 自噬—溶酶体途径
    1.5 心肌肥厚的治疗药物
        1.5.1 血管紧张素转换酶抑制剂
        1.5.2 血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ阻断剂
        1.5.3 钙拮抗剂
        1.5.4 利尿剂
        1.5.5 他汀类药物
        1.5.6 β受体阻断剂
        1.5.7 环加氧酶抑制剂
        1.5.8 中药类药物
    1.6 课题设计及研究意义
    1.7 本章小结
第二章 自噬在异丙肾上腺素诱导的H9c2心肌细胞肥大中的作用及青藤碱的干预影响
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 细胞株
        2.2.2 试剂材料
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞培养
        2.3.2 不同浓度青藤碱对H9c2心肌细胞存活率的影响
        2.3.3 各组心肌细胞表面积的测定
        2.3.4 BCA法测各组细胞总蛋白含量
        2.3.5 ELISA 法检测各组心肌细胞外液 IL-6 含量
        2.3.6 mCherry-GFP-LC3B 双荧光体系融合蛋白检测自噬
        2.3.7 Western blot 检测 ANP、LC3B(LC3Ⅰ、LC3Ⅱ)、Phospho-Akt(Thr308)蛋白表达情况
        2.3.8 统计处理
    2.4 实验结果
        2.4.1 不同浓度青藤碱对H9c2心肌细胞存活率的影响
        2.4.2 各组心肌细胞表面积的测定
        2.4.3 BCA法测各组细胞总蛋白含量
        2.4.4 ELISA 法检测各组心肌细胞外液 IL-6 含量
        2.4.5 mCherry-GFP-LC3B 双荧光体系融合蛋白检测自噬
        2.4.6 Western blot 检测 ANP、LC3B(LC3Ⅰ、LC3Ⅱ)、Phospho-Akt(Thr308)蛋白表达情况
    2.5 讨论
        2.5.1 异丙肾上腺素在心肌肥厚发展中的作用
        2.5.2 自噬与心肌肥厚的关系
        2.5.3 青藤碱对心肌肥厚的防治作用
        2.5.4 青藤碱防治心肌肥厚作用中IL-6、Akt的变化关系
    2.6 本章小结
第三章 总结与展望
    3.1 总结
    3.2 创新点
    3.3 展望
参考文献
硕士期间发表的论文和专利



本文编号：3789448