莫能菌素诱导HeLa细胞凋亡的初步机制研究

发布时间：2024-03-17 12:30

　　宫颈癌可见于各年龄段的女性,是女性生殖道最常见的恶性肿瘤之一,宫颈癌的预防与诊治一直备受关注。然而目前临床上常选用的辅助治疗手段--化疗却一直存在着不可忽视的毒副作用及耐药性等问题。因此,找寻安全性高、能克服多药耐药的高效化疗药物迫在眉睫。天然药物(如抗生素)是抗肿瘤药物的重要来源之一。很多研究证明莫能菌素具有潜在的抗癌效用,但目前对莫能菌素诱导宫颈癌细胞作用机制尚不清楚。因此本研究以人宫颈癌Hela细胞作为研究对象,初步探究莫能菌素诱导Hela细胞凋亡的机制。实验通过MTT法检测存活率,分析莫能菌素抑制体外培养的Hela细胞增殖的作用;应用倒置相差显微镜观测Hela细胞的形态变化;姬姆萨染色法和吖啶橙染色法检测Hela细胞凋亡的细胞核形态变化;凋亡鉴定:应用琼脂糖凝胶电泳法检测莫能菌素对细胞DNA断裂的影响,应用Annexin V-FITC/PI法分析不同浓度的莫能菌素对Hela细胞凋亡率的影响;采用caspase活性检测试剂盒检测莫能菌素对凋亡相关caspase酶活性的影响;通过加入不同的caspase抑制剂检验莫能菌素对Hela细胞存活率的影响;通过蛋白质印迹检测药物处理后凋亡相...

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一部分 前言
    1.1 研究背景
        1.1.1 宫颈癌概述
        1.1.2 莫能菌素研究背景
        1.1.3 细胞凋亡
    1.2 实验目的及意义
    1.3 研究技术路线
第二部分 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 供试药物
        2.1.3 试验选用试剂及厂商
        2.1.4 主要仪器及厂商
        2.1.5 实验试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 MTT法检测细胞存活率
        2.2.3 倒置相差显微镜下细胞形态的观察
        2.2.4 姬姆萨染色实验观察Hela形态变化
        2.2.5 吖啶橙染色观察Hela核形态变化
        2.2.6 琼脂糖凝胶电泳
        2.2.7 caspase活性检测试剂盒检测caspase酶活性
        2.2.8 外加caspase抑制剂检测细胞存活率变化
        2.2.9 Annexin V-FITC/PI双染法
        2.2.10 蛋白质含量检测所用方法
        2.2.11 JC-1试剂盒检测线粒体去极化
        2.2.12 活性氧试剂盒检测细胞内ROS水平变化
    2.3 数据处理
第三部分 实验结果及讨论
    3.1 实验结果
        3.1.1 MTT实验检测细胞存活率
        3.1.2 倒置显微镜观察细胞形态变化
        3.1.3 姬姆萨染色观察Hela形态变化
        3.1.4 吖啶橙染色观察细胞核形态变化
        3.1.5 琼脂糖凝胶电泳
        3.1.6 Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡
        3.1.7 caspase酶活检测
        3.1.8 外加caspase抑制剂检测细胞存活率变化
        3.1.9 蛋白质印迹法检测细胞中凋亡相关蛋白的变化
        3.1.10 JC-1试剂盒检测线粒体去极化
        3.1.11 活性氧试剂盒检测细胞内ROS水平
    3.2 讨论
第四部分 结论及展望
    4.1 结论
    4.2 展望
参考文献
致谢



本文编号：3931034