基于Wnt/β-catenin信号通路探讨黄芩苷在心肌细胞氧化损伤中的保护机制

发布时间：2023-04-28 14:51

　　目的:本课题旨在通过观察黄芩苷对H2O2诱导的氧化受损心肌细胞中Wnt/β-catenin信号通路的调控作用及其心肌细胞保护作用,探讨黄芩苷改善心肌细胞氧化损伤的分子机制。方法:先通过TOPFLASH/Renilla双荧光素酶报告基因技术,检测黄芩苷对β-catenin/TCF转录活性的影响,明确黄芩苷对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。然后,用H2O2刺激H9c2大鼠心脏细胞,诱导心肌氧化损伤细胞模型,分别采用MTT法、Western Blot法检测不同浓度的黄芩苷对H202刺激H9c2细胞诱导的心肌氧化损伤细胞模型的细胞活力、细胞凋亡相关指标和Wnt/β-catenin信号通路转录活性相关蛋白表达的影响,初步评价黄芩苷对心肌氧化损伤细胞模型中Wnt/β-catenin信号通路的调控作用及其心肌细胞保护作用。进而,通过siRNA沉默H9c2细胞中β-catenin的表达,观察β-catenin表达下调对H9c2细胞氧化损伤的影响,并探讨β-catenin在H9c2细胞氧化损伤中的作用。最后,用LiCl(β-catenin的稳定剂)干预H9c2细胞,观察黄芩苷对LiCl干预...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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Abstract
图文摘要
Graphical Abstract
引言
实验材料与方法
    1 实验动物及细胞株
    2 中药单体及配制
    3 质粒
    4 试剂与耗材
        4.1 抗体
        4.2 试剂
        4.3 耗材
    5 仪器与设备
    6 实验方法
        6.1 细胞株的培养方法
        6.2 SD乳鼠原代心肌细胞的获取与培养
        6.3 细胞计数与铺盘
        6.4 心肌氧化损伤细胞模型的建立及黄芩苷干预
        6.5 细胞转染
        6.6 TOPFLASH/Renilla双荧光素酶报告基因检测
        6.7 蛋白提取与浓度测定
        6.8 蛋白印迹
        6.9 MTT
    7 统计学分析
实验结果
    1 黄芩苷对Wnt/β-catenin信号通路活化程度的影响
        1.1 黄芩苷对Wnt3a活化的β-catenin/TCF转录活性的影响
        1.2 黄芩苷对Wnt/β-catenin信号通路激活剂活化的β-catenin/TCF转录活性的影响
        小结
    2 黄芩苷对H9c2细胞氧化损伤的保护作用及机制
        2.1 黄芩苷对H₂O₂刺激H9c2细胞诱导的心肌氧化损伤细胞模型的细胞活力的影响
        2.2 黄芩苷对H₂O₂刺激H9c2细胞诱导的心肌氧化损伤细胞模型中凋亡相关指标的影响
        2.3 黄芩苷对H₂O₂刺激H9c2细胞诱导的心肌氧化损伤细胞模型的Wnt/β-catenin信号通路的影响
        2.4 黄芩苷改善心肌细胞氧化损伤的机制探讨
        小结
    3 黄芩苷对原代心肌细胞氧化损伤的保护作用及机制
        3.1 黄芩苷对H₂O₂刺激原代心肌细胞诱导的心肌氧化损伤细胞模型的细胞活力的影响
        3.2 黄芩苷对H₂O₂刺激原代心肌细胞诱导的心肌氧化损伤细胞模型的凋亡相关指标的影响
        3.3 黄芩苷对H₂O₂刺激原代心肌细胞诱导的心肌氧化损伤细胞模型的核内β-catenin表达的影响
        小结
讨论
结论
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3804012