苦荞清蛋白酶解抗氧化肽的制备及其在ox-LDL致内皮细胞氧化损伤的保护作用研究

发布时间：2023-05-22 02:37

　　目的:采用多种酶水解苦荞清蛋白以制备苦荞抗氧化肽,并探讨苦荞抗氧化肽对ox-LDL诱导HUVEC氧化损伤的保护作用。方法:1.以4种常见蛋白酶(碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶)进行筛选,以水解度(DH)为指标,确定最佳的蛋白酶,并通过单因素试验和响应面法对碱性蛋白酶对苦荞清蛋白的水解工艺进行优化,确定最佳的水解工艺。2.采用超滤,离子交换色谱,葡聚糖凝胶色谱,RP-HPLC对苦荞清蛋白水解液进行分离纯化,以羟自由基清除活性为指标,纯化出抗氧化活性最佳的多肽,并采用N端测序和Q-Tof质谱两种方法对纯化的多肽进行氨基酸序列测定。最后通过测定多肽的羟自由基活性、DPPH清除活性、还原力和脂质过氧化抑制活性来全面分析多肽的体外抗氧化活性。3.以不同浓度的ox-LDL跟HUVEC共同孵育24h,以筛选ox-LDL的造模浓度。实验分组:空白对照组、ox-LDL模型组、P3肽(低浓度组,高浓度组)、GSH阳性药物对照组。以MTT法检测细胞存活率;测定各组细胞培养液中丙二醛(MDA)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定各组细胞中的活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和一氧化氮(...

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
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英文缩略词表
流程图
引言
第一部分 苦荞清蛋白酶解工艺优化
    1.材料与方法
    2.结果
    3.讨论
    4.小结
第二部分 苦荞清蛋白抗氧化肽的分离纯化及鉴定
    1.材料与方法
    2.结果
    3.讨论
    4.小结
第三部分 P3肽对ox-LDL致内皮细胞HUVEC氧化损伤的保护作用研究
    1.材料与方法
    2.结果
    3.讨论
    4.小结
全文总结
参考文献
综述
    参考文献
作者简历
致谢
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