CP-25对C57BL/6小鼠抗原诱导干燥综合征模型B淋巴细胞功能及CXCL13-CXCR5-MAPK信号通路影响
发布时间：2023-05-07 22:42
干燥综合征(Sjogren,s syndrome,SS)是一种以泪腺,唾液腺等外分泌腺为受累器官的一种自身免疫性疾病。目前临床上尚无治疗干燥综合征的理想药物,多采取替代治疗如人工泪液、毛果芸香碱等药物缓解症状,以及免疫治疗等治疗方法,无法从根本上解决病人的痛苦,也无法有效的制止疾病的恶化。因此临床上一种低毒高效的可以治愈SS的药物有着迫切的需求。CP-25(苯磺酰芍药苷,Phenylsulfonylpaeoniflorin,代号CP-25)是芍药苷(Paeoniflorin,Pae)经酯化修饰得到的单体成分。本课题组前期研究结果表明CP-25对原发性干燥综合征小鼠模型疗效显著,但CP-25对其作用机制尚不清楚。基于以往的研究,本研究成功建立了C57BL/6小鼠抗原诱导干燥综合征动物模型,采用CP-25的有效剂量给药,观察颌下腺组织的病理结构改变,颌下腺中CXCL13、CXCR5的表达,探讨颌下腺病理改变与CXCL13-CXCR5的关系;利用人颌下腺上皮细胞株(Huamn salivary gland,HSG)与B淋巴细胞株进行共培养,采用transwell,免疫共沉淀和Western ...
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文缩略词对照表(ABBREVIATION)
摘要
ABSTRACT
1 前言
2 实验材料
2.1 实验动物与实验细胞
2.2 药物和试剂
2.3 试剂配方
2.4 仪器设备
3 实验方法
3.1 抗原诱导干燥综合征小鼠(SS)模型的建立与分组
3.2 动物实验检测指标
3.2.1 全身情况检查
3.2.2 脾、颌下腺及胸腺指数
3.2.3 唾液量的检测
3.2.4 颌下腺组织H&E病理染色
3.2.5 CCK8法检测SS小鼠T、B淋巴细胞增殖
3.2.6 流式细胞术检测SS小鼠外周血以及颌下腺中B淋巴细胞亚群比例
3.2.7 免疫组化法检测小鼠颌下腺组织CXCL13-CXCR5的表达
3.2.8 Western blot法检测颌下腺p-ERK、p-P38、GRK2的表达
3.3 CP-25对HSG细胞与B淋巴细胞株共培养后的细胞功能的影响
3.3.1 细胞复苏、传代及冻存
3.3.2 细胞共培养
3.3.3 Q-PCR检测HSG细胞CXCL13的表达
3.3.4 细胞增殖、迁移实验
3.3.5 Western blot法检测B淋巴细胞CXCR5、p-ERK、p-P38、GRK2的表达
3.4 统计分析
4 结果
4.1 SS小鼠全身情况变化
4.2 CP-25对SS小鼠体重的影响
4.3 CP-25对SS小鼠唾液量的影响
4.4 CP-25对SS小鼠器官指数的影响
4.5 CP-25对SS小鼠颌下腺病理的影响
4.6 CP-25对SS小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响
4.7 CP-25对SS小鼠外周血和颌下腺B淋巴细胞亚群的影响
4.8 各组小鼠颌下腺CD-19、CXCR5、CXCL13的表达情况
4.9 CP-25对SS小鼠颌下腺p-ERK、p-P38、GRK2的表达情况
4.10 CP-25对IFN-α处理后HSG增殖和CXCL13表达的影响
4.11 HSG与B淋巴细胞共培养后,对 B淋巴细胞增殖、迁移功能的影响
4.12 CP-25对B淋巴细胞CXCR5、p-ERK1/2、p-P38、GRK2表达的影响
5 讨论
5.1 成功构建C57BL/6小鼠抗原诱导干燥综合征模型
5.2 CP-25对C57BL/6小鼠抗原诱导干燥综合征模型的治疗作用与其调节B淋巴细胞亚群密切相关
5.3 CXCL13-CXCR5-MAPK信号通路在B淋巴细胞增殖迁移中发挥重要作用
5.4 CP-25通过调节GRK2的膜转位,发挥治疗作用
5.5 本实验的不足以及下一步计划
6 结论
6.1 CP-25对抗原诱导干燥综合症模型C57BL/6小鼠具有治疗作用
6.2 CP-25的治疗作用可能与其调节B细胞亚群比例及增殖迁移有关
6.3 CP-25可以调节共培养后的B淋巴细胞GRK2在胞膜的分布
7 参考文献
8 附录
9 致谢
综述 B淋巴细胞亚群在干燥综合征中的作用
参考文献
本文编号：3811468
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文缩略词对照表(ABBREVIATION)
摘要
ABSTRACT
1 前言
2 实验材料
2.1 实验动物与实验细胞
2.2 药物和试剂
2.3 试剂配方
2.4 仪器设备
3 实验方法
3.1 抗原诱导干燥综合征小鼠(SS)模型的建立与分组
3.2 动物实验检测指标
3.2.1 全身情况检查
3.2.2 脾、颌下腺及胸腺指数
3.2.3 唾液量的检测
3.2.4 颌下腺组织H&E病理染色
3.2.5 CCK8法检测SS小鼠T、B淋巴细胞增殖
3.2.6 流式细胞术检测SS小鼠外周血以及颌下腺中B淋巴细胞亚群比例
3.2.7 免疫组化法检测小鼠颌下腺组织CXCL13-CXCR5的表达
3.2.8 Western blot法检测颌下腺p-ERK、p-P38、GRK2的表达
3.3 CP-25对HSG细胞与B淋巴细胞株共培养后的细胞功能的影响
3.3.1 细胞复苏、传代及冻存
3.3.2 细胞共培养
3.3.3 Q-PCR检测HSG细胞CXCL13的表达
3.3.4 细胞增殖、迁移实验
3.3.5 Western blot法检测B淋巴细胞CXCR5、p-ERK、p-P38、GRK2的表达
3.4 统计分析
4 结果
4.1 SS小鼠全身情况变化
4.2 CP-25对SS小鼠体重的影响
4.3 CP-25对SS小鼠唾液量的影响
4.4 CP-25对SS小鼠器官指数的影响
4.5 CP-25对SS小鼠颌下腺病理的影响
4.6 CP-25对SS小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响
4.7 CP-25对SS小鼠外周血和颌下腺B淋巴细胞亚群的影响
4.8 各组小鼠颌下腺CD-19、CXCR5、CXCL13的表达情况
4.9 CP-25对SS小鼠颌下腺p-ERK、p-P38、GRK2的表达情况
4.10 CP-25对IFN-α处理后HSG增殖和CXCL13表达的影响
4.11 HSG与B淋巴细胞共培养后,对 B淋巴细胞增殖、迁移功能的影响
4.12 CP-25对B淋巴细胞CXCR5、p-ERK1/2、p-P38、GRK2表达的影响
5 讨论
5.1 成功构建C57BL/6小鼠抗原诱导干燥综合征模型
5.2 CP-25对C57BL/6小鼠抗原诱导干燥综合征模型的治疗作用与其调节B淋巴细胞亚群密切相关
5.3 CXCL13-CXCR5-MAPK信号通路在B淋巴细胞增殖迁移中发挥重要作用
5.4 CP-25通过调节GRK2的膜转位,发挥治疗作用
5.5 本实验的不足以及下一步计划
6 结论
6.1 CP-25对抗原诱导干燥综合症模型C57BL/6小鼠具有治疗作用
6.2 CP-25的治疗作用可能与其调节B细胞亚群比例及增殖迁移有关
6.3 CP-25可以调节共培养后的B淋巴细胞GRK2在胞膜的分布
7 参考文献
8 附录
9 致谢
综述 B淋巴细胞亚群在干燥综合征中的作用
参考文献
本文编号：3811468
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/3811468.html
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