两种频率电项针对AD模型大鼠空间学习记忆能力分子机制的影响

发布时间：2017-10-19 21:07

  本文关键词：两种频率电项针对AD模型大鼠空间学习记忆能力分子机制的影响

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【摘要】：目的：探讨两种频率电项针对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)模型大鼠空间学习记忆能力分子机制的影响,以期更好地为电项针治疗AD提供客观的理论依据。 方法：20月龄、健康、清洁级、雄性SD大鼠适应性喂养1周,经Morris水迷宫实验淘汰掉先天愚钝鼠后,根据体重(320±50g)从小到大编号,随机分为空白组、假损伤组、模型组、2Hz治疗组和50Hz治疗组,每组10只。空白组仅给予正常饮食、饮水。假损伤组给予胃饲及腹腔注射与模型组等量的生理盐水。模型组与治疗组大鼠,每天给予20mg·ml-1的AlCl3水溶液2m1胃饲,48mg·kg-1的D-半乳糖腹腔注射,连续8周,余同空白组。 穴位与针具常规消毒,取大鼠项部双侧的“风池”、“供血”,用Φ0.40mm×25mm毫针,直刺10mm,接DJ-6805D型脉冲电针仪,一组导线同侧上下连接,正极连“风池”穴,负极连“供血”穴。治疗组根据频率分为2Hz治疗组和50Hz治疗组。针刺通电持续刺激20min,每天1次,每周休息1天,连续治疗4周。空白组、假损伤组、模型组不予治疗,但采取与治疗组同样时间的抓取、绑定。 以Morris水迷宫实验检测AD大鼠行为学变化；以光、电镜检测海马组织形态学、神经元超微结构；以免疫组化技术观察pCREB1、BDNF、TrkB、 Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白的阳性表达；以原位杂交技术观察pCREB1、 BDNFmRNA的阳性表达。应用motic image3.2软件对图像进行分析,并用SPSS17.0统计软件处理收据。 结果： 1.行为学：造模前各组大鼠的逃避潜伏期、穿越平台次数和靶象限游泳路程百分比无差异(P0.05)；造模完成后模型组、2Hz治疗组及50Hz治疗组与空白组及假损伤组比较,逃避潜伏期、穿越平台次数和靶象限游泳路程百分比有明显差异(P0.01)；治疗结束后：与空白组及假损伤组比较,模型组逃避潜伏期、穿越平台次数和靶象限游泳路程百分比有明显差异(P0.01)；与模型组比较,2Hz治疗组的逃避潜伏期、穿越平台次数和靶象限游泳路程百分比有差异(P0.05),而50Hz治疗组的有明显差异(P0.01)；与2Hz治疗组比较,50Hz治疗组的逃避潜伏期、穿越平台次数和靶象限游泳路程百分比有差异(P0.05)。 2.组织形态学：空白组细胞形态完整、染色均匀,核仁清晰。假损伤组存在少数炎性细胞。模型组细胞固缩,数目明显减少,排列极不规整,部分细胞核溶解固缩,核周出现大量空泡物质。2Hz治疗组有少量细胞形态固缩,染色均匀,排列欠规整。50Hz治疗组偶见细胞固缩,染色均匀,排列较规整,核仁明显,细胞质染色清晰。 3.神经元超微结构：空白组及假损伤组未见明显变化；模型组溶酶体及脂褐素增多,神经元内尼氏体分散,线粒体空化,突触小泡减少。2Hz治疗组较模型组略有改善,有脂褐素存在,突触小泡数目略有增加。50Hz治疗组较模型组改善明显,神经元形态尚可,尼氏体相对较少,突触小泡数目较多,部分线粒体空化。 4.免疫组化结果：(1)与空白组及假损伤组比较,模型组pCREB1、 BDNF、TrkB、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白阳性细胞表达检测均有显著性差异(P0.01)。(2)与模型组比较,2Hz治疗组pCREB1、BDNF、TrkB、 Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白阳性细胞表达有差异(P0.05),50Hz治疗组pCREB1、BDNF、TrkB、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白阳性细胞表达(P0.01)。(3)与2Hz治疗组比较50Hz治疗组pCREB1、BDNF、TrkB、 Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白阳性细胞表达(P0.05)。 5.原位杂交结果：(1)与空白组及假损伤组比较,模型组pCREB1mRNA、BDNFmRNA的阳性细胞表达有明显差异(P0.01)；(2)与模型组比较,2Hz治疗组pCREB1mRNA、BDNFmRNA阳性细胞表达有明显差异(P0.05),50Hz治疗组有明显差异(P0.01)；(3)与2Hz治疗组比较,pCREB1mRNA和BDNFmRNA阳性细胞表达有差异(P0.05)。 结论： 1.两种频率电项针均可缩短AD模型大鼠的平均逃避潜伏期,提高靶象限游泳路程百分比,增加其穿越平台次数,且50Hz治疗组疗效好于2Hz治疗组。 2.两种频率电项针均可改善AD模型大鼠海马神经细胞组织形态和超微结构,且50Hz治疗组疗效好于2Hz治疗组。 3.两种频率电项针均可增加pCREB1和BDNF蛋白及mRNA、以及TrkB蛋白阳性细胞的表达,从而提高对海马神经元的保护,且50Hz治疗组疗效好于2Hz治疗组。 4.两种频率电项针均可增加Bcl-2阳性细胞的表达,减少Bax和Caspase-3阳性细胞的表达,从而减少海马神经元的凋亡,且50Hz治疗组疗效好于2Hz治疗组。 5.电项针对AD模型大鼠的治疗作用与频率快慢有关,50Hz的疗效优于2Hz的疗效。
【关键词】：频率 电项针 阿尔茨海默病 分子机制
【学位授予单位】：黑龙江中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R245.97;R749.16
【目录】：

• 缩略语表4-6
• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 前言13-14
• 文献综述14-28
• 1 中医学对痴呆的认识14-21
• 1.1. 痴呆的病名沿革14
• 1.2. 痴呆的临床表现14-15
• 1.3. 痴呆的病因病机15-17
• 1.4. 痴呆的治疗概况17-21
• 2 现代医学对AD的认识21-28
• 2.1. AD的危险因素21-22
• 2.2. AD的临床表现22-23
• 2.3. AD的流行病学23-24
• 2.4. AD的发病机制24-26
• 2.5. AD的治疗概况26-28
• 实验研究28-47
• 1 实验材料28-29
• 1.1. 实验动物28
• 1.2 主要仪器与试剂28-29
• 2 实验方法29-35
• 2.1. 动物挑选与分组29
• 2.2. 模型制备及成功标准29
• 2.3. 针刺选穴及治疗方法29-30
• 2.4. Morris水迷宫行为学检测30-31
• 2.5. 固定与取材31-32
• 2.6. 海马光、电镜检测32-33
• 2.7. 免疫组化技术检测pCREB1、BDNF、TrkB、Bcl-2/Bax、Caspase-3蛋白33
• 2.8. 原位杂交技术检测检测pCREB1、BDNFmRNA33-34
• 2.9. 图像分析34
• 2.10. 统计处理34
• 2.11. 附实验技术路线图34-35
• 3 实验结果35-47
• 3.1. 两种频率电项针对AD模型大鼠行为学的影响35-40
• 3.2. 两种频率电项针对AD模型大鼠组织形态学的影响40
• 3.3. 两种频率电项针对AD模型大鼠海马神经超微结构的影响40-41
• 3.4. 两种频率电项针对pCREB1mRNA、蛋白阳性表达的影响41-42
• 3.5. 两种频率电项针对BDNFmRNA、蛋白阳性表达的影响42-43
• 3.6. 两种频率电项针对TrkB蛋白阳性表达的影响43-44
• 3.7. 两种频率电项针对Bcl-2、Bax蛋白阳性表达的影响44-46
• 3.8. 两种频率电项针对Caspase-3蛋白阳性表达的影响46-47
• 讨论47-62
• 1 实验方案的选择47-52
• 1.1. AD动物模型的评价与选择47-49
• 1.2. 电项针参数的选择49-52
• 1.3 针刺穴位的选择及其作用机制52
• 2 两种频率电项针对AD模型大鼠空间学习记忆能力的影响52-53
• 3 两种频率电项针对AD模型大鼠海马组织形态结构的影响53-54
• 4 两种频率电项针对AD模型大鼠海马组织pCREB1-BDNF-TrkB阳性表达的影响54-59
• 5 两种频率电项针对AD模型大鼠海马组织Bcl-2/Bax及caspase-3阳性表达的影响59-60
• 6 课题不足与展望60-62
• 结论62-63
• 附图63-73
• 致谢73-74
• 参考文献74-91
• 附录91-96
• 个人简介96

【参考文献】

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本文编号：1063317