丹参酮ⅡA通过激活PXR对H 2 O 2 致内皮细胞损伤的保护作用
发布时间：2025-01-04 06:21
目的:孕烷X受体（pregnane X receptor,PXR）作为核受体（nuclear receptor,NR）超家族成员之一,广泛分布在肝脏、肠、肾脏中,参与体内众多药物代谢酶及转运体的调控,在机体内内源性和外源性物质和药物的吸收、分布、代谢及排泄等过程中扮演重要角色。前期实验室构建了基于分泌型Gaussia荧光素酶报告基因PXR-CYP3A4通路的稳定工程细胞株并成功用于PXR激活效应的快速筛选,发现丹参中主要有效脂溶性成分丹参酮ⅡA（Tanshinone ⅡA,Tan ⅡA）具有明显的PXR激活效应,同时Tan ⅡA亦被证实具有明显的心血管保护效应。近来文献报道PXR除了在肝脏表达外,在心血管系统中也有大量表达,那么Tan ⅡA的潜在药理效应及其心血管保护作用是否与其激活PXR有关。因此,本课题主要是基于PXR研究Tan ⅡA血管保护的效应机制。依据PXR效应的筛选结果,首先通过人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial,HUVECs）细胞为载体,进一步确证Tan ⅡA对PXR表达以及活性的影响,利用过氧化氢（hydrogen pero...
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文缩略词
摘要
Abstract
第一部分 丹参酮ⅡA对HUVECs中PXR的激活作用
1 前言
2 材料与方法
2.1 药品与试剂
2.2 仪器与设备
2.3 细胞培养
2.4 药物母液配制
2.5 CCK-8 检测HUVECs细胞活力
2.6 q RT-PCR检测PXR和CYP3A4的mRNA表达
2.7 Western-blot检测PXR的蛋白表达
2.8 siRNA转染PXR基因
2.9 统计分析
3 结果
3.1 丹参酮ⅡA和H2O2对HUVECs细胞活力的影响
3.2 丹参酮ⅡA对HUVECs细胞PXR mRNA和蛋白的影响
3.3 丹参酮ⅡA对HUVECs细胞CYP3A4 mRNA影响
4 讨论
第二部分 丹参酮ⅡA通过激活PXR保护H2O2诱导的细胞氧化损伤
1 前言
2 材料与方法
2.1 药品与试剂
2.2 仪器与设备
2.3 细胞培养
2.4 药物母液配制
2.5 CCK-8 检测HUVECs细胞活力
2.6 HUVECs细胞形态学观察
2.7 流式细胞术检测HUVECs细胞ROS含量
2.8 ELISA检测HUVECs细胞GSH和GSSG含量
2.9 qRT-PCR检测HUVECs细胞PXR、MDR1、GST、GPx和GSTM1 mRNA表达
2.10 siRNA转染HUVECs细胞PXR基因
2.11 统计分析
3 结果
3.1 丹参酮ⅡA和H2O2对HUVECs细胞形态的影响
3.2 PXR在丹参酮ⅡA保护H2O2诱导的HUVECs细胞损伤的作用
3.3 PXR对丹参酮ⅡA诱导的代谢酶和抗氧化酶基因表达的影响
3.4 PXR对丹参酮ⅡA诱导的抗氧化酶蛋白表达的影响
4 讨论
第三部分 丹参酮ⅡA激活PXR保护H2O2诱导的细胞凋亡和炎症
1 前言
2 材料与方法
2.1 药品与试剂
2.2 仪器与设备
2.3 细胞培养
2.4 药物母液配制
2.5 细胞凋亡检测
2.6 线粒体膜电位检测
2.7 细胞Caspace3/7、8、9 检测
2.8 Hoechst 33342 凋亡形态学检测
2.9 Western-blot检测凋亡信号分子
2.10 高内涵检测凋亡诱导因子(AIF)的易位
2.11 DNA fragment检测
2.12 丹参酮ⅡA对H2O2诱导HUVECS细胞粘附的影响
2.13 PXR对丹参酮ⅡA保护H2O2诱导HUVECS细胞IL-8 的影响
2.14 统计分析
3 结果
3.1 PXR对H2O2诱导的HUVECs细胞凋亡的影响
3.2 丹参酮ⅡA对H2O2损伤的细胞核和Caspase酶的影响
3.3 PXR对H2O2诱导的HUVECs细胞凋亡信号分子的影响
3.4 高内涵检测丹参酮ⅡA对凋亡诱导因子核内移位的影响
3.5 丹参酮ⅡA对H2O2诱导的HUVECs细胞DNA fragment的影响
3.6 Tan ⅡA对H2O2诱导HUVECS细胞粘附的影响
3.7 PXR对丹参酮ⅡA保护H2O2诱导HUVECS细胞炎症的影响
4 讨论
结论
参考文献
附录 个人简历
致谢
综述 PXR/CYP的生物学特性及参与体内代谢的作用
参考文献
本文编号：4023033
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
英文缩略词
摘要
Abstract
第一部分 丹参酮ⅡA对HUVECs中PXR的激活作用
1 前言
2 材料与方法
2.1 药品与试剂
2.2 仪器与设备
2.3 细胞培养
2.4 药物母液配制
2.5 CCK-8 检测HUVECs细胞活力
2.6 q RT-PCR检测PXR和CYP3A4的mRNA表达
2.7 Western-blot检测PXR的蛋白表达
2.8 siRNA转染PXR基因
2.9 统计分析
3 结果
3.1 丹参酮ⅡA和H2O2对HUVECs细胞活力的影响
3.2 丹参酮ⅡA对HUVECs细胞PXR mRNA和蛋白的影响
3.3 丹参酮ⅡA对HUVECs细胞CYP3A4 mRNA影响
4 讨论
第二部分 丹参酮ⅡA通过激活PXR保护H2O2诱导的细胞氧化损伤
1 前言
2 材料与方法
2.1 药品与试剂
2.2 仪器与设备
2.3 细胞培养
2.4 药物母液配制
2.5 CCK-8 检测HUVECs细胞活力
2.6 HUVECs细胞形态学观察
2.7 流式细胞术检测HUVECs细胞ROS含量
2.8 ELISA检测HUVECs细胞GSH和GSSG含量
2.9 qRT-PCR检测HUVECs细胞PXR、MDR1、GST、GPx和GSTM1 mRNA表达
2.10 siRNA转染HUVECs细胞PXR基因
2.11 统计分析
3 结果
3.1 丹参酮ⅡA和H2O2对HUVECs细胞形态的影响
3.2 PXR在丹参酮ⅡA保护H2O2诱导的HUVECs细胞损伤的作用
3.3 PXR对丹参酮ⅡA诱导的代谢酶和抗氧化酶基因表达的影响
3.4 PXR对丹参酮ⅡA诱导的抗氧化酶蛋白表达的影响
4 讨论
第三部分 丹参酮ⅡA激活PXR保护H2O2诱导的细胞凋亡和炎症
1 前言
2 材料与方法
2.1 药品与试剂
2.2 仪器与设备
2.3 细胞培养
2.4 药物母液配制
2.5 细胞凋亡检测
2.6 线粒体膜电位检测
2.7 细胞Caspace3/7、8、9 检测
2.8 Hoechst 33342 凋亡形态学检测
2.9 Western-blot检测凋亡信号分子
2.10 高内涵检测凋亡诱导因子(AIF)的易位
2.11 DNA fragment检测
2.12 丹参酮ⅡA对H2O2诱导HUVECS细胞粘附的影响
2.13 PXR对丹参酮ⅡA保护H2O2诱导HUVECS细胞IL-8 的影响
2.14 统计分析
3 结果
3.1 PXR对H2O2诱导的HUVECs细胞凋亡的影响
3.2 丹参酮ⅡA对H2O2损伤的细胞核和Caspase酶的影响
3.3 PXR对H2O2诱导的HUVECs细胞凋亡信号分子的影响
3.4 高内涵检测丹参酮ⅡA对凋亡诱导因子核内移位的影响
3.5 丹参酮ⅡA对H2O2诱导的HUVECs细胞DNA fragment的影响
3.6 Tan ⅡA对H2O2诱导HUVECS细胞粘附的影响
3.7 PXR对丹参酮ⅡA保护H2O2诱导HUVECS细胞炎症的影响
4 讨论
结论
参考文献
附录 个人简历
致谢
综述 PXR/CYP的生物学特性及参与体内代谢的作用
参考文献
本文编号：4023033
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zhongyaolw/4023033.html
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