细胞膜固定化机理和注射用益气复脉（冻干）对心脏毒性保护作用初探

发布时间：2023-05-10 20:42

　　目的:1、探究细胞膜固定在多孔羟基硅球上的机理,促进用于色谱方法的仿生载体的制备。2、通过建立细胞和动物模型探讨注射用益气复脉(冻干)(yi qi fu mai powder injection,YQFM)对阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导的心脏毒性的保护作用。方法:以兔红细胞为原材料,使用低渗透膨胀法获取细胞膜。在减压震荡条件下制备兔红细胞膜修饰载体的固定相。根据载体类型、多孔硅球的孔径、酶活性及细胞膜固定化动力学进行了批处理固定化研究。利用高效液相色谱考察不同孔径的多孔硅球载体色谱柱与阳性药物的结合能力和稳定性。通过共聚焦显微镜进一步观察制备的多孔和无孔硅球上通过荧光标记的细胞膜的分布情况。YQFM对DOX诱导的心脏毒性的保护作用研究是先建立DOX诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)损伤模型:提前2 h给予不同浓度的YQFM,再与DOX共同培养48 h。CCK-8测定细胞存活率;再分别检测乳酸脱氢酶(LDH)、ATP含量;Hoechst染色法检测DOX损伤H9c2细胞的凋亡情况;JC-1探针法检测H9c2细胞的线粒体膜电位;Western-blot法检测caspase-3的表...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、细胞膜固定化机理
    1.1 材料与仪器
        1.1.1 实验试剂
        1.1.2 实验仪器
    1.2 实验方法
        1.2.1 细胞膜的提取
        1.2.2 批处理实验
        1.2.3 细胞膜色谱分析
        1.2.4 固定化动力学
        1.2.5 共聚焦成像
    1.3 结果
        1.3.1 固体载体的优化
        1.3.2 细胞膜色谱分析结果
        1.3.3 固定化动力学结果
        1.3.4 共聚焦成像结果
    1.4 讨论
    1.5 小结
二、注射用益气复脉(冻干)对心脏毒性保护作用初探
    2.1 试剂与仪器
        2.1.1 实验细胞
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 实验仪器
        2.1.5 主要实验试剂溶液配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞复苏、培养及传代
        2.2.2 H9c2细胞生长曲线
        2.2.3 不同浓度阿霉素对H9c2细胞生存率影响
        2.2.4 不同浓度YQFM对H9c2细胞生存率影响
        2.2.5 细胞内乳酸脱氢酶的测定
        2.2.6 细胞内ATP水平的测定
        2.2.7 Hoechst染色法检测细胞凋亡
        2.2.8 JC-1探针法检测线粒体膜电位
        2.2.9 Western-blot检测凋亡蛋白
        2.2.10 动物实验造模
        2.2.11 血清肌酸激酶(CK)的测定
        2.2.12 心脏组织病理检查
    2.3 结果
        2.3.1 H9c2细胞生长曲线
        2.3.2 CCK-8测定不同浓度的阿霉素对心肌细胞生存率影响
        2.3.3 不同浓度YQFM对H9c2细胞生存率影响
        2.3.4 细胞内乳酸脱氢酶的测定
        2.3.5 细胞内ATP水平的测定结果
        2.3.6 Hoechst染色法检测阿霉素损伤心肌细胞的凋亡情况
        2.3.7 JC-1探针法检测线粒体膜电位
        2.3.8 Western-blot检测凋亡蛋白
        2.3.9 模型建立结果
        2.3.10 小鼠体重和心脏指数变化
        2.3.11 血清肌酸激酶的检测
        2.3.12 HE(苏木精-伊红)染色
    2.4 讨论
    2.5 小结
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述
    综述参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3813478