IL-16通过促进M1型巨噬细胞的极化加重葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠炎症性肠病

发布时间：2024-03-10 20:48

　　目的炎症性肠病是一种慢性、炎症性疾病,临床术后易复发,严重威胁着现代人的生活和健康,目前IBD的病因仍不明确。为了更好地探究IBD的发病机制,开发天然的临床治疗方法,本课题拟利用IL-16基因缺陷小鼠,建立小鼠炎症性肠病模型,探究IL-16在小鼠炎症性肠病发病过程中的作用以及调控机制,为IBD的治疗提供新的研究方向和治疗靶点。方法1.利用C57BL/6小鼠构建IBD模型,采用RT-qPCR、ELISA以及免疫荧光检测IL-16的表达和定位。2.将C57BL/6和IL-16^-/-小鼠分别随机分为两组:WT对照组、WT DSS组、IL-16 KO对照组、IL-16 KO DSS组。DSS模型组给予25 g/LDSS饮水7 d,建立IBD模型,对照组给予正常饮水。建模期间记录小鼠体重绘制体质量变化曲线。7 d后,解剖分离小鼠脾脏和全结肠,HE检测结肠组织病理损伤,TUNEL检测结肠组织细胞凋亡。流式细胞术检测腹腔细胞中巨噬细胞的数量和极化情况(F4/80,CD86),免疫组织化学染色法检测结肠组织中巨噬细胞的分布,RT-qPCR分别检测脾脏和结肠组织中IL-6、IL-1...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
材料与方法
    1 材料
        1.1 主要仪器设备
        1.2 主要实验试剂
        1.3 实验动物
    2 方法
        2.1 IL-16 基因缺陷鼠的构建与鉴定
        2.2 小鼠炎症性肠炎模型的制备
        2.3 骨髓来源原代巨噬细胞(BMDMs)的诱导及活化
        2.4 结肠组织、细胞RNA的提取和实时荧光定量PCR
        2.5 酶联免疫吸附实验(ELISA)检测样品中炎性细胞因子的表达水平
        2.6 流式细胞术检测巨噬细胞的比例和活化
        2.7 免疫组化定位结肠组织中巨噬细胞的浸润
        2.8 免疫荧光组织化学染色检测结肠组织中IL-16 的表达和定位
        2.9 TUNEL检测结肠组织中细胞凋亡率
        2.10 Western Blot检测相关蛋白的表达水平
    3 统计学分析
结果
    1 IL-16在DSS诱导的小鼠结肠炎模型中高表达并加重结肠炎的发病
        1.1 成功构建模型,DSS组小鼠表现为经典的炎症性结肠炎病症
        1.2 DSS组小鼠结肠组织中IL-16 mRNA水平、蛋白水平均显著高表达
        1.3 免疫荧光组织化学染色检测结肠组织中IL-16 的定位和表达
        1.4 成功构建并获得稳定遗传的IL-16 基因缺陷小鼠
        1.5 IL-16 沉默后小鼠结肠炎得到改善
        1.6 TUNEL检测结果提示IL-16 可能间接促进结肠组织细胞凋亡
    2 IL-16 通过促进M1 型巨噬细胞的极化加重DSS诱导的小鼠结肠炎
        2.1 流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞比例及活化程度
        2.2 IL-16 促进结肠炎发病过程中巨噬细胞的浸润
        2.3 IL-16 沉默后M1 型巨噬细胞标志性炎性细胞因子的表达显著降低
    3 在体外实验中,IL-16 促进巨噬细胞向M1 亚型极化
        3.1 流式细胞术结果提示在体外实验中IL-16 促进巨噬细胞极化
        3.2 体外实验中,IL-16 促进M1 型巨噬细胞标志性炎性细胞因子表达
        3.3 Western blot结果提示IL-16 可能通过上调P65 NF-κB蛋白磷酸化促进M1 型巨噬细胞的极化
讨论
结论
参考文献
综述
    综述参考文献
攻读学位期间的研究成果
缩略词表(附录)
致谢



本文编号：3925297