花旗松素在Caco-2细胞模型中吸收转运机制及其抗炎活性研究

发布时间：2023-06-16 18:51

　　目的制备花旗松素单体并测定花旗松素在不同介质中的表观油水分配系数,研究其在结肠癌Caco-2细胞模型中吸收转运机制。方法酶解法制备花旗松素,采用高效液相色谱法测定花旗松素在37℃、不同pH值缓冲盐溶液和水中的饱和溶解度,通过油水分配系数计算公式得花旗松素表观油水分配系数;CCK-8实验考察花旗松素在Caco-2细胞中的安全浓度范围,再利用Caco-2细胞单层模型研究其双侧跨膜吸收转运机制;CCK-8实验考察花旗松素在人脐血管内皮细胞HDMEC细胞中的安全浓度范围,采用脂多糖诱导的HDMEC细胞建立炎症模型,用花旗松素进行干预,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH的活力。结果花旗松素在不同溶剂中的lgP分别为0.29(0.1 mol/L盐酸)、0.48(pH 2.0)、0.46(pH 5.8)、0.34(pH 6.8)、0.26(pH 7.4)、0.38(水);花旗松素质量浓度在50～500μg/mL对Caco-2细胞无明显毒性作用;不同质量浓度花旗松素在Caco-2单层细胞模型中的转运具有时间依赖性,不同质量浓度花旗松素双侧转运P_app值无显著性差异,且均小于1×...

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料
    1.1 细胞株
    1.2 试药
    1.3 仪器
2 方法
    2.1 花旗松素的制备
    2.2 不同p H值缓冲盐溶液中花旗松素油水分配系数（P）测定
        2.2.1 色谱条件
        2.2.2 对照品溶液配制
        2.2.3 供试品溶液配制
        2.2.4 线性关系考察
        2.2.5 精密度考察
        2.2.6 稳定性考察
        2.2.7 不同p H值缓冲盐溶液中花旗松素P的测定
    2.3 Caco-2细胞单层模型的建立
    2.4 CCK-8实验
    2.5 花旗松素跨膜转运样品含量测定
        2.5.1 色谱条件
        2.5.2 线性关系考察
        2.5.3 精密度试验
        2.5.4 稳定性试验
    2.6 花旗松素在Caco-2单层的双侧转运实验
    2.7 花旗松素抗炎活性研究
        2.7.1 不同质量浓度花旗松素对HDMEC生长的影响
        2.7.2 不同质量浓度花旗松素对LPS诱导的损伤HDMEC细胞中LDH活性的影响
    2.8 数据分析
3 结果
    3.1 不同溶液中花旗松素P值测定
    3.2 Caco-2单层细胞模型的建立
    3.3 CCK-8法检测花旗松素对Caco-2细胞的毒性
    3.4 花旗松素在Caco-2单层细胞双侧转运特征
    3.5 花旗松素抗炎活性研究
        3.5.1 不同质量浓度花旗松素对HDMEC细胞的毒性实验
        3.5.2 不同质量浓度花旗松素对LPS诱导的损伤HDMEC细胞中LDH的活性影响
4 讨论



本文编号：3833781