Pd-Ia通过PPARα通路抑制LPS诱导的HUVECs炎症反应的机制研究

发布时间：2023-08-10 20:56

　　目的:动脉粥样硬化(As)作为冠心病、脑中风等多种缺血性心脑血管疾病的主要病理基础,控制其发生、发展是防治这些心脑血管疾病的根本性战略措施。目前研究表明,As是一种慢性血管炎症,血管内皮细胞损伤是As发生的关键因素。内皮细胞损伤后会产生大量的炎症因子,进而促进单核细胞黏附、聚集和激活,启动As的发生。白花前胡甲素(Pd-Ia)是一种钙通道阻滞剂和钾通道开放剂。研究表明,Pd-Ia可以改善急性缺血再灌注心肌中的炎症反应和细胞凋亡。过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARα)是核受体超家族成员之一,其可通过抑制NF-κB和AP-1信号通路而发挥抗炎作用。我们的前期实验结果表明,Pd-Ia能够抑制脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的炎症反应。本课题主要探究Pd-Ia是否通过PPARα通路抑制LPS诱导的HUVECs的炎症反应。方法:体外培养HUVECs,给予LPS(1μg/mL)和不同浓度的Pd-Ia(10,20,40μM/L),应用 Real-time PCR 检测 Pd-Ia 对 Icam、Vcam、E-selectin、MCP-1、MCP-2表达的影响;应用免疫荧光、W...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 动脉粥样硬化
        1.1.1 急性渗出性炎症
        1.1.2 慢性增生性炎症
    1.2 白花前胡甲素(Pd-Ia)
        1.2.1 Pd-Ia简介
        1.2.2 Pd-Ia研究进展
    1.3 PPARs
        1.3.1 PPARs简介
        1.3.2 PPARα
    1.4 与PPAR-α相关的信号通路
        1.4.1 NF-κB信号通路
        1.4.2 AP-1信号通路
        1.4.3 cAMP-PKA信号通路
        1.4.4 MAPK信号通路
    1.5 立题依据
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验细胞
        2.1.2 实验器材
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 主要溶液的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 人脐静脉内皮细胞的提取
        2.2.2 人脐静脉内皮细胞的传代培养
        2.2.3 人脐静脉内皮细胞的冻存
        2.2.4 人脐静脉内皮细胞的复苏
        2.2.5 RNA的提取
        2.2.6 RNA浓度的测定及逆转录
        2.2.7 Real time PCR
        2.2.8 RT-PCR
        2.2.9 ELISA
        2.2.10 蛋白提取及浓度检测(BCA法)
        2.2.11 蛋白免疫印迹(Western Blot)
        2.2.12 免疫荧光
    2.3 数据统计分析
第三章 实验结果
    3.1 Pd-Ia对炎症相关因子表达的影响
    3.2 Pd-Ia对PPARα的影响
        3.2.1 Pd-Ia对PPARα分布的影响
        3.2.2 Pd-Ia对PPARα表达的影响
    3.3 Pd-Ia通过PPARα通路调节NF-κB活性
        3.3.1 Pd-Ia对NF-κB分布和表达的影响
        3.3.2 干扰PPARα基因后,Pd-Ia对IκBα表达的影响
        3.3.3 阻断PPARα后,Pd-Ia对NF-κB表达的影响
    3.4 Pd-Ia对AP-1信号通路的影响
        3.4.1 阻断PPARα后,Pd-Ia对C-JUN表达的影响
    3.5 阻断PKA后,Pd-Ia对PPARα、IL-6表达的影响
        3.5.1 阻断PKA后,Pd-Ia对PPARα、IL-6表达的影响
    3.6 Pd-Ia对MAPK信号通路的影响
        3.6.1 Pd-Ia对P38信号通路的影响
        3.6.2 Pd-Ia对ERK信号通路的影响
        3.6.3 Pd-Ia对JNK信号通路的影响
        3.6.4 阻断PPARα后,Pd-Ia对P38信号通路的影响
第四章 讨论
结论
英文缩略语索引
参考文献
致谢



本文编号：3841202