山核桃叶总黄酮经miR-34a/SIRT1通路抗人脐静脉内皮细胞衰老的研究

发布时间：2024-04-13 04:00

　　目的:研究表明,动脉粥样硬化症(AS)与内皮细胞衰老密切相关,我们的前期研究发现山核桃叶总黄酮具有抗氧化、调节细胞增殖等作用,在调控细胞成熟和衰老方面中具有潜在的应用价值。本研究以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老为细胞模型,探讨山核桃叶总黄酮(TFs)的抗衰老作用,并以miR-34a/SIRT1调控通路为基础探索其治疗AS的内在机制,为进一步发掘AS的治疗靶点,开发有效药物,丰富中医药治疗机理,为AS的防治探索一条新的思路和途径。方法:体外培养HUVECs细胞株,用Ang Ⅱ诱导建立衰老细胞模型。采用MTS法检测细胞存活率,β-半乳糖苷酶检测内皮细胞衰老程度,流式细胞术分析细胞周期,硝酸还原酶法检测NO含量,荧光定量PCR检测miRNA和mRNAs的表达,采用Western blotting技术检测细胞中蛋白表达水平。并用miR-34a模拟物(miR-34amimic)、miR-34a 抑制剂(miR-34a inhibitor)和 SIRT1 抑制剂(NAM)转染HUVEC细胞,探讨miR-34a/SIRT1信号通路在山核桃叶总黄酮抗内皮细胞衰老过程...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１－ａｌ染色观察Ａｎｌｌ对ＨＵＶＥＣｓ的影响皿ｘ４００，?＂＝４

ｐ－ｇａｌ是公认的鉴定细胞衰老的生物学标志。衰老细胞会出现Ｐ－ｇａｌ异常高表??达。Ｐ－ｇａｌ染色法结果表明，空白对照组几乎不出现蓝色的Ｐ－ｇａｌ染色阳性细胞，??而Ａｎ班诱导姐细胞蓝染阳性细胞显著增加（戶＜０．０５），见图１－１，表１－４。??攻—声?Ｖ?壬袁巧’，乂；＇?：Ｖ....

图１－５山核桃叶总黄丽干预对细胞周期的影响批＝４）??

期细胞比例明盧增加，Ｓ期细胞比例减少。山核桃叶总黄丽预处理组与模型组相??比较Ｇ０／Ｇ１期细胞比例减少，Ｓ期细胞比例增加，且在山核桃叶总黄砸２．５ｎｇ／ｍＬ??浓度作用最明显。见图１－５，表＾７。??〇?〇??Ａ?导—?穿—??Ｉ?Ｈ?Ｉ?Ｉ?旷?Ｉ??謬實－ｆｔ?麵胃－?ｉ?．....

图1-1miR-34a的相对表达量

衰老细胞给与不同浓度山核桃叶总黄丽预处理后，巧光定量ＰＣ民检测ｉＲ－３４ａ、Ｐ５３、ＳＩＲＴ１、Ｅ２Ｆ１的相对表达量。结果显示，与空白对照组相型组细胞中ｍｉＲ－３４ａ、Ｐ５３的相对表达量明显增加，山核桃叶总黄丽能显ｉＲ－３４ａ、Ｐ５３的表达量，在２．５帖ＺｍＬ时作用最明显。与空白....

图1-9SIRTImRNA的相对表达量

图１－１０?Ｅ２Ｆ１?ｍＲＮＡ的相对表达量??核桃叶总黄酬对ＳＩ民Ｔ１、乙醜化Ｐ５３、Ｐ２１、ｃｄｋ２蛋白表达水平的影响??通过前期实验结果显示，２．５＾ｉｇ／ｍＬ浓度的山核桃叶总黄禍对缓解ＨＵＶＥＣ作用较明显。现综合考虑后选用２．５帖／ｍＬ浓度的山核桃叶总黄丽进行衰蛋白的检测。....

本文编号：3952452