苏木提取物对PI3K/Akt/mTOR信号通路介导的细胞自噬的影响

发布时间：2023-04-11 21:56

　　目的:通过构建高脂饮食诱导的ApoE^-/-小鼠AS模型及ox-LDL诱导的HUVECs损伤模型,观察苏木提取物对PI3K/Akt/mTOR信号通路及其介导的自噬的影响,进一步探讨苏木提取物调控自噬的作用机制。方法:实验一:40只ApoE^-/-小鼠随机分为空白组、模型组、苏木提取物组和阿托伐他汀组,除空白组外,其余三组通过高脂饲料喂养8周的方法构建AS小鼠模型。从模型复制的第1日起,各组给予相应的药物干预,其中空白组和模型组给予等体积的羧甲基纤维素钠混悬液(0.1ml/10g)灌胃治疗,苏木提取物组和阿托伐他汀组分别给予苏木提取物混悬液(0.1ml/10g)和阿托伐他汀混悬液(0.1ml/10g)灌胃治疗,均每日一次。观察各组小鼠的一般状态及体重变化;HE染色检测小鼠主动脉病理形态;油红O染色检测小鼠主动脉窦脂质水平;TUNEL法检测内皮细胞的凋亡水平;ELISA法检测血脂(TC、TG、LDL、HDL)和炎性因子(IL-6、IL-8)的含量;免疫组化法检测动脉组织中PI3K、Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR蛋白的表达水平;Wester...

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【学位级别】：博士

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缩略语表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文献综述
    1 自噬的研究进展
        1.1 现代医学对自噬的认识及研究进展
        1.2 PI3K/Akt/m TOR信 号通路与自噬的关系
        1.3 中医学对自噬的认识及研究进展
    2 PI3K/Akt/m TOR信 号通路的研究进展
        2.1 PI3K/Akt/m TOR信 号通路的概述
        2.2 PI3K/Akt/m TOR信 号通路与动脉粥样硬化的关系
    3 苏木的研究进展
实验一 苏木提取物对Apo E-/ -小 鼠主动脉自噬的影响
    材料与方法
        1 实验材料
            1.1 实验动物
            1.2 实验药物
            1.3 实验试剂
            1.4 实验仪器
        2 实验方法
            2.1 实验动物分组
            2.2 动物模型的制备与给药
            2.3 标本取材
            2.4 HE染 色观察主动脉病理形态
            2.5 油红O染 色观察主动脉窦脂质水平
            2.6 TUNEL检 测主动脉内皮细胞凋亡水平
            2.7 ELISA检 测TC、TG、LDL、HDL、IL-6 和IL-8 含量
            2.8 免疫组化法检测PI3K、Akt、p-Akt、m TOR和p-m TOR蛋 白表达
            2.9 Western blot检 测PI3K、Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR、Beclin-1、LC3I、LC3II和p62蛋 白表达
            2.10 Realtime PCR检 测PI3K、Akt和m TOR m RNA表 达
            2.11 统计分析处理
    3 结果
        3.1 小鼠的一般状态及体重的变化
        3.2 对小鼠主动脉病理形态和斑块的影响
        3.3 对小鼠主动脉窦脂质水平的影响
        3.4 对小鼠血脂及炎性因子的影响
        3.5 对小鼠主动脉内皮细胞凋亡水平的影响
        3.6 对PI3K/Akt/m TOR信 号通路的影响
        3.7 对小鼠自噬蛋白的影响
实验二 苏木提取物对人脐静脉内皮细胞自噬的影响
    材料与方法
        1 实验材料
            1.1 实验细胞
            1.2 实验药物
            1.3 实验试剂
            1.4 实验仪器
        2 实验方法
            2.1 细胞培养
            2.2 MTT法 检测细胞活力
            2.3 流式细胞术检测细胞凋亡
            2.4 倒置相差显微镜观察细胞形态
            2.5 透射电子显微镜观察细胞自噬流水平
            2.6 ELISA检 测SOD、MDA、IL-6、IL-8、NO和e NOS含 量
            2.7 Western blot检 测Bax、Caspase-3、Bcl-2、ICAM-1、VCAM-1、        Beclin-1、LC3I、LC3II、p62、PI3K、Akt、p-Akt、m TOR和p-m TOR蛋白 表达
            2.8 统计分析处理
    3 结果
        3.1 对细胞活力及凋亡的影响
        3.2 对凋亡蛋白的影响
        3.3 对细胞形态及自噬流的影响
        3.4 对细胞功能的影响
        3.5 对氧化应激反应的影响
        3.6 对炎性因子及黏附因子的影响
        3.7 对PI3K/Akt/m TOR信 号通路的影响
        3.8 对自噬蛋白的影响
讨论
    1 关于动物模型的选择
    2 对细胞活力及凋亡的影响
    3 对细胞形态及功能的影响
    4 对脂质蓄积及斑块形成的影响
    5 对炎性因子、黏附因子及氧化应激反应的影响
    6 对PI3K/Akt/m TOR信 号通路的影响
    7 对自噬及自噬流的影响
    8 创新点
    9 问题与展望
结论
参考文献
致谢
攻读博士期间发表的论文
个人简历



本文编号：3789824