毛蕊异黄酮对秀丽隐杆线虫寿命的影响及分子机制研究

发布时间：2023-05-21 19:07

　　毛蕊异黄酮(calycosin)是一种黄酮类化合物,主要存在于黄芪的根中。目前报道的毛蕊异黄酮的药理作用主要涉及抗菌及抑制病毒作用,能够降血脂、降血糖、减少糖尿病并发症等。毛蕊异黄酮的抗氧化活性也逐渐引起人们的关注研究。但是,目前还未有关于毛蕊异黄酮的抗衰老研究报道。目的:以秀丽隐杆线虫(Caenorhabditiselegans,C.elegans)为生物模型,探讨毛蕊异黄酮对其寿命的影响及其内在的分子机制。方法:1.寿命分析实验:线虫同期化后长至L4期,而后转移至空白对照组和毛蕊异黄酮给药组逐天记录线虫寿命,评价毛蕊异黄酮对线虫寿命的影响并且筛选出给药组中的最佳浓度。2.抗应激能力实验:利用百草枯或给予热刺激引发线虫体内的过氧环境,观察记录线虫的寿命变化,以此判断毛蕊异黄酮的抗氧化性。3.线虫体内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)检测:检测毛蕊异黄酮对线虫体内ROS的清除能力以进一步说明毛蕊异黄酮的抗氧化能力。4.DAF-16和SKN-1的亚细胞定位实验:给药2h后观察记录DAF-16::GFP及SKN-1::GFP转基因线虫中DAF-16的亚细胞定...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 绪论
    1.1 毛蕊异黄酮(calycosin)
    1.2 线虫(Caenorkabditiselegans)
        1.2.1 自然史
        1.2.2 生命周期
        1.2.3 选择线虫作为模式生物的优势
        1.2.4 线虫生命周期的调节
    1.3 DAF-16
        1.3.1 DAF-16的结构
        1.3.2 DAF-16/FOXO的上游信号通路
        1.3.3 DAF-16的活性调节
        1.3.4 DAF-16的下游基因
        1.3.5 UNC-43参与的CAMKII信号通路
    1.4 本论文的研究内容
第2章 秀丽隐杆线虫的一般培养
    2.1 实验材料、试剂和仪器
        2.1.1 线虫、菌株
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验仪器
    2.2 培养基及所用缓冲液配方
        2.2.1 线虫生长固体培养基(NematodeGrowthMedium,NGM).
        2.2.2 线虫生长液体培养基(S-Medium)
        2.2.3 LB液体培养基
        2.2.4 LB固体培养基
        2.2.5 缓冲液
    2.3 秀丽隐杆线虫的一般培养方法
        2.3.1 E.coliOP50的培养和接种
        2.3.2 线虫的转移/传代方法
        2.3.3 线虫的同期化
        2.3.4 线虫的冻存与复苏
        2.3.5 线虫培养过程中的杂菌去除方法
    2.4 小结
第3章 毛蕊异黄酮对秀丽隐杆线虫寿命的延长作用
    3.1 实验材料、试剂和仪器
        3.1.1 线虫、菌株
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 毛蕊异黄酮贮液的配制和保存
        3.2.2 E.coliOP50的灭活
        3.2.3 线虫培养基(NGM)的配制
        3.2.4 E.coliOP50菌液的配制
        3.2.5 线虫寿命实验
        3.2.6 线虫压力应激实验
        3.2.7 急性氧化应激实验
        3.2.8 急性热应激实验
        3.2.9 线虫体内活性氧簇(ROS)检测
        3.2.10 线虫生殖能力检测
        3.2.11 线虫咽泵实验
        3.2.12 统计学方法
    3.3 实验结果
        3.3.1 线虫寿命实验结果
        3.3.2 线虫压力应激实验结果
        3.3.3 急性氧应激实验结果
        3.3.4 急性热应激实验结果
        3.3.5 线虫体内ROS检测实验结果
        3.3.6 线虫限食途径实验结果
    3.4 小结
第4章 毛蕊异黄酮对线虫延寿作用的分子机制研究
    4.1 实验材料、试剂和仪器
        4.1.1 线虫、菌株
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 daf-2(e1370),daf-16(mgDf50),age-1(hx546)突变株寿命实验
        4.2.2 daf-16的基因表达
        4.2.3 DAF-16与SKN-1的亚细胞定位实验
        4.2.4 实时定量RT-PCR实验
        4.2.5 统计学方法
    4.3 实验结果
        4.3.1 毛蕊异黄酮对胰岛素信号通路的影响
        4.3.2 受毛蕊异黄酮调控的转录因子
        4.3.3 UNC-43在毛蕊异黄酮延长线虫寿命中的作用
    4.4 小结
第5章 讨论与展望
    5.1 讨论
        5.1.1 讨论
        5.1.2 结论
    5.2 展望
参考文献
发表论文和科研情况说明
致谢



本文编号：3821280