基于ICAM-1信号通路介导的抗炎药物筛选模型的建立及其应用

发布时间：2023-05-13 02:35

　　炎症是机体或组织受到有害刺激(如受损细胞、刺激物或病原体)时产生的一种应激生理反应,尽管炎症是机体的防御机制,但过度也会对机体产生一定损害。糖皮质激素类抗炎药和非甾体抗炎药是常用的抗炎药,虽然两者在临床上都有较好的抗炎效果,但长期大剂量使用也会对机体造成许多不良反应。因此,建立一个抗炎药物筛选平台,从化合物或中草药中寻找低毒高效的新型抗炎药物,具有重要科学意义和应用价值。本研究构建工程化酵母,利用人微血管内皮细胞HMEC-1模型,建立一个基于细胞间粘附分子1(ICAM-1)信号通路的抗炎药物筛选平台,从化合物库筛选出具有抗炎活性化合物;同时制备一个中草药组分库,从中筛选具有抗炎活性的组分,并通过活性追踪分离出抗炎活性化合物。主要结果如下:1.在酵母表面双杂交的基础上,建立了双通道蛋白表达系统的工程酵母:将淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)αL I domain表达于酵母表面用于和ICAM-1结合,在胞内表达绿色荧光蛋白GFP用于荧光指示。验证了脂多糖(LPS)诱导HMEC-1细胞发生炎症反应,同时ICAM-1显著上调;在显微镜下观察到HMEC-1细胞与工程化酵母特异结合,并通过酶标仪...

【文章页数】：183 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略表
第一章 研究背景
    1 炎症
        1.1 炎症概述
        1.2 炎症的发展途径
        1.3 炎症与慢性疾病
    2 抗炎药物研究进展
        2.1 糖皮质激素抗炎药
        2.2 非甾体类抗炎药(NSAIDs)
            2.2.1 非甾体类抗炎药(NSAIDs)概述
            2.2.2 NSAIDs的历史发展
            2.2.3 NSAIDs的发现
            2.2.4 NSAIDs的类别
            2.2.5 NSAIDs的作用机制
            2.2.6 NSAIDs的不良反应
        2.3 天然产物和中药抗炎活性研究
        2.4 本研究目的与意义
第二章 基于ICAM-1 信号通路抗炎药物筛选模型的建立
    1 引言
        2.材料与方法
        2.1 试剂与仪器
            2.1.1 试验试剂
            2.1.2 主要仪器设备
            2.1.3 主要溶液的配制
        2.2 实验方法
            2.2.1 抗炎药物筛选模型设计
            2.2.2 新型工程酵母载体的设计
            2.2.3 抗炎药物筛选工程化酵母的构建
            2.2.4 HMEC-1 细胞炎症模型的构建和验证
            2.2.5 抗炎药物筛选模型的构建和验证
            2.2.6 分子生物学实验方法
        2.3 数据统计分析
    3 结果
        3.1 抗炎药物筛选工程化酵母的的验证
        3.2 HMEC-1 细胞炎症模型的验证
        3.3 抗炎药物筛选模型的验证
    4 讨论
第三章 利用抗炎药物筛选模型筛选化合物库和中草药组分中抗炎活性成分
    1 引言
    2 材料和方法
        2.1 试剂和仪器
            2.1.1 试验试剂
            2.1.2 主要仪器设备
        2.2 方法
            2.2.1 中草药组分库的制备
            2.2.2 对化合物库和中草药组分库的抗炎活性筛选
            2.2.3 MTT法测定细胞活力
            2.2.4动物实验
        2.3 统计分析
    3 结果
        3.1 化合物库抗炎活性成分的筛选
            3.1.1 化合物库抗炎活性成初步筛选
            3.1.2 化合物在细胞上的活性研究
            3.1.3 化合物在小鼠体内的活性研究
        3.2 中草药组分库抗炎活性成分的筛选
            3.2.1 中草药组分库抗炎活性成分初步筛选
            3.2.2 候选组分在小鼠上抗炎活性验证
    4 讨论
第四章 白英抗炎活性的化学成分研究
    1 引言
        1.1 白英化学成分研究
        1.2 白英药理作用研究
            1.2.1 抗癌作用
            1.2.2 抗炎作用
            1.2.3 抗过敏作用
    2 抗炎活性单体化合物的追踪分离
        2.1 有效部位的获得
        2.2 正丁醇萃取物中活性成分的分离纯化
        2.3 乙酸乙酯萃取中活性成分的分离纯化
    3 化合物鉴定
    4 活性部位洗脱各部分和单体化合物的抗炎活性研究
        4.1 实验材料
        4.2 仪器
        4.3 实验方法
        4.4 实验结果
            4.4.1 白英活性部位洗脱各部分的抗炎活性
            4.4.2 单体化合物的抗炎活性
    5 实验部分
        5.1 实验仪器和材料
        5.2 药材
        5.3 化学成分的具体分离
        5.4 化合物的结构鉴定光谱数据
    6 讨论
第五章 全文总结和展望
    1 结论
    2 研究创新点
    3 展望
参考文献
附录
    附录 Ⅰ:论文中补充表格
    附录 Ⅱ:化合物的NMR图谱
    附录 Ⅲ:作者简历及攻读博士期间发表的论文
致谢



本文编号：3815121